Name: Frecuencia de imagen óptica de dominio de Ex vivo Piezas de resección pulmonar: Obtención de One to One de imagen para estudio histopatológico de correlación (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-22T12:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 21 s
Description: Aprende a obtener correlaciones precisas uno a uno entre imágenes OFDI e histología en tejido pulmonar ex vivo. Este método mejora la interpretación de características de imagen en patología pulmonar.

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Los autores desean agradecer al Sr. Sven Holder y el Sr. Stephen Conley por su ayuda inestimable en este estudio. Este trabajo fue financiado en parte por el Instituto Nacional de Heath [Grant número R00CA134920] y la American Lung Association [Grant número RG-194681-N]. NinePoint Medical Inc. patrocinó los costos asociados con la publicación de este manuscrito.

1. Imaging System Los detalles técnicos de la SIED se han descrito anteriormente 4-6. Circunferencial SIED se llevó a cabo a velocidades de formación de imágenes entre 25 y 100 imágenes por segundo y entre 512 y 2.048 perfiles de profundidad axial por circular en sección transversal imagen. Custom 2,4 Fr (0,8 mm de diámetro) catéteres de exploración helicoidal utilizados en este estudio fueron diseñados para operar a través del puerto de acceso de broncoscopios estándar. Los catéteres consistía en un núcleo óptico interno para enfocar la luz en la pared bronquial y una funda exterior de un solo uso. El cuerpo del catéter se mantuvo estacionaria durante la formación de imágenes, mientras que el núcleo interno se hizo girar a una velocidad entre 25 y 100 Hz y traducido a una velocidad de retirada de entre 1,25 y 5 mm / seg. La resolución axial del sistema fue de 6 mm en el tejido y proporciona una profundidad de imagen que van de 7,3 mm 4-6. Basado en catéter salidas de IED se llevó a cabo en este estudio para replicar en vivo broncoscópica las salidas de IED (Figura 1). Sin embargo, este protocolo también se puede aplicar a imágenes con un sistema óptico de sobremesa (Figura 3 y 4). 2. Imaging System Set-up <ol><li> Encienda el sistema de imágenes </li><li> Establecer y registrar los parámetros de imagen (velocidad de rotación, la velocidad de retroceso, tasa de adquisición de imágenes, etc.) Para el sistema de formación de imágenes SIED utilizado en este estudio, se obtuvieron imágenes a 10-50 fps. </li><li> Conecte catéter hasta el cruce giratorio y el dispositivo retirada. </li><li> Haga girar catéter y verificar la calidad de imagen. Ajuste la alineación del sistema y el desplazamiento cuando sea necesario. </li></ol> 3. Preparación de tejidos <ol><li> Coloque una mesa disponible almohadilla absorbente sobre la mesa de trabajo y la muestra de pulmón conjunto de almohadilla. </li><li> Si la imagen de una muestra ex vivo quirúrgico de un paciente, asegúrese de consultar con el departamento de patología para asegurar que todos los márgenes de resección (márgenes bronquiales, vasculares y del parénquima) han evaluado, documentado y / o removido por un patoLogist. </li><li> Identificar las vías aéreas bronquiales entrar en la pieza de resección en el hilio. Retire cualquier moco visible dentro de la vía aérea utilizando una jeringa dio a luz. Si es necesario, adjunte un segmento más largo de tubo de plástico a la jeringa orificio de succión más profunda dentro de las vías respiratorias. </li><li> Palpar la superficie exterior de la muestra para identificar la lesión de interés. </li><li> Uso de una sonda de metal fino, con cautela navegar a través del árbol bronquial hasta cerca de la lesión de interés. </li><li> Abrir la vía aérea a lo largo de la sonda hasta que la lesión de interés es visible o palpable bajo la mucosa respiratoria. </li><li> Retire con cuidado la sangre o mucosidad de la mucosa que recubre las vías respiratorias de la lesión con un aplicador con punta de algodón. </li><li> Coloque el catéter SIED por encima de la mucosa respiratoria y obtener una imagen para confirmar la lesión está subyacente a la mucosa respiratoria y para identificar una región de imagen de alta calidad de interés para la correlación de la histología. </li></ol> 4. Marcación de tejido <ol> &lt;li&gt; Seleccione la región de interés en la vía aérea sobre la base de los estudios de imagen previos en el Paso 3.8. </li><li> Elegir dos puntos en el tejido a lo largo de la línea deseada de la imagen. Los puntos pueden ser paralela ya sea a la longitudinal (Figura 2) o circunferencial (Figura 3) aspecto de la vía aérea, dependiendo de los resultados deseados. Puntos espaciales no más de 1,5 cm de separación de modo que la porción de tejido que puede encajar en el bloque histología otro para el procesamiento. Si una longitud de tejido de&gt; 1,5 cm se requiere, a continuación, dividir la longitud de tejido en múltiples 1,5 cm de largo entintadas regiones de