Name: Protocolo para la hipertermia corporal Larga Duración Total en ratones (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-25T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 10 s
Description: Aprende a inducir hipertermia corporal total en ratones para estudiar respuestas inmunitarias y mecanismos fiebre durante 12-24 horas. Este protocolo estandarizado facilita investigaciones reproducibles en neurociencia y fisiología.

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1. Ética Animal Antes de realizar la hipertermia larga duración en ratones asegurarse de que el procedimiento ha sido aprobado por el Cuidado de Animales institucional y el empleo. Todos los procedimientos descritos en este documento y se muestra en el video que lo acompaña fueron aprobados por el Comité Institucional de Ética Animal del Instituto Nacional de Inmunología. 2. Entendimiento hipertermia La hipertermia de todo el cuerpo (WBH) se administra mediante la colocación de los animales en jaulas precalentado que se colocan en una incubadora mantenida a 39,5 ° C. En la estandarización de protocolo, un sensor de temperatura que se implantan quirúrgicamente en los ratones y su temperatura corporal se controló en diferentes condiciones experimentales. Se observó que, al colocar los animales en ambiente caliente, su temperatura aumenta gradualmente desde 37 ° C a un máximo de 42 ° C durante la duración de 100 min (Figura 1). The resultante &quot;pico&quot; de la temperatura es intrigante que la temperatura interna del cuerpo disparo incluso superior a la temperatura ambiental externa. Cuando la temperatura corporal superior a 40 ° C, el animal muestra signos de estrés y la deshidratación, tales como agentes humectantes alrededor del hocico. Aumento de la temperatura corporal superior a 40 º C, dará lugar a la humedad y el estrés irreversible e incluso la muerte de los animales debido al estrés térmico. Por lo tanto, es importante para prevenir los picos de temperatura durante el curso de la hipertermia. Este fenómeno de los picos de alta temperatura está asociado con la hiperactividad física de los animales durante la exposición hipertermia. Picos de temperatura similares fueron observados por otros grupos y también estaban asociados con la hiperactividad física del animal al ser introducido en el medio ambiente con temperaturas más altas 10. En el protocolo, los ratones se inmovilizan durante la exposición hipertermia. Comose muestra en la Figura 2, la inmovilización de los animales evita los picos de temperatura. Hemos utilizado 8-12 semanas de edad BALB / cJ ratones para demostrar este protocolo. El protocolo no está restringida a un tipo particular / deformación de los ratones. 3. Preparación para el Experimento 3,1 Incubadora Este experimento se puede realizar en una incubadora de CO 2 normales, ya que tienen un buen control de temperatura. Desconecte el suministro de gas CO 2 y retire la bandeja de retención de agua de la incubadora de CO 2. En algunos modelos de incubadoras es posible desactivar el controlador de CO 2. Organizar estantes de la incubadora para que una jaula ratones podrían ser colocados convenientemente dentro. Establecer la temperatura de la incubadora a 39,5 ° C. 3,2 Jaulas Típicamente, la hipertermia experimento se realiza en 4 ratones a la vez. Dos jaulas se requieren; ene se coloca dentro de la incubadora, y el otro se coloca fuera a temperatura ambiente. Ropa de cama de las jaulas se evita, como las manchas de ropa de cama que se humedezca con el tiempo que da lugar a una aplicación no uniforme de temperatura dentro de la jaula. La caja exterior debe tener bolitas de comida y una botella de agua. 3,3 Ratones tubos de inmovilización Durante el curso de la primera 4 ciclos de ratones hipertermia son inmovilizados en tubos perforados. Estos tubos de inmovilización puede estar hecha de tubos de 50 &#39;de centrífuga&#39; ml por agujeros de la perforación 3 mm en todo su cuerpo y cuatro de tales tubos se requiere. El tubo de 50 ml convenientemente se puede inmovilizar BALB / cJ ratones que tienen más de 8 semanas. Tubos de tamaños apropiados pueden ser necesarios para algunas cepa inusualmente diferente de ratones o de los ratones que son muy jóvenes o mayores de 50 semanas. Colocar los tubos de inmovilización y una jaula dentro de la incubadora mantenida a 39,5 ° C. Espere por lo menos 2 horas para que la jaula y metubos mmobilization alcanzar la temperatura de la incubadora. 4. Primer ciclo de la hipertermia Los ratones pueden sufrir deshidratación durante la exposición hipertermia. Por lo tanto, antes de comenzar el experimento, se administran 0,5 ml de solución salina normal por vía intraperitoneal a cada ratón. Use una aguja de 26 G con jeringa de 1 ml. Quítese rápidamente la jaula colocada en la incubadora, coloque un animal en cada uno de los tubos de inmovilización y coloque la jaula en la incubadora. Registre el tiempo. Es esencial mantener la jaula en el mismo lugar en la incubadora cada vez. Después de 90 minutos, sacar la jaula de la incubadora. Liberar los animales de los tubos de inmovilización y colocarlos en la jaula a temperatura normal con un fácil acceso a comida y agua. Colocar los tubos vacíos de inmovilización de nuevo en la incubadora. Después de 15 min, el segundo ciclo de la hipertermia se inicia mediante la entrega de 0.5 ml de solución salina por vía intraperitoneal a cada ratón. Luego se inmoviliza en tubos de 50 ml de inmovilización perforadas y colocadas en la incubadora. 5. Los ciclos posteriores hipertermia Por primera 4 ciclos, es esencial para inmovilizar los ratones durante la exposición, la hipertermia y para los dos primeros ciclos, inyección de solución salina se administra antes de comenzar el período de hipertermia. Después de estos ciclos de hipertermia seguido de un descanso se completan, los ratones conseguir aclimatarse y no vuelven hiperactivos durante la exposición hipertermia. La inyección intraperitoneal de solución salina puede no ser necesario si los ratones fácilmente tomar alimentos y agua durante el tiempo de reposo. 6. Después de todos los ciclos completados, el último paso consiste en examinar a los animales No debería haber ninguna muerte durante los ciclos de hipertermia. Cada animal tiene que ser vigilado muy cuidadosamente en el primercuantos ciclos. Rápidamente buscar cualquier humectante alrededor del hocico. Este síntoma es una firma de deshidratación. Los ratones con síntomas tales inmediatamente se debe dar 0,5 ml de solución salina normal ip y el resto a temperatura ambiente. La mayoría de los ratones inmovilizados no se requiere ninguna atención adicional y con éxito soportar los esfuerzos de la hipertermia. Después de completar los ciclos requeridos, los animales pueden parecer débil y deshidratado, pero rápidamente se recuperan en pocas horas. <img src="/files/ftp_upload/3801/3801fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Variación de la temperatura corporal de los ratones cuando la jaula se colocó en una incubadora a 39,5 ° C. Después de 90 min la jaula se retiró de la incubadora y se colocaron a 25 º C. Los círculos rojos indican los picos de alta temperatura. <img src="/files/ftp_upload/3801/3801fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Variación de la temperatu cuerpo de núcleore de una Ratones inmovilizados durante los ciclos de hipertermia. Después de inmovilizar el animal, los picos de las altas temperaturas no se observa cuando la jaula se colocó a 39,5 ° C.

