Name: Aislamiento y cultivo de células neuronales de ratas embrionarias: un protocolo rápido (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-24T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 51 s
Description: Aprende a aislar y cultivar neuronas corticales e hipocampales de embriones de rata en condiciones libres de suero. Este protocolo rápido utiliza digestión enzimática suave para obtener cultivos neuronales casi puros.

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Damos las gracias a Jonna Ellis por su asistencia editorial. El proyecto descrito fue apoyada por el premio número R01MH079751 (IP: F. Peruzzi) del Instituto Nacional de Salud Mental. El contenido es responsabilidad exclusiva de sus autores y no representa necesariamente las opiniones oficiales del Instituto Nacional de Salud Mental o los Institutos Nacionales de Salud.

1. Poly-D-lisina (PDL): Preparación <ol><li> Añadir 5 ml de ddH estéril 2 O a 5 mg de PDL para obtener una solución madre de 1 mg / ml. </li><li> Mezcle la solución stock de pipetear varias veces. </li><li> Usar inmediatamente o almacenar poli-D-lisina solución a 2-8 ° C. </li></ol> 2. Poly-D-lisina (PDL): revestimiento de plástico placas de cultivo de células <ol><li> Diluir la solución madre de PDL con estéril O ddH 2 a la concentración final de 10 g / ml. </li><li> Pipeta suficiente solución en un plato de 60 mm para cubrir el área cultivo de superficie (3 ml para un plato mm 60). </li><li> Roca suavemente para asegurar un recubrimiento de la superficie de cultivo. </li><li> Incubar las placas revestidas a temperatura ambiente (TA) durante la noche. </li><li> Al día siguiente, por lo general el día de la disección, se retira la solución de poli-D-lisina por aspiración y se lava brevemente con 3 ml de ddH estéril O. 2 Repita este paso. Tras el segundo lavado, eliminar el agua completamente por aspiración. </li><li>Las placas pueden ser almacenadas a 4 ° C durante hasta tres semanas. </li></ol> 3. Poly-D-lisina (PDL) y laminina: Preparación y revestimiento de vidrio de dos cámaras de diapositivas <ol><li> Mezcla PDL (1 mg / ml) y laminina (1 mg / ml) en soluciones madre estéril O ddH 2 a la concentración final de 10 y 5 ug / ml, respectivamente. </li><li> Pipeta suficiente solución en los pocillos de un vidrio de dos cámaras de diapositivas para cubrir el área de superficie de cultivo (1 ml para cada pocillo de un vidrio 2 también de dos cámaras de diapositivas). </li><li> Roca suavemente para asegurar un recubrimiento de la superficie de cultivo. </li><li> Incubar las placas revestidas a TA durante la noche. </li><li> Al día siguiente, retire la solución de revestimiento de poli-D-lisina-laminina mediante aspiración y lavar suavemente dos veces con 1 ml de agua estéril ddH 2 O. Tras el segundo lavado, eliminar el agua completamente por aspiración. </li><li> Cámara de diapositivas se puede almacenar a 4 ° C durante hasta tres semanas. </li></ol> Nota: Cualquier diapositiva cámara de vidrio se pueden recubrir following este protocolo. A menudo utilizamos las diapositivas de dos cámaras, ya que cada diapositiva proporciona la configuración del control de la prueba experimental (por ejemplo, no se trata en comparación con tratamiento, en comparación con untransfected transfectadas). 4. Disección neuronal y Cultura <ol><li> Calentar los siguientes reactivos en un baño de agua 37 ° C: <ul type="disc"><li> TrypLE Express en su original botella de 100 ml. </li><li> Neurobasal/B27 medio completo (véase I cuadro). El volumen calentado depende del número de platos para ser chapado (por ejemplo 30 ml de diez placas de 60 mm chapados). </li></ul></li><li> Añadir 3 ml de solución fría de hibernación E para cuatro placas de 60 mm y 13 ml de cultivo a un tubo de 15 ml BD Falcon polipropileno de alta claridad cónica. </li><li> Añadir 25-30 ml de medio de disección en frío (véase el cuadro II, el Dr. Olimpia Meucci, comunicación personal) para cada uno de los tres platos de 100 mm cultura. Estas placas, que contienen un gran volumen de medio, se utiliza para lavar los embriones inmediatamente después de sula eliminación de las bolsas amnióticas (medidas 4.7 y 4.8). </li><li> La eutanasia de una rata E17 cronometrado embarazada de CO 2 de acuerdo con la Política de Servicios de Salud Pública de Cuidado Humano y Uso de Animales de Laboratorio y bajo un cuidado de los animales y el uso institucionalmente aprobó el protocolo. </li><li> Rociar con el abdomen inferior 70% de EtOH y corte medial a través de la piel y los músculos con un par de tijeras que exponen el útero y los embriones. </li><li> Retire todos los fetos y colóquelos en un recipiente estéril de 100 mm plato que contiene un exceso de medio de disección en frío (25-30 ml, véase el paso 4.3). </li><li> Cortar los embriones con