interés para crear imágenes múltiples encontrados: pares histología. </li><li> Sumerja una punta fina aguja agujero abierto (es decir, de calibre 25 7/8 &quot;de largo) en el tejido de marcado tinte (Triángulo de Ciencias Biomédicas, Durham, NC). </li><li> Limpie cuidadosamente el exceso de tinta de la parte exterior de la aguja con una gasa, dejando tinta tejido marcando sólo en la aguja de taladro. </li><li> Perforar el tejido perpendicular a la mucosa respiratoria en elelegido punto a lo largo de la línea de formación de imágenes. </li><li> Repita los pasos 3,3 a 3,5 para el segundo punto de la mucosa respiratoria. </li><li> Si la tinta corre sobre la superficie de la mucosa de distancia desde el sitio de punción, utilizar un aplicador con punta de algodón para quitar cuidadosamente el exceso de tinta. </li><li> Eliminar el moco o sangre en la superficie de la mucosa respiratoria con un aplicador con punta de algodón, si está presente. </li><li> Si los puntos de tinta se colocan de forma circunferencial dentro de una vía aérea, es útil a la patilla abierta a los dos lados de la vía respiratoria para aplanar el tejido en el campo de la imagen (Figura 3a). </li></ol> 5. Tisular <ol><li> Coloque el catéter a través de las salidas de IED cada marca de tinta y de imagen para garantizar las marcas son visibles en las salidas de IED. Marks debe aparecer como perturbaciones focales dentro de la estructura del tejido que recubre con partículas de alta dispersión y atenuación de la señal subyacente rápido, que corresponde a las partículas de tinta en el sitio de la punción (Figura 3b, la figura 4a, Figura 4g </strong&gt;). </li><li> Si la tinta marca (s) no son visibles en las salidas de IED, repita los pasos 4,3 a 4,7 para las marcas no visibles. Si las marcas de tinta son visibles con las salidas de IED, vaya al paso 5.3. </li><li> Coloque el catéter paralelo a las dos marcas de tinta en la superficie de las vías respiratorias mucosa tal que la óptica de catéter recubrir el tejido más allá de la marca de tinta primero (figura 2b). Anclaje del extremo proximal del catéter con un objeto ligero y asegurar el extremo distal puede ayudar a reducir los artefactos de movimiento. </li><li> Continuar con la recolección de un pullback SIED. </li><li> Ver las imágenes retirada de SIED para asegurar que ambas marcas de tinta son visibles en las imágenes y para verificar si los artefactos de movimiento (Figura 3 y Figura 4). Si las marcas no son visibles, repita los pasos 5.1 a 5.4. </li></ol> 6. Recolección y procesamiento de tejidos <ol><li> Colocar un punto de tinta verde (Triangle Biomedical Sciences, Durham, NC) en el tejido mucoso vía aérea para orientar el comienzo del estudio de imágenes, 0,3 cm de distancia de the marca de tinta que apareció por primera vez en la retirada de imágenes (Figura 2c). </li><li> Quitar el tejido que abarca las dos marcas de tinta negra y tinta marca verde. Recortar el tejido para encajar en un casete de histología estándar de procesamiento. Si el corte de tejido fresco es difícil, entonces el tejido puede ser fijada antes de retirar el tejido para histología. </li><li> Place tejido en un casete de procesamiento histología y fijar en formalina al 10% durante al menos 48 h. </li><li> Proceso de tejido en un procesador de tejido, disponible a través de cualquier departamento de histología. </li><li> Insertar tejido en parafina de manera que las secciones de corte será paralela a las dos marcas de tinta negra en la superficie de las vías respiratorias. </li><li> Utilice un microtomo de tejidos para afrontar el bloque de parafina hasta que una marca de tinta es visible o la sección de tejido entero es visible, lo que ocurra primero. </li><li> Una vez que ambas marcas de tinta negra son visibles, corte una sección de 5 micras de grosor y montar en un portaobjetos de vidrio. </li><li> Continuar para cortar y montar secciones de 5 micras de espesor cada50 micras hasta que las marcas de tinta negra ya no son visibles o los extremos del tejido, lo que ocurra primero. </li><li> Siga estándar de hematoxilina y eosina (H &amp; E) tinción protocolos para manchar cubreobjetos y portaobjetos. </li></ol> 7. Procesamiento de imágenes Si las imágenes se adquirieron con un escáner de sobremesa, o técnica de escaneo otra donde ambas marcas de tinta eran visibles en una sola imagen transversal, a continuación, la imagen se puede correlacionar directamente con la histología correspondiente. Si los conjuntos de datos volumétricos fueron adquiridas con un catéter de exploración helicoidal, las imágenes tendrán que ser re-interpolados para que una imagen 2D único biseca ambas marcas de tinta para la correlación con la histología. Esto se puede lograr usando ImageJ u otro software de procesamiento de imágenes. En algunos casos, la tinta puede no ser fácilmente visible, en cuyo caso las secciones adyacentes / diapositivas deben ser examinados.