<ol><li>Braude, A. I., Beck, J., Zalesky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Febrile+response+to+bacterial+pyrogens+in+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Febrile response to bacterial pyrogens in leukemia.</a> Blood. 16, 1279(1960).</li>
<li>Dovern, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperthermic+intraperitoneal+chemotherapy+added+to+the+treatment+of+ovarian+cancer.+A+review+of+achieved+results+and+complications%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Gynaecol.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Hyperthermic intraperitoneal chemotherapy added to the treatment of ovarian cancer. A review of achieved results and complications.</a> Eur. J. Gynaecol. Oncol. 31, 256(2010).</li>
<li>Gaworek, J., Mayer, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+whole+body+hyperthermia+in+oncology%3A+fatal+heat+for+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Pflege.+Z%22%5BJournal%5D)">Systemic whole body hyperthermia in oncology: fatal heat for tumor cells.</a> Pflege. Z. 56, 15(2003).</li>
<li>Hegewisch-Becker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+whole+body+hyperthermia+%2841.8+degrees+C%29+on+the+frequency+of+tumor+cells+in+the+peripheral+blood+of+patients+with+advanced+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of whole body hyperthermia (41.8 degrees C) on the frequency of tumor cells in the peripheral blood of patients with advanced malignancies.</a> Clin. Cancer Res. 9, 2079( ).</li>
<li>Jia, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+B16+murine+melanoma+metastasis+and+enhancement+of+immunity+by+fever-range+whole+body+hyperthermia%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Hyperthermia%22%5BJournal%5D)">Inhibition of B16 murine melanoma metastasis and enhancement of immunity by fever-range whole body hyperthermia.</a> Int. J. Hyperthermia. 27, 275(2011).</li>
<li>Maluta, S., Dall'oglio, S., Nadalini, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+for+intermediate+and+high-risk+prostate+cancer%3A+controversial+issues+and+the+role+of+hyperthermia%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Hyperthermia%22%5BJournal%5D)">Treatment for intermediate and high-risk prostate cancer: controversial issues and the role of hyperthermia.</a> Int. J. Hyperthermia. 26, 765(2010).</li>
<li>Moyer, H. R., Delman, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+hyperthermia+in+optimizing+tumor+response+to+regional+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Hyperthermia%22%5BJournal%5D)">The role of hyperthermia in optimizing tumor response to regional therapy.</a> Int. J. Hyperthermia. 24, 251(2008).</li>
<li>Muthana, M., Multhoff, G., Pockley, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour+infiltrating+host+cells+and+their+significance+for+hyperthermia%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Hyperthermia%22%5BJournal%5D)">Tumour infiltrating host cells and their significance for hyperthermia.</a> Int. J. Hyperthermia. 26, 247(2010).</li>
<li>Ostberg, J. R., Repasky, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+effects+of+two+different+whole+body+hyperthermia+protocols+on+the+distribution+of+murine+leukocyte+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Hyperthermia%22%5BJournal%5D)">Comparison of the effects of two different whole body hyperthermia protocols on the distribution of murine leukocyte populations.</a> Int. J. Hyperthermia. 16, 29(2000).</li>
<li>Pritchard, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocols+for+simulating+the+thermal+component+of+fever%3A+preclinical+and+clinical+experience%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Protocols for simulating the thermal component of fever: preclinical and clinical experience.</a> Methods. 32, 54(2004).</li>
<li>Repasky, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+mild+whole-body+hyperthermia+protocols+using+human+breast%2C+ovarian%2C+and+colon+tumors+grown+in+severe+combined+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Dis.+Obstet.+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Characterization of mild whole-body hyperthermia protocols using human breast, ovarian, and colon tumors grown in severe combined immunodeficient mice.</a> Infect. Dis. Obstet. Gynecol. 7, 19(1999).</li>
<li>Willnow, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+otherwise+incurable+tumor+diseases+in+childhood+using+whole-body+hyperthermia+and+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Dtsch.+Med.+Wochenschr%22%5BJournal%5D)">Treatment of otherwise incurable tumor diseases in childhood using whole-body hyperthermia and chemotherapy.</a> Dtsch. Med. Wochenschr. 114, 208(1989).</li>
</ol>