un pequeño par de tijeras de saco amniótico y colocarlos en el segundo plato de 100 mm que contenían medio de disección fría. </li><li> Lavar los embriones a temperatura ambiente inclinando suavemente el plato 100-mm durante 5-10 segundos. Luego, transferir los embriones lavados al plato mm tercera 100 que contiene el medio de disección. Dos lavados en medio de un exceso suelen ser suficientes para eliminar todos los rastros de sangre. Sin embargo, si ncopcuando fuere necesario, lavar una vez más con una nueva de 100 mm, plato que contiene 25-30 ml de medio de disección en frío. </li><li> Utilizando una pinza estereomicroscopio y curvos, extraer el cerebro de cada embrión de rata tirando de la piel y el cráneo. Coloque todo el cerebro en uno de los platos de 60 mm (por lo general, con no más de 5 cerebros por plato) con Hibernate fría E. Mantener estas placas de hielo. </li><li> Tome un plato a la vez y, en virtud de un microscopio de disección, separar los hemisferios y aislar a la eliminación de las cortezas cerebrales del cerebro medio y las meninges. </li><li> Opcional: los cerebros de corte a lo largo de la línea media, extraer los hipocampos, y siga el siguiente procedimiento para aislar las neuronas del hipocampo. </li><li> Recoge todas las cortezas disecados en una de 15 ml tubo transparente cónica que contiene 13 ml de frío Hibernate E. Dejar las cortezas cerebrales en el hielo hasta que todas las disecciones se han completado. Debido a su pequeño tamaño, diseccionaron hipocampos se pueden recoger en un tubo Eppendorf de 1,5 ml en lugar de un tubo de 15 ml. Si se desea, en este paso o cortezashipocampos se puede colocar en un vial que contiene criotubo 1 ml de Hibernar E + 2% B27 + gentamicina (50 mg / ml) + Fungizone (250 ng / ml) en la proporción de 2-4 cortezas o 2-4 hipocampos por vial. El tejido cerebral se puede almacenar a 4 ° C en la oscuridad durante hasta una semana (más tarde los tiempos no han sido probados todavía). Cuando sea necesario, utilice unas pinzas finas para transferir el tejido cerebral a un tubo de 15 ml que contiene Hibernate E y luego seguir el protocolo de abajo para aislar a las neuronas. </li><li> Transferir el tubo a una campana de cultivo de tejidos. Permitir las cortezas se depositen en el fondo del tubo y luego retirar con cuidado el sobrenadante. </li><li> Añadir 13 ml de fresca E Hibernar al tubo cónico de 15 ml, permiten cortezas se depositan en el fondo del tubo y retire cuidadosamente el sobrenadante. Repita este paso 2 veces más y, después del último lavado, retire con cuidado todos los medios de comunicación. </li><li> Enzimáticamente digerir cortezas cerebrales mediante la adición de 1-2 ml (dependiendo del número de cortezas; utilizar menos para el aislamiento del hipocampo) de Tr cálidosypLE Express. Sellar la tapa del tubo con Parafilm y flotar el tubo en un baño de agua a 37 ° C durante 10 minutos. </li><li> Rocíe el tubo con etanol al 70% antes de abrir la tapa y añadir 10 ml de Hibernate E. Permita que las cortezas para ubicarse en la parte inferior del tubo y eliminar el sobrenadante. Repita este paso tres veces para vaciar TrypLE Express. En el último paso, retirar con cuidado todos los medios de comunicación. </li><li> Suavemente triturar (4-5 veces) las cortezas en 2 ml de medio completo Neurobasal/B27 utilizando un pulido al fuego Pasteur de vidrio (aproximadamente 1 mm de diámetro). Tenga cuidado para evitar las burbujas. </li><li> Repetir otro 4-5 veces con una estéril Pasteur de vidrio más pequeña pipeta de diámetro (es decir, una pipeta de 1.2 a 3.4 mm de diámetro). No utilice una pipeta Pasteur o menor que este va a destruir las células. </li><li> Permita que las piezas restantes de tejido (por lo general muy pocos, si los hubiera) para resolver. </li><li> Transferir la parte superior de una sola célula suspensión a un nuevo tubo de 15 ml, dejando tras de piezas colocadas de tejido. Pielther diluir la suspensión de células hasta 10-12 ml con Neurobasal/B27 medio completo. </li><li> Mezclar bien y diluir las células para contar mediante la adición de 10 l de suspensión de células a 490 l de solución de conteo 50x (ver tabla III) en un tubo de 1,5 ml de Eppendorf. </li><li> Células de placas sobre placas recubiertas PDL en la densidad de 5,0 x 10 4 / cm 2. Si nucleofection se va a realizar, se recomienda placas las células a una concentración superior (8-10 x 10 4 / cm 2). </li><li> Normalmente, diseccionar 9-10 fetos por experimento, ya que aproximadamente 13 x 10 6 neuronas se derivan de cada feto E17. Si el número de embriones son necesarios, asegúrese de que todo el procedimiento no durará más de dos horas. </li><li> Si se desea, 24 horas después del aislamiento, 10 M de citosina-β-D-arabinofuranosido (AraC) se puede añadir a cada plato, con el fin de