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La producción y el libre acceso a este artículo es patrocinado por NinePoint Medical Inc.

Evaluación de los cánceres de pulmón a tiempo puede ser muy difícil debido a la falta de síntomas y la incapacidad de visualizar los primeros cambios neoplásicos o radiológicamente broncoscópicamente. Las salidas de IED ofrece cerca resolución histológica, amplia zona de 3 dimensiones de la microestructura del tejido vistas en tiempo real 2-6. Endobronquial SIED ha sido demostrada en pacientes como una técnica segura que se puede utilizar para obtener de alta resolución de conjuntos de datos volumétricos sobre segmentos largos vías respiratorias en las vías respiratorias pulmonares 11-13 (Animación). Sin embargo, sólo pequeñas biopsias se obtienen como homólogos histopatológicos en el entorno en vivo, que no proporcionan correlaciones adecuadas para SIED para el desarrollo de criterios de imagen para la patología pulmonar. Con el fin de evaluar con precisión las características de SIED visto en proyección de imagen pulmonar, es esencial para obtener la imagen exactamente a la histología correlaciones. Se presenta un método sencillo y eficaz para precisa, uno a Ocorrelación entre las salidas de IED ne e histología aplicada a las vías respiratorias de imágenes de los ex muestras de resección pulmonar in vivo, que es aplicable a casi cualquier tipo de tejido ex vivo. Una vez que los criterios de imagen se han establecido ex vivo con acertaron una-a-uno histología, estos criterios, entonces se puede aplicar a imágenes in vivo. El tinte del tejido utilizado para marcar la zona de imagen de interés es claramente visible tanto en las salidas de IED y la histología. Mediante el uso de técnicas sencillas para orientar el tejido, las marcas de tinta puede ser correlacionado tanto en imágenes y la histología para permitir doce y cincuenta y nueve de la noche comparaciones de características de SIED y hallazgos histológicos para determinar las características de formación de imágenes identificables de la patología del tejido. La técnica es barato y práctico, por lo que es útil en muchas aplicaciones de formación de imágenes ópticas. En el entorno en vivo, métodos tales como el marcado con láser se puede utilizar para la orientación del tejido 25. Sin embargo, tél pequeño tamaño de la biopsia bronquial es todavía un factor de limitación en el uso de los estudios in vivo para desarrollar criterios específicos de formación de imágenes para la patología pulmonar. Aunque los estudios ex vivo servir como una alternativa adecuada para la formación de imágenes in vivo, existen algunas limitaciones. Ex muestras de pulmón in vivo se muestran a menudo sin inflar y atelectasia inducida quirúrgicamente, lo que altera la apariencia de las estructuras alveolares normales. Inflar el tejido pulmonar resecado quirúrgicamente con marcación de tejido para la correlación histológica es técnicamente difícil ya que la mayoría de las muestras de pulmón quirúrgico se reciban después de la evaluación patología sección congelada durante el cual la superficie pleural se interrumpe, lo que interfiere con la inflación muestra. No patológico atelectasia no es un artefacto visto en el escenario en vivo, por lo que esta limitación no sería pertinente para la formación de imágenes in vivo pulmonar. Además, la falta de sangre dentro de los vasos en muestras ex vivo podría hacer difícil distinguish estructuras vasculares de otras estructuras de señal vacíos. En el entorno en vivo, la adición de Doppler octubre / SIED 26-28 estructural a octubre / SIED sería ayudar en la identificación de los vasos. Artefactos de movimiento se puede ver en vivo donde no están presentes ex vivo. Esto podría ser potencialmente problemática en los sistemas de octubre estándar con velocidades de adquisición más lentas. Sin embargo, las velocidades de cuadro rápidas de los sistemas de salidas de IED se encuentran actualmente&gt; 200 fps 29-31. Por lo tanto, no se espera que un artefacto de movimiento será un problema significativo. Anterior en vivo OCT y estudios de imagen han demostrado SIED visualización satisfactoria de características de las imágenes finas 14,15,18,19. En este estudio hemos demostrado volumétrica SIED con correlación precisa de tejido basado en el diagnóstico para la evaluación de la patología pulmonar. El procedimiento descrito está destinado a proporcionar histología ajustan con precisión para ser utilizado como oro Standaª de la interpretación de las imágenes salidas de IED. Una vez que los criterios de imagen específicos para la patología pulmonar se han desarrollado y validado ex vivo con acertaron una-a-uno histología, los criterios, entonces se puede aplicar a posterior en vivo en los estudios de formación de imágenes con el uso de una biopsia bronquial como una evaluación estándar de oro de la formación de imágenes características visto. Esta técnica se presenta como una aplicación a muestras de resección pulmonar, pero puede ser aplicado a casi cualquier tipo de tejido para proporcionar la imagen precisa para histología correlación necesaria para determinar características finas de formación de imágenes de los tejidos normales y patológicos.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios (opcional) </td></tr><tr><td> Marcación de tejido tinte </td><td> Triángulo Biomédica </td><td> TMD-BK, TMD-G </td><td></td></tr></tbody></table>