No tenemos nada que revelar.

<html> Ya en el 5.000 aC, los médicos egipcios tumores tratados con calor. Los griegos reconocido el valor de calor en algunos tratamientos médicos. Los textos más antiguos de la Ley de Moisés mención de aguas termales (Génesis 36:24) para elevar la temperatura del cuerpo terapéuticamente. Las técnicas anteriores emplean ya sea el uso de extractos microbianos pirogénicas para la inducción de fiebre o baños de agua caliente para la inducción de hipertermia 1. Sin embargo, ninguno de...

<table border="1"><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Termistor </td><td> Amidata </td><td> 528-8558 </td><td></td></tr><tr><td> CO 2 incubadora </td><td> Heraeus </td><td> B5060 EK-CO2 </td><td></td></tr><tr><td> Ratones jaulas </td><td> Citizen INDUSTRIES LTD. </td><td></td><td> Tipo B 365X207X190 cm </td></tr><tr><td> Alimentos para animales </td><td> Provimi India </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Botella de agua para jaula </td><td> Proveedor local </td><td></td><td> Botella de cristal </td></tr><tr><td> Soldador </td><td> Solderon, India </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 50 ml tubos de centrífuga </td><td> BD Biosciences </td><td> 352070 </td><td></td></tr><tr><td> Timer </td><td> Proveedor local </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 1 ml jeringa con aguja 26G </td><td> BD Biosciences </td><td> 309602 </td><td></td></tr><tr><td> Salina </td><td> Proveedor local </td><td></td><td></td></tr></table>

protocolo para la hipertermia corporal larga duración total en ratones

Protocol for Long Duration Whole Body Hyperthermia in Mice

La hipertermia es un término general utilizado para definir el aumento de la temperatura corporal por encima de lo normal. A menudo se utiliza para describir el aumento de la temperatura corporal central que se observa durante la fiebre. El uso de la hipertermia como un adyuvante se ha convertido en un procedimiento prometedor para la regresión del tumor en el campo de la biología del cáncer. Para este propósito, el requisito más importante es tener protocolos de calentamiento seguro y uniforme. Hemos desarrollado un protocolo para la hipertermia (cuerpo entero) en ratones. En este protocolo, los animales son expuestos a ciclos de hipertermia durante 90 minutos seguido de un período de descanso de 15 min. Durante este periodo los ratones tienen fácil acceso a comida y agua. Altos picos de temperatura corporal en los ratones durante la primera exposición de algunos ciclos de hipertermia se impide mediante la inmovilización del animal. Además, solución salina normal se administra en ciclos primero para reducir al mínimo los efectos de la deshidratación. Este protocolo se puede simular condiciones similares a la fiebre en los ratones hasta 12-24 horas. Tenemosutilizado 8-12 semanas de edad BALB / cJ ratones hembra para demostrar el protocolo.