prevenir la proliferación glial. Sin embargo, este paso no es necesario ya que Neurobasal/B27 medio inhibe la proliferación glial, Según las recomendaciones del fabricante (Invitrogen / Gibco). </li><li> Las neuronas pueden ser utilizados para los experimentos después de 4-5 días in vitro, aunque el tiempo exacto depende de la etapa diferenciación deseada. Tenemos neuronas cultivadas para hasta 4 semanas sin una disminución significativa en la supervivencia (Figura 1). </li><li> Para el cultivo prolongado, sustituya medio de cultivo cada semana con recién preparada Neurobasal/B27 medio completo. </li></ol> 5. Los resultados representativos Las neuronas cultivadas en cámara de diapositivas de cristal puede ser sometido a inmunocitoquímica. Figura 1 muestra una imagen típica de una neurona cortical fijado después de cinco días de cultivo y immunolabeled con anti-MAP-2 anticuerpo para mostrar los procesos neuronales. La figura 2 muestra una imagen representativa de una neurona del hipocampo de rata después de 3 semanas en cultivo. La morfología neuronal de una célula completamente diferenciada se destaca por el MAP-2 immunolabeling (MAP-2 marcador neuronal, el clon de anticuerpo monoclonal de ratón AP-20, Gene Tex, Irvine, CA), siguiendo un procedimiento estándar que se describió anteriormente 1. Las imágenes se visualizan con la Nikon Eclipse E400 microscopio vertical de fluorescencia equipado con cámara de agua EXI (Qimaging), motor del eje Z, y SlideBook5 adquisición / deconvolución software (Imagen Inteligente Innovations, Inc., Denver, CO). Una serie de imágenes tridimensionales de cada imagen individual se deconvoluted a una imagen bidimensional y se resolvieron mediante el ajuste de la señal de corte a la intensidad máxima cerca de aumentar la resolución. La Figura 3 muestra la pureza de los cultivos neuronales. Proteína lisados ​​se obtuvieron a partir DIV7 cultivos neuronales de rata (CTX) y de un caso de glioblastoma humano (MBG). Como era de esperar, el lisado neuronal es muy positivo para la proteína neuronal MAP-2 y negativa para el marcador de astrocitos GFAP, mientras que el lisado de proteínas GBM es negativa fo MAP-2 y positivas para GFAP. Aunque en el protocolo que hemos estado usando Hibernate E durante varios años como medio de disección y aclarado, recientemente, hemos explorado un uso adicional y muy práctica de la misma para preservar los tejidos del cerebro para su uso posterior. La Figura 4 muestra un par de días in vitro 5 (DIV5) la cultura de las neuronas corticales de rata aisladas de cortezas mantenerse a 4 ° C durante una semana en Hibernate E + B27 después de la disección original de los embriones. Las neuronas se cultivaron sobre un vidrio de dos cámaras de diapositivas recubierta con PDL y laminina como se describió previamente. La imagen adquirida se deconvoluted utilizando SlideBook5 adquisición / software de deconvolución como se ha descrito anteriormente (Figura 2). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3965/3965fig1.jpg" /> Figura 1. Imagen representativa de una neurona cortical nucleofected con pmaxGFP (Amaxa, Lonza, Walkersville, MD) y immunolabeled con MAPA-2 De anticuerpos, de color rojo. Magnificación original 100x. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3965/3965fig2.jpg" /> Figura 2. Imagen representativa muestra MAP-2 inmunomarcación, en rojo, de las neuronas del hipocampo después de 3 semanas en cultivo. DAPI, en azul, muestra los núcleos celulares. Magnificación 40x original. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/3965/3965fig3.jpg" /> Figura 3. Western blot que muestra la pureza de los cultivos celulares neuronales. 30 g de proteína lisados ​​de rata y humanos neuronales MBG se separaron por electroforesis y se sometió a análisis Western blot siguiendo procedimientos estándar 1. Anti-MAP-2 era un conejo policlonal de Señalización Celular (Danvers, MA), anticuerpo anti-GFAP era un anticuerpo monoclonal de ratón de Chemicon (Millipore, Billerica, MA), y el anticuerpo monoclonal de ratón anti-GRB2 anticuerpo era de Transduction Laboratories (BD Sparks, MD). GRB2 se usó como un control de carga. </p&gt; <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/3965/3965fig4.jpg" /> Figura 4. Imágenes representativas de los cinco días in vitro (DIV5), las neuronas corticales de rata obtenidos a partir de cortezas que quedan en hibernación E + B27 a 4 ° C durante una semana después de la disección. A) Fase de contraste de las neuronas cultivadas en un vaso de doble cámara de diapositivas. Magnificación original 20X. B) La inmunofluorescencia muestra la expresión de MAP-2 en los procesos neuronales, en verde, el cultivo fue negativo para el marcador de astrocitos GFAP. DAPI, en azul, indica que los núcleos celulares. Magnificación 40x original.