frecuencia de imagen óptica de dominio de<em&gt; ex vivo</em&gt; piezas de resección pulmonar: obtención de one to one de imagen para estudio histopatológico de correlación

Optical Frequency Domain Imaging of Ex vivo Pulmonary Resection Specimens: Obtaining One to One Image to Histopathology Correlation

El cáncer de pulmón es la causa principal de muertes relacionadas con el cáncer1. Los carcinomas de células escamosas y los de células pequeñas suelen originarse asociados a las vías aéreas conductoras, mientras que los adenocarcinomas suelen localizarse más periféricamente. La detección temprana de la malignidad pulmonar en las fases iniciales de la enfermedad puede ser difícil debido a varias limitaciones: la resolución radiológica, las limitaciones del broncoscopio para evaluar el tejido subyacente a la mucosa de las vías aéreas y detectar cambios patológicos tempranos, y el tamaño reducido de la muestra y/o el muestreo incompleto en las biopsias histológicas. Las modalidades de imagen de alta resolución, como la imagenología en dominio de frecuencia óptica (OFDI), proporcionan vistas tridimensionales en tiempo real de gran área y no destructivas de la microestructura tisular hasta profundidades cercanas a los 2 mm (Figura 1)2-6. La OFDI se ha utilizado en diversas aplicaciones, incluyendo la evaluación de la aterosclerosis de la arteria coronaria6,7 y la metaplasia intestinal y displasia del esófago6,8-10.
Se ha demostrado que la OCT/OFDI broncoscópica es una herramienta segura de imagen in vivo para evaluar las vías respiratorias pulmonares11-23 (Animación). La OCT ha sido evaluada en vías respiratorias pulmonares16,23 y en parénquima17,22 de modelos animales y en vías respiratorias humanas in vivo14,15. La imagen mediante OCT de vías respiratorias normales ha permitido visualizar la estratificación de la vía respiratoria y las uniones alveolares, y la evaluación de lesiones displásicas ha resultado útil para distinguir los grados de displasia en la mucosa bronquial11,12,20,21. La imagen mediante OFDI de la mucosa bronquial se ha demostrado en un corto segmento bronquial (0,8 cm)18. Además, se ha descrito la OFDI volumétrica que abarca múltiples generaciones de vías respiratorias en modelos porcinos y en vías respiratorias pulmonares humanas in vivo19. La OCT/OFDI endobronquial se realiza típicamente utilizando catéteres delgados y flexibles, compatibles con los puertos de acceso estándar de la broncoscopia. Asimismo, recientemente se han desarrollado sondas basadas en agujas para OCT y OFDI, que podrían utilizarse para obtener imágenes de regiones del pulmón más allá de la pared de la vía respiratoria o de la superficie pleural17.
Aunque se ha utilizado y demostrado la viabilidad de la OCT/OFDI para la obtención de imágenes pulmonares in vivo, no se han realizado estudios con una correspondencia precisa uno a uno entre OFDI e histología. Por lo tanto, aún no se han desarrollado criterios específicos de imagen para diversas patologías pulmonares. Los equivalentes histopatológicos obtenidos in vivo consisten únicamente en pequeños fragmentos de biopsia, cuya correlación con grandes conjuntos de datos de OFDI resulta difícil. Además, no proporcionan la histología exhaustiva necesaria para el registro con volúmenes amplios de datos de OFDI. Como consecuencia, no es posible establecer características específicas de imagen de la patología pulmonar en el entorno in vivo. La correlación precisa y uno a uno entre OFDI e histología es fundamental para evaluar con exactitud las características observadas en la OFDI frente a la histología como estándar de referencia, con el fin de derivar criterios específicos de interpretación de imágenes para neoplasias pulmonares y otras patologías pulmonares. Una vez que se hayan desarrollado y validado criterios específicos de imagen ex vivo mediante histología con correspondencia uno a uno, dichos criterios podrán aplicarse a estudios de imagen in vivo. Aquí presentamos un método para lograr una correlación precisa y uno a uno entre imágenes ópticas de alta resolución e histología en especímenes de resección pulmonar ex vivo. A lo largo de este manuscrito, describimos las técnicas utilizadas para asociar imágenes de OFDI con histología. Sin embargo, este método no es específico de la OFDI y puede emplearse para obtener imágenes registradas con histología mediante cualquier técnica de imagen óptica. Realizamos OFDI centrada en las vías respiratorias mediante un catéter broncoscópico especializado, personalizado, de 2,4 French (0,8 mm de diámetro). Las muestras de tejido se marcaron con un tinte tisular visible tanto en OFDI como en histología. Se utilizaron procedimientos cuidadosos de orientación para correlacionar con precisión las ubicaciones del muestreo histológico con las del imagenológico. Las técnicas descritas en este manuscrito se emplearon para realizar la primera demostración de OFDI volumétrica con correlación precisa respecto al diagnóstico basado en tejido para la evaluación de la patología pulmonar24. Esta técnica sencilla y eficaz puede extenderse a otros tipos de tejidos para proporcionar la correlación precisa entre imagen y histología necesaria para determinar características finas de imagen tanto en tejidos normales como enfermos.