En este trabajo se describe un protocolo para la hipertermia de todo el cuerpo en ratones que pueden estimular la fiebre como condiciones hasta 12-24 horas.

Protocolo para la hipertermia corporal Larga Duración Total en ratones

La hipertermia es un término general utilizado para definir el aumento de la temperatura corporal central por encima de los niveles normales. Se utiliza a menudo para describir el incremento de la temperatura corporal central...

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Investigación

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Medicina

En este video describimos un protocolo paso a paso para estudiar el golpe de calor por esfuerzo (EHS) en un modelo de ratón.

Modelo de ratón de golpe de calor por esfuerzo: un protocolo para estudiar los mecanismos subyacentes al golpe de calor por esfuerzo

Este video muestra el procedimiento para inducir convulsiones inducidas por el calor en un ratón transgénico con mutaciones genéticas relacionadas con la epilepsia mediante el aumento gradual de la temperatura corporal en una cámara controlada. Este protocolo se utiliza para estudiar los mecanismos de las convulsiones y las posibles terapias para la epilepsia.

Desencadenamiento y seguimiento de convulsiones inducidas por calor en un modelo de ratón transgénico

Aquí se presenta un protocolo para la fabricación de microburbujas con capa de nanopartículas (NSM) de óxido de hierro a través del autoensamblaje, sinergizando la capacidad de respuesta magnética, acústica y óptica en una plataforma nanoterapéutica para la hipertermia magnética y la terapia de combinación fototérmica contra el cáncer.

Microburbujas magnéticas, acústicas y ópticas de triple respuesta para la hipertermia magnética y la terapia combinada de cáncer potototérmico

Este artículo describe dos métodos de inducción de hipotermia de corta duración de cuerpo entero en ratas. El primer método, de inducción rápida, emplea el enfriamiento activo utilizando ventiladores y aerosol de etanol para una rápida disminución de la temperatura. El segundo método es un método de enfriamiento gradual. Esto se logra utilizando la combinación de anestesia con isoflurano y la reducción de los ajustes de temperatura en la estera de calor homeotérmica. Esto resulta en una...

Inducción de hipotermia de corta duración en ratas utilizando modelos para estudios que examinan la relevancia clínica y los mecanismos

El protocolo describe el desarrollo de un modelo preclínico estandarizado, repetible y de golpe de calor por esfuerzo (EHS) en ratones libres de estímulos externos adversos como la descarga eléctrica. El modelo proporciona una plataforma para estudios mecanicistas, preventivos y terapéuticos.

Un modelo preclínico de golpe de calor por esfuerzo en ratones

El objetivo del método es detectar hipertermia o convulsiones inducidas por el calor en modelos de ratón. El protocolo describe el uso de una cámara personalizada con monitoreo continuo de la temperatura corporal para determinar si la temperatura corporal elevada conduce a convulsiones.

Una prueba conductual para las convulsiones inducidas por el calor en modelos de epilepsia en ratones

Los ratones y las ratas se implantan quirúrgicamente con transpondedores de temperatura remotos y luego se habitúan al entorno y procedimiento de prueba. Los cambios en la temperatura muscular se miden en respuesta a estímulos farmacológicos o contextuales en la jaula del hogar o durante la actividad física prescrita (es decir, caminar en la cinta a una velocidad constante).

Medición de la termogénesis del músculo esquelético en ratones y ratas

Aquí se presenta un protocolo para usar hipertermia controlada, generada por ultrasonido enfocado de alta intensidad guiado por resonancia magnética, para desencadenar la liberación de fármacos de liposomas sensibles a la temperatura en un modelo de ratón rabdomiosarcoma.

Hipertermia generada por ultrasonido focalizado de alta intensidad guiada por resonancia magnética: un método de tratamiento factible en un modelo de rabdomiosarcoma murino

Este protocolo presenta las técnicas y la metodología necesarias para la terapia hipertérmica dirigida en modelos de tumores sólidos. El enfoque aprovecha la conversión fototérmica de la luz infrarroja cercana mediante nanovarillas de oro inyectadas intratumoralmente para inducir un calentamiento localizado dentro del microambiente tumoral.

Inducción de hipertermia leve dirigida en modelos tumorales murinos mediante conversión fototérmica de luz infrarroja cercana mediante nanovarillas de oro intratumorales

Parabiotic unión de dos organismos conduce al desarrollo de un sistema circulatorio compartido. En este protocolo, se describen los pasos quirúrgicos para formar una conexión parabiotic entre un ratón de tipo salvaje y un ratón que expresa GFP constitutiva.

Parabiosis en ratones: un protocolo detallado

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Protocolo para la hipertermia corporal Larga Duración Total en ratones

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