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</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

El método de disección y cultivo de las neuronas del hipocampo de rata y cortical aquí descrito permite la realización de experimentos utilizando cultivos neuronales casi puros cultivadas en un medio químicamente definido (Figura 3). Aunque los protocolos para el cultivo de las neuronas casi puros en medios libres de suero han sido descritas previamente 2,3,4, hay cambios importantes realizados en nuestro método. A diferencia de los protocolos tradicionales (es decir, Banker et al.) 5,</...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reactivo </td><td> Concentración </td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td> 98% </td></tr><tr><td> B27 </td><td> 2% </td></tr><tr><td> Glutamax </td><td> 0,5 mM </td></tr></tbody></table> Tabla I. Neurobasal/B27 medio completo. <table border="1"><tbody><tr><td> Reactivo </td><td> Concentración </td></tr><tr><td> Glucosa </td><td> 16 mM </td></tr><tr><td> Sacarosa </td><td> 22 mM </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 160 mM </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 5 mM </td></tr><tr><td> Na 2 HPO 4 </td><td> 1 mM </td></tr><tr><td> KH 2 PO 2 </td><td> 0,22 mM </td></tr><tr><td> Gentamicina </td><td> 50 g / ml </td></tr&gt; <tr><td> Fungizone </td><td> 250 ng / ml </td></tr><tr><td> pH </td><td> 7.4 </td></tr><tr><td> Osmolaridad </td><td> 320-330 mOsm </td></tr></tbody></table> Tabla II. Disección medio. <table border="1"><tbody><tr><td> Reactivo </td><td> Volumen (l) </td></tr><tr><td> Neurobasal/B27 medio completo </td><td> 240 </td></tr><tr><td> Trypan mancha azul del 0,4% </td><td> 250 </td></tr><tr><td> Total </td><td> 490 </td></tr></tbody></table> Tabla III. Contando 50x solución. <table border="1"><tbody><tr><td> Reactivo </td><td> Empresa </td><td> Cat. número </td></tr><tr><td> Hibernate E </td><td> Brainbits </td><td> 767171 </td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 21103-049 </td></tr><tr><td> B27 </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 17504-044 </td></tr><tr><td> Fungizone </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 15290-018 </td></tr><tr><td> La gentamicina sulfato </td><td> Sigma Aldrich </td><td> G1264 </td></tr><tr><td> Glutamax 200 mM </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 35050 </td></tr><tr><td> TrypLE expreso w / o rojo fenol </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 12604 </td></tr><tr><td> Citosina-β-D-arabinofuranosido clorhidrato de </td><td> Sigma Aldrich </td><td> C6645 </td></tr><tr><td> Poli-D-lisina </td><td> Sigma Aldrich </td><td> P6407 </td></tr><tr><td> La laminina 1 mg / ml </td><td> Millipore </td><td> CC095 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Sigma Aldrich </td><td> H3375 </td></tr><tr><td> Trypan mancha azul del 0,4% </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 15250 </td></tr></tbody></table&gt; Tabla IV. Reactivos específicos. <table border="1"><tbody><tr><td> Equipo </td><td> Empresa </td><td> Cat. número </td></tr><tr><td> Microscopio estéreo </td><td> Olimpo </td><td> SZ61 </td></tr><tr><td> Pinzas Grandes </td><td> FST </td><td> 11022-14 </td></tr><tr><td> Una pinza fina </td><td> Moria </td><td> MC40B </td></tr><tr><td> Micro pinzas de punta fina </td><td> Moria </td><td> MC31 </td></tr><tr><td> Afiladas tijeras </td><td> Roboz </td><td> RS-6820 </td></tr><tr><td> Micro tijeras de disección </td><td> FST </td><td> 91460-11 </td></tr><tr><td> Micro Tijeras de disección curvas </td><td> FST </td><td> 14067-11 </td></tr><tr><td> Vidrio 2-cámara portaobjetos </td><td> Lab-Tek </td><td> 154461 </td></tr><tr><td> Placas de 60 mm </td&gt; <td> BD Falcon </td><td> 353002 </td></tr><tr><td> Placas de 100 mm </td><td> Corning </td><td> 430167 </td></tr><tr><td> 15 ml tubos </td><td> BD Falcon </td><td> 352099 </td></tr><tr><td> 1,5 ml de la crio-tubo vial </td><td> Nunc </td><td> 375353 </td></tr></tbody></table> Tabla V. Equipos específicos.