Las marcas de tinta negra debe estar entre 1 a 1,5 cm de distancia para indicar la región de imagen de interés. La marca de tinta verde debe ser colocado al principio de la exploración de imagen, antes de la primera marca de tinta negro para orientar la muestra (Figura 2 y la Figura 3a). Marcas de tejido de tinta debe ser visible tanto en las salidas de IED de imágenes y la histología (Figura 3 y 4). En los cerdos normales (Figura 3) y las vías respiratorias humanas (Figura 4), ​​capas de las vías respiratorias típica debe ser visible. El epitelio (E) es visible como una delgada, moderadamente señal de la capa densa, homogénea en el aspecto luminal de la vía aérea. La lámina propia consiste organizada señal intensa de señal pobre en tejido, correspondiente a los diversos componentes de la lámina propia (LP), tales como señales intensas tejidos conectivos incluyendo elastina y el colágeno (EL), y pobre de la señal de tipo salival tejido glandular (G ). Hay señales de vez en cuando los conductos visibles pobres (D) que atraviesan la respiepitelio respiratoria para conectar con el lumen bronquial. El músculo liso se presenta como discontinuos, intercalados fascículos musculares lisas y no es así identificada en las salidas de IED. En la H &amp; E y manchas tricrómico, capas vías respiratorias puede ser visualizada (Figura 3c, 3d, 3f, 3g, 4b, 4c, 4e, y 4f), donde en tricrómico las superficiales tejidos densos elásticas y colágenas aparecer azul profundo y el músculo liso subyacente Las manchas de color rojo (SM). Anillos de cartílago (C) aparecen como poca señal en forma de medialuna estructuras con límites bien definidos, que se solapan en la vía respiratoria porcina y no se solapan en las vías respiratorias humanas. El pericondrio que rodea los anillos de cartílago aparece como una capa delgada de tejido señal intensa que abarca los anillos de cartílago con poca señal. En el periférico vías respiratorias humanas (Figura 4g y 4h), archivos adjuntos alveolar (A) son visibles como finas, intensas como señal de celosía paredes alveolares con espacios vacíos de señal alveolares. Espacios vasculares dentro de la lámina propia son visible como estructuras de señal de vacío lineales o circulares con artefacto sombreado suave subyacente (flechas). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3855/3855fig1.jpg" /> Figura 1. Las salidas de IED de la especie porcina vías respiratorias. Imágenes in vivo obtenidos a partir de una vía respiratoria porcina en ventilación mecánica. (A) ODFI sección transversal de la vía aérea proximal. (B) SIED sección transversal de la vía aérea distal. (C) ODFI sección longitudinal de la vía aérea proximal, una mayor ampliación de imagen de Panel E en la región resaltada en rojo. (D) las salidas de IED sección longitudinal de la vía aérea distal, mayor magnificación de imagen e panel en la región verde resaltado. (E) ODFI sección longitudinal de la vía aérea de proximal a distal (izquierda a derecha). Catéter diámetro es de 0,8 mm y marcas de graduación representan incrementos de 0,5 mm. Aunque las diferentes capas de la pared de vía respiratoria y archivos adjuntos alveolares son discernibles en las imágenes de SIED, es difícil de interpretar con precisión la co anatómicarrelate de las señales de salidas de IED sin histología directamente registrados. e: epitelio, lp: lámina propia, sm: submucosa, c: cartílago, a: los archivos adjuntos alveolar. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3855/3855fig2.jpg" /> Figura 2. Marcación de tejido de vía respiratoria porcina. (A) Abierto las vías respiratorias con dos marcas de tinta negra en la superficie luminal colocado en paralelo a la cara longitudinal de la vía aérea, 1,5 cm de separación. (B) las salidas de IED catéter colocado sobre dos marcas de tinta negro para incluir ambas marcas dentro de la retirada SIED. (C) las vías respiratorias con marca adicional tinta verde para orientar el comienzo del estudio de imágenes en la muestra. <img alt="Figura 3" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/3855/3855fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3855/3855fig3.jpg" /> Figura 3. Las salidas de IED y la histología de las vías respiratorias porcina demostrando cor precisorelación usando marcación de tejido. (a) Abierto las vías respiratorias con dos marcas de tinta negra en la superficie luminal colocado en paralelo a la cara circunferencial de la vía aérea. Patillas se utilizan para abrir más la vía aérea (flechas). (B) las salidas de IED de las vías respiratorias porcina con ambas marcas de tinta visible (asteriscos) con (c) manchado histología precisamente correlacionada con H &amp; E (asteriscos: tinta negro marca visible sobre el epitelio respiratorio) y (d) tinción tricrómica correlacionada. Barra de escala: 2 mm. (E) mayor aumento vista de imagen SIED con (f) correspondiente histología teñidas con H &amp; E y (g) tinción tricrómica correlacionada. E: epitelio respiratorio, EL: colágeno denso y tejidos elásticos, SM: músculo liso, C: anillos cartilaginosos (artefacto histológico ha dado lugar a la separación artificial de los anillos cartilaginosos), G: tejido de la glándula salival, D: conducto salival entrar epitelio. Barra de escala: 250 m. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3855/3855fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ampliar la cifra</a> . <img alt="Figura 4" fo:content-width="4.75in" fo:src="/files/ftp_upload/3855/3855fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3855/3855fig4.jpg" /> Figura 4. SIED y la histología de las vías respiratorias humanas que demuestra una correlación precisa usando marcación de tejido. (A) SIED de las vías respiratorias humanas proximal con dos marcas de tinta visible (asteriscos). (B) manchado Precisamente correlacionada con la histología H &amp; E con tinta negro marca visible sobre el epitelio respiratorio (asteriscos) y (c) tinción tricrómica correlacionada. Barra de escala: 2 mm. (D) Mayor ampliación de la imagen de vista SIED y (e) la histología correspondiente teñidas con H &amp; E y Tricrómico de (f). Barra de escala: 250 m. E: epitelio respiratorio, LP: lámina propia, G: tejido de la glándula salival, C: anillos cartilaginosos, PC: pericondrio. En las vías respiratorias humanas, la estratificación típica es visible. En el tejido conectivo laxo, no se intercalan fascículos de rojo-tinción de músculo liso (SM, c paneles y f), Que no forman una banda continua y por lo tanto no son visibles como una capa distinta en las salidas de IED. (G) las salidas de IED de las vías respiratorias humanas distal y (h) precisamente correlacionada H &amp; E histología con las marcas de tinta negros visibles sobre el epitelio respiratorio (asteriscos). Barra de escala: 2 mm. Adjuntos alveolar (A) son accesibles como señales intensas como celosía paredes alveolares con espacios vacíos de señal alveolares. Espacios vasculares dentro de la lámina propia también son visibles como estructuras de señal de vacío-con sombreado subyacente leve (flechas).

Un método para la imagen<em&gt; Ex vivo</em&gt; Muestras de resección pulmonar con óptica de imágenes de dominio de frecuencia (IED) y obtener una correlación precisa para histología se describe, que es esencial para el desarrollo de criterios específicos de interpretación de SIED para la patología pulmonar. Este método es aplicable a otros tipos de tejidos y técnicas de formación de imágenes para obtener imágenes precisas de correlación histología para la interpretación precisa de la imagen y de evaluación. Criterios de imagen establecidos con esta técnica sería entonces aplicable a la evaluación de imagen en el futuro<em&gt; In vivo</em&gt; Estudios.

Frecuencia de imagen óptica de dominio de<em&gt; Ex vivo</em&gt; Piezas de resección pulmonar: Obtención de One to One de imagen para estudio histopatológico de correlación

El cáncer de pulmón es la principal causa de muertes relacionadas con el cáncer1. Los cánceres de células escamosas y de células pequeñas suelen surgir en asociación con las vías conductoras...

