El alcohol polivinílico esponja modelo de implantación

El objetivo general de este procedimiento es utilizar una esponja de alcohol polivinílico para modelar la cicatrización de heridas en ratones. Esto se logra primero hidratando y cargando la esponja para su implantación. A continuación, se inserta la esponja en un bolsillo entre el músculo abdominal y la piel del ratón.

Después del implante, cada esponja puede inyectarse entonces con un tratamiento. El paso final consiste en retirar las esponjas del ratón. En última instancia, se pueden realizar tinciones por seccionado y ensayos cuantitativos para observar cambios y variaciones en el proceso de cicatrización de heridas.

Aunque este método puede proporcionar información sobre la cicatrización de heridas, también puede aplicarse a otras áreas de estudio, como la angiogénesis tumoral, la administración de fármacos y la supervivencia de células implantadas. Y el engraftment comience hidratando las esponjas con agitación nocturna en una solución acuosa de cloruro de sodio al 0,9 %. Luego, autoclave 75 mililitros de la suspensión de esponjas hidratadas durante 25 minutos a 121 grados Celsius.

Para esterilizar las esponjas, coloque la solución para esponjas de autoclave en un flujo laminar estéril y luego use pinzas estériles para tomar una esponja, exprima la esponja con las pinzas y utilice una punta de vacío para eliminar la mayor cantidad posible de solución de la esponja. A continuación, coloque la esponja escurrida en una placa de cultivo de tejidos, teniendo cuidado de dejar espacio entre las esponjas, y pipetee la solución de tratamiento directamente sobre el centro de una esponja. Luego, presione suavemente la esponja con la punta de la pipeta para ayudarla a absorber la solución.

Una vez que todas las esponjas estén cargadas, guarde la placa en hielo hasta que las esponjas se implanten en el ratón. Después de confirmar la sedación mediante la prueba del reflejo de pellizco, comience colocando al ratón en una concha nasal en posición supina. Luego, utilizando una afeitadora eléctrica, retire un área de un pulgada por un pulgada de pelo en la parte ventral inferior del ratón, por debajo de la caja torácica.

Limpiar el área de pelos cortados después. Esterilice el área afeitada con Betadine, seguido de alcohol al 70%. A continuación, mantenga la piel tensa.

Utilice el bisturí para realizar una incisión vertical de una vez y media a dos veces el diámetro de las esponjas que se insertarán, teniendo cuidado de no cortar a través de la cavidad corporal. Use las pinzas para sujetar el borde de la piel.

Luego, use tijeras de Metzenbaum para separar lentamente la piel del músculo en ambos lados de la incisión. Extienda el bolsillo a lo ancho del ratón y desde la caja torácica hasta las patas traseras. Ahora, use las pinzas para tomar la primera esponja que se colocará en el animal, sujetándola por los lados.

Luego, transfiera la esponja a un par de pinzas rectas de manera que quede sujeta por la parte superior e inferior. A continuación, sujete y levante el borde de la piel con otro par de pinzas, e inserte lentamente la esponja, evitando tocar la piel o el músculo debajo. Una vez que se hayan insertado todas las esponjas, utilice un par de pinzas para mantener juntos ambos lados de la incisión y luego pase el hilo de sutura a través de ambas capas de la piel.

Ajuste el primer lazada lo suficiente como para cerrar los bordes de la piel y complete el nudo cuadrado con una lazada más en la dirección opuesta. Esta vez, tire del nudo para apretarlo. A continuación, ate dos nudos cuadrados más para finalizar la sutura.

Coloque suturas adicionales para cerrar toda la incisión. Finalmente, retire al animal del sistema de anestesia y monitórelo hasta que recupere la conciencia. El ratón debería comenzar a desplazarse rápidamente y recuperar la movilidad previa a la cirugía.

Comience llenando una jeringa con la solución deseada y coloque una aguja de calibre 28 en la jeringa. Luego, tras confirmar la sedación mediante el pellizco del dedo del pie, introduzca la aguja en el animal en un ángulo de 45 grados a través de la piel en el centro de las esponjas para asegurarse de que la aguja esté dentro de la esponja. Levante lentamente la aguja en posición vertical.

Si la aguja está dentro de la esponja, la esponja subirá junto con la aguja. Luego, inyecte lentamente la sustancia en la esponja y retire la aguja. Después de sacrificar al animal, sostenga la piel con un par de pinzas y realice una incisión cerca de la esponja deseada.

Finalmente, separe cuidadosamente las esponjas de la cápsula circundante, evitando recolectar tejido adicional alrededor de la esponja extraída. Las esponjas pueden almacenarse en diferentes condiciones dependiendo del tipo de análisis que se realizará. Para el corte en secciones, las esponjas recuperadas pueden incluirse en un medio de congelación, como el compuesto de temperatura óptima para corte, o colocarse en formalina al 10 % para inclusión y seccionado en bloques de parafina, como se hizo con estas esponjas teñidas con H y E.

Y en estas secciones de esponjas teñidas de trirreme, los mejores resultados en el corte se obtienen cuando la esponja se divide por la mitad a través del diámetro, como se muestra aquí, y luego se incluye con la superficie de corte hacia abajo. Como se demuestra aquí, las secciones de la esponja deben tomarse de manera que todo el ancho de la esponja esté presente en esta figura. La esponja de la izquierda fue incluida o seccionada incorrectamente, como lo demuestra el borde de tejido alterado a lo largo del lado derecho de la sección, mientras que la esponja intacta de la derecha fue procesada correctamente.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo preparar, implantar, inyectar y extraer esponjas de alcohol polivinílico para estudiar la cicatrización de heridas en ratones.