aislamiento y cultivo de células neuronales de ratas embrionarias: un protocolo rápido

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

Estamos describiendo un método rápido para disociar y la cultura de las neuronas del hipocampo o la corteza a partir de embriones de rata E15-17. El procedimiento se puede aplicar con éxito para el aislamiento de ratón y humanos neuronas primarias y progenitores neurales. Neuronas disociadas se mantienen en medio libre de suero hasta varias semanas. Estos cultivos pueden ser utilizados para nucleofection, inmunocitoquímica, la preparación de ácidos nucleicos, así como la electrofisiología. Mayores cultivos neuronales también pueden ser transfectadas con una tasa de eficiencia bueno por transducción lentiviral y, menos eficiente, con fosfato de calcio o basados ​​en lípidos métodos tales como lipofectamina.

Se describe un método rápido para aislar y cultivar las neuronas del hipocampo y la corteza a partir de embriones de roedores. Este protocolo nos permite realizar experimentos en los que los cultivos neuronales casi puros son necesarios.

Aislamiento y cultivo de células neuronales de ratas embrionarias: un protocolo rápido

Estamos describiendo un método rápido para disociar y cultivar neuronas hipocampales o corticales de embriones de rata E15-17. El procedimiento puede aplicarse...

El objetivo general de este procedimiento es aislar y cultivar neuronas corticales o hipocampales en condiciones libres de suero. Esto se logra primero mediante la disección de embriones de rata para obtener las cortezas o hipocampos. El segundo paso consiste en incubar el tejido cerebral con trip le express para una digestión enzimática suave.A continuación, los tejidos se enjuagarán con hibernate E y se triturarán mecánicamente con medio de cultivo completo. Para obtener una suspensión de células individuales, el paso final consiste en contar y sembrar las neuronas disociadas en placas recubiertas con poli-L-lisina o en portaobjetos de vidrio recubiertos con poli-L-lisina y laminina. En definitiva, este método permite el aislamiento y cultivo de neuronas en condiciones libres de suero y sin soporte glial.Los cultivos neuronales pueden utilizarse para inmunoquímica de ácidos nucleicos, preparación y electrofisiología. La principal ventaja de esta técnica frente a los métodos existentes es que hemos sustituido la tripsina por una enzima más suave. Hemos omitido el medio del tejido antes de la digestión enzimática, así como el uso del tratamiento con DNasas.Además, los cortes de hip

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Una forma alternativa de aislar a las neuronas motoras de embriones de ratón de la médula espinal se describe. El método tiene en cuenta el hecho de que las lectinas pueden unirse a los nervios de baja afinidad p75NTR receptor del factor de crecimiento. Esta lectina preplating basado permite una purificación similar a la que con un anticuerpo específico contra el p75NTR.