La OCT o la OFDI endobronquial se realiza utilizando catéteres delgados y flexibles, que son compatibles con los puertos de acceso broncoscópico estándar. El broncoscopio se avanza dentro del árbol traqueobronquial hasta la vía aérea deseada. Luego, el catéter de OFDI se avanza hacia la vía aérea a través del canal de trabajo del broncoscopio para recopilar imágenes.El núcleo óptico interno del catéter OFDI gira y se retira simultáneamente dentro de la funda transparente externa para generar datos tridimensionales de OFDI. El Laboratorio Sudor del Hospital General de Massachusetts ha desarrollado un catéter OFDI basado en aguja, compatible con las agujas transbronquiales estándar utilizadas habitualmente para muestrear masas periféricas. El broncoscopio se avanza dentro de la vía aérea hasta la masa objetivo.Con el catéter OFDI retraído de forma segura dentro de la aguja transbronquial, se inserta la aguja en la masa. Posteriormente, se retrae la aguja, dejando el catéter OFDI en su lugar. Al igual que en la técnica endobronquial OFDI, el núcleo óptico interno del catéter transbronquial OFDI gira y se retira simultáneamente dentro de la vaina transparente externa para generar imágenes tridimensionales OFDI.Los equivalentes histopatológicos de los datos obtenidos in vivo consisten únicamente en pequeños fragmentos de biopsia, que son difíciles de correlacionar con grandes conjuntos de datos de OFDI. Como resultado, no es fácil desarrollar características específicas de imagen de la patología pulmonar en el entorno in vivo. El objetivo general de este protocolo es obtener correlaciones exactamente coincidentes uno a uno entre OFDI e histología con tejido ex vivo, lo cual es fundamental para evaluar con precisión las características observadas en OFDI frente a la histología como estándar de referencia.Una vez que se hayan desarrollado y validado ex vivo criterios específicos de imagen con histología apareada uno a uno, dichos criterios podrán aplicarse entonces a estudios de imagen in vivo. La principal ventaja de esta técnica es que permite la correlación directa entre imagen y histología, lo que mejora la interpretación de las características de la imagen. Para preparar el sistema de imagen de dominio de frecuencia óptica o OFDI para el experimento, primero encienda el sistema de imagen y luego configure y registre los parámetros de imagen adecuados.Conecte el catéter a la unión rotatoria y al dispositivo de retracción. Este catéter fabricado a medida tiene un diámetro de 0,8 milímetros. Gire el catéter y verifique la calidad de la imagen; utilice la yema enguantada del dedo para asegurarse de que haya una imagen enfocada y de que la relación señal-ruido sea adecuada.Para comenzar el procedimiento de preparación del tejido, coloque una almohadilla absorbente desechable sobre la superficie de trabajo y sitúe la muestra pulmonar sobre la almohadilla. Debido a dificultades de programación para obtener tejido de pacientes, se utilizará tejido de cerdo en esta demostración en video.Identifique la vía aérea bronquial que entra en la muestra de resección en el hilio. Utilizando la abertura de una jeringa, retire cualquier moco visible dentro de la vía aérea. Palpe la superficie exterior de la muestra para identificar una vía aérea o la lesión de interés.Abra la vía aérea a lo largo de la sonda hasta que la lesión de interés sea visible o palpable bajo la mucosa de la vía aérea con un aplicador de algodón. Retire cuidadosamente cualquier sangre o moco de la mucosa de la vía aérea que recubre la lesión. Coloque el catéter de OFDI sobre la mucosa de la vía aérea y obtenga una imagen.Esto sirve para confirmar que la lesión se encuentra debajo de la mucosa de la vía aérea y para identificar una región de interés de alta calidad para la correlación histológica. Después de seleccionar la región de interés en la vía aérea, elija dos puntos en el tejido a lo largo de la línea deseada de imagen. En este ejemplo, los puntos se harán paralelos al aspecto longitudinal de la vía aérea.Hacer que las marcas de tinta sean visibles tanto en la OFDI como en la histología puede ser difícil, por eso utilizamos tanto marcas con aguja como tinta para poder verlas en ambas técnicas. Una vez elegidos los dos puntos, sumerja una aguja fina de punta abierta en el colorante para marcado de tejidos y limpie cuidadosamente con gasa el exceso de tinta del exterior de la aguja, dejando tinta para marcado de tejidos solo dentro de la luz de la aguja; luego, punzó el tejido perpendicularmente a la mucosa de la vía aérea en el punto elegido a lo largo de la línea de imagen. De la misma manera, marque el segundo punto en la mucosa de la vía aérea, asegurándose de que el segundo punto esté a no más de 1,5 centímetros del primer punto.Si la tinta se extiende sobre la superficie mucosa alejándose del sitio de punción, utilice un aplicador con punta de algodón para retirar cuidadosamente el exceso de tinta. Dependiendo de los resultados deseados, también se pueden hacer los dos puntos paralelos al aspecto circunferencial de la vía aérea, como se muestra aquí. Para obtener imágenes del tejido, coloque el catéter de OFDI sobre cada marca de tinta e imágenes para asegurar que las marcas sean visibles en la OFDI.Las marcas deben aparecer como interrupciones focales dentro de la estructura del tejido, con partículas altamente dispersivas superpuestas y atenuación rápida de la señal subyacente, lo que corresponde a las partículas de tinta en el sitio de punción. En esta imagen de OFDI de una vía aérea de cerdo, ambas marcas de tinta se indican con un asterisco. Coloque el catéter paralelo a las dos