Lectina basado en Aislamiento y cultivo de motoneuronas embrionarias de ratón

Aislamiento de cresta neural embrionario del tubo neural facilita el uso...

Aislamiento y cultivo de células de la cresta neural de embriones murinos del Tubo Neural

Este video presenta un método para aislar células madre/progenitoras neurales del tejido periventricular de la médula espinal en ratas adultas. La técnica incluye la incubación de los fragmentos de tejido en una solución que contiene enzimas proteolíticas para alterar la matriz extracelular y liberar las células. Posteriormente, las células liberadas se colocan en un medio que contiene factores de crecimiento específicos que mejoran la proliferación de troncos y progenitores neurales y...

Aislamiento de células progenitoras madre neurales de la región periventricular de la médula espinal de una rata adulta

El video muestra el proceso de aislamiento y cultivo de neuronas dopaminérgicas del mesencéfalo de embriones de ratón. Los pisos ventrales aislados del mesencéfalo se disocian mediante enzimas. Las neuronas dopaminérgicas resultantes se recolectan y se transfieren a microislas dentro de placas de pocillos múltiples. Las células se incuban con un medio neuronal dopaminérgico para mantener las células a una alta densidad dentro de las microislas.

Aislamiento y cultivo de neuronas dopaminérgicas embrionarias primarias de ratón en el mesencéfalo

Se describe un protocolo para generar un sistema de cocultivo compuesto por neuronas derivadas de células madre pluripotentes inducidas (iPSCs), neuronas corticales primarias y astrocitos. Este sistema de cocultivo permite detectar la formación de contactos sinápticos y circuitos entre nuevas neuronas derivadas de iPSC y neuronas corticales preexistentes que expresan canalrodopsina-2.

Un enfoque optogenética para Evaluar formación de conexiones neuronales en un sistema de co-cultura

La médula espinal de los mamíferos adultos contiene células madre/progenitoras neurales (NSPCs) que pueden ser aisladas y expandidas en cultivo. Este protocolo describe la recolección, el aislamiento, el cultivo y el paso de NSPC generados a partir de la región periventricular de la médula espinal adulta de la rata y de donantes de trasplante de órganos humanos.

Aislamiento de células neurales madre / progenitoras de la región periventricular de la rata de Adultos y de la médula espinal humana

Modificamos e implementar un protocolo previamente publicado que describe la diferenciación rápida, reproducible y eficiente de los inducidos por el hombre células madre pluripotentes (hiPSCs) en neuronas corticales excitatorios 12. Específicamente, nuestra modificación permite el control de la densidad celular neuronal y su uso en matrices de micro-electrodos para medir las propiedades electrofisiológicas en el nivel de red.

Neuronal rápida diferenciación de células madre pluripotentes inducidas para la medición de actividad de red en matrices de micro-electrodos

Aquí, presentamos una nueva técnica microquirúrgica para el aislamiento de las células madre neurales de la eminencia gangliónica E13 ratón embrión.

Aislamiento y cultivo de las células madre neurales embrionarias de ratón

Aquí presentamos un protocolo de Ca2 + proyección de imagen en neuronas y células gliales, que permite la disección de Ca2 + señales con resolución subcelular. Este proceso es aplicable a todo tipo de celular que permiten la expresión de indicadores de Ca2 + genéticamente codificados.

Disección de Local Ca2 + señales en las células cultivadas por membrana dirigidos Ca2 + indicadores

Este artículo describe el aislamiento y el cultivo de las neuronas simpatizantes de ratas embrionarias de los ganglios cervicales superiores. También proporciona protocolos detallados para la tinción inmunocitoquímica y para la preparación de extractos neuronales para el análisis espectrométrico de masas.

Cultivar neuronas simpáticas de ratas de Ganglia cervical superior embrionario para análisis morfológico y proteómico

Aquí, presentamos un enfoque simple utilizando medios de cultivo específicos que permiten el establecimiento de culturas enriquecidas con neuronas y astrocitos, o cultivos de neurona-glia de la corteza embrionaria, con alto rendimiento y reproducibilidad.

Un modelo de cultivo celular para estudiar el papel de las interacciones de neuronas y glia en isquemia

Aprende a aislar y cultivar neuronas corticales e hipocampales de embriones de rata en condiciones libres de suero. Este protocolo rápido utiliza digestión enzimática suave para obtener cultivos neuronales casi puros.

Aislamiento y cultivo de células neuronales de ratas embrionarias: un protocolo rápido

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