marcas de tinta sobre la superficie mucosa de la vía aérea, de modo que la óptica del catéter cubra el tejido más allá de la primera marca de tinta.Continúe con la recopilación de una vista de retroceso de OFDI; revise las imágenes de retroceso de OFDI para asegurarse de que ambas marcas de tinta sean visibles en la imagen y para verificar la presencia de artefactos de movimiento antes de recoger el tejido. Coloque un punto de tinta verde sobre el tejido mucoso de la vía aérea a 0,3 centímetros de distancia de la marca de tinta que apareció primero en el retroceso de la imagen. Esto sirve para orientar el inicio del escaneo de imagen.Ahora retire el tejido que rodea las dos marcas de tinta negra y la marca de tinta verde. Recorte el tejido para que quepa en un casete estándar para procesamiento histológico. Coloque el tejido en un casete para procesamiento histológico y fíjelo en formalina al 10% durante al menos 48 horas.Posteriormente, el tejido se procesa según se describe en el texto del protocolo. Un resultado representativo de la OFDI se ilustra mediante estas imágenes in vivo obtenidas de la vía aérea de cerdo bajo ventilación mecánica. El panel A es una sección transversal de OFDI de la vía aérea proximal, y el panel B es una sección transversal de OFDI de la vía aérea distal.El panel E es una sección longitudinal OFDI de la vía aérea, desde proximal a la izquierda hasta distal a la derecha. El panel C es una imagen con mayor aumento de la región resaltada en rojo del panel E. El panel D es una imagen con mayor aumento de la región resaltada en verde del panel E. El diámetro del catéter es de 0,8 milímetros y las marcas de graduación representan incrementos de 0,5 milímetros. Aunque diferentes capas de la pared de la vía aérea y las uniones alveolares son discernibles en las imágenes OFDI, es difícil interpretar con precisión la correlación anatómica de las señales OFDI sin una histología directamente registrada. E indica el epitelio, lp la lámina propia, SM la submucosa, C el cartílago y a las uniones alveolares.Utilizando el protocolo aquí demostrado, se logra una correlación precisa entre la OFDI y la histología. Esta imagen de OFDI de una vía aérea de cerdo muestra una correlación precisa con la histología de cortes de tejido teñidos con H y E orme. Los asteriscos indican las marcas de tinta negra visibles en el epitelio respiratorio.La estratificación de las vías aéreas puede visualizarse en las tinciones H y E y tricrómica de Masson. Aquí se muestra una vista con mayor aumento de la imagen OFDI junto con la histología correspondiente teñida con H y E y tricrómica de Masson. E indica el epitelio respiratorio, el tejido denso de colágeno y elástico; SM, el músculo liso; C, el cartílago. Los anillos de cartílago G, el tejido de la glándula salival y D, el conducto salival que penetra en el epitelio. El músculo liso aparece como haces discontinuos e intercalados y, por lo tanto, no es identificable en la OFDI.De manera similar, mediante el marcado del tejido se demuestra una correlación precisa entre la OFDI y la histología en la vía aérea humana. En esta imagen de OFDI de la vía aérea proximal humana, ambas marcas de tinta son visibles e indicadas con un asterisco. Existe una correlación precisa con la histología de secciones de tejido teñidas con h y e y tricrómico en la tinción de h y e.Las marcas de tinta negra son visibles en el epitelio respiratorio indicado por un asterisco; vistas con mayor aumento de la imagen OFDI e histología correspondiente. Las imágenes insertadas muestran tinciones con H y E y triCROMO. E indica el epitelio respiratorio; lp, la lámina propia; G, el tejido de la glándula salival; C, los anillos de cartílago; y pc, el pericondrio en la vía aérea humana.Es visible una estratificación típica. Dispersas dentro del tejido conectivo laxo se observan fibras de músculo liso teñidas de rojo, mostradas en los paneles C y F, que no forman una banda continua y por lo tanto no son visibles como una capa distinta en la OFDI. Estas dos imágenes muestran los resultados de la OFDI de vías aéreas distales humanas y la histología h y d precisamente correlacionada.Las marcas de tinta negra visibles en el epitelio respiratorio están indicadas por un asterisco; las inserciones alveolares indicadas por una a son visibles como paredes alveolares con señal intensa en forma de rejilla y espacios alveolares con ausencia de señal. Los espacios vasculares dentro de la lámina propia también son visibles como estructuras con ausencia de señal y sombreado leve subyacente indicado por flechas. E es el epitelio y LP es la lámina propia.Las tasas rápidas de adquisición inherentes a la OFDI permiten la obtención de imágenes de grandes áreas. Los datos pueden visualizarse tanto en sección transversal como longitudinal para proporcionar información adicional sobre la arquitectura del tejido. Una vez que se han desarrollado características de imagen con esta técnica, dichas características pueden utilizarse para interpretar regiones de imagen que no disponen de histología coincidente.Esta técnica proporciona un método para interpretar características de imágenes mediante histología directamente registrada. Aunque esta técnica se demostró utilizando OFDI y tejido pulmonar, puede aplicarse a muchas técnicas de imagen y tipos de tejido. Una vez que se han establecido las características de imagen del tejido normal y patológico con esta técnica, dichas características pueden aplicarse luego a la interpretación de imágenes in vivo, donde puede no estar disponible histología directamente correlacionada.

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