Name: Visualización y análisis de flujo de la sangre y del consumo de oxígeno en la microcirculación hepática: Aplicación a un Modelo de cuadro de hepatitis aguda (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-04T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 40 s
Description: Aprende a visualizar la microcirculación hepática y medir la presión parcial de oxígeno usando eritrocitos fluorescentes y fosforimetría láser. Este método permite analizar la estructura microvascular, el flujo sanguíneo y la tensión de oxígeno en modelos de hepatitis aguda.

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Los autores gracias a la Sra. Risa Otsuka de asistencia técnica y ayudar a los experimentos. Esta investigación fue financiada parcialmente por el Ministerio de Educación, Ciencia, Deportes y Cultura, Grant-en-Ayudas a Jóvenes Científicos (B), 2010, 22700476 y Suzuken Memorial Foundation 2010 para KT Y este estudio fue apoyado por la investigación y el desarrollo de la simulación integrada de próxima generación de la materia viva, una parte del desarrollo y la utilización del proyecto del superordenador de última generación de MEXT, y en parte por JST ERATO Proyecto Biológico Suematsu gas.

1. Etiquetado de eritrocitos con fluoresceína isotiocianato me isómero (FITC) Todos los protocolos experimentales que utilizamos fueron aprobados por el Comité de Cuidado Animal de la Universidad de Keio Facultad de Medicina. <ol><li> Anestesiar a un ratones donantes, y después de hacer una incisión celiotomía retirar toda la sangre de la vena cava inferior con una jeringa de 1 ml que contiene una pequeña cantidad de heparina. El ratón se sacrificó inmediatamente por inyección de pentobarbital sódico (100 mg / kg ip). </li><li> Lavar la sangre entera dos veces con PBS (pH 7,4) por centrifugación durante 5 min a 400 g en un rotor de giro-cubo. </li><li> Disolver 10 mg de FITC en 5 ml de 100 mM de Na 2 HPO 4 y filtrar con una membrana que tiene 0,22 micras-poros. </li><li> En un tubo de ensayo mezclar 1 ml de la solución FITC con 0,15 ml de 3 mM de glucosa, 0,25 ml de 180 mM de NaH 2 ml de PO 4, y 1,5 de 100 mM de Na 2 HPO 4. Añadir 0,2 ml de la RBC pellets, y toque el tubo para mezclar. </li><li> Mantener el tubo durante 2 horas a 4 ° C y luego lavar los glóbulos rojos teñidos en PBS dos veces. </li><li> Ponga una pequeña cantidad de la suspensión de glóbulos rojos en una hierba de diapositivas y ver si los glóbulos rojos aspecto saludable (es decir, que su forma y tamaño son normales) y que la intensidad de la fluorescencia es suficiente. </li><li> Suspender el 0,1 ml de glóbulos rojos en 0,9 ml de PBS a pH 7,4, y mantener la suspensión a 4 ° C hasta que la inyección. </li></ol> 2. Preparación de oxígeno sensible a Dye <ol><li> Disolver 500 mg de BSA en 10 ml de PBS a pH 7,4. </li><li> Añadir 30 mg de Pd (II)-meso-tetra (4-carboxifenil) porfirina (Pd-TCPP) a la solución de BSA y se agita durante la noche. </li><li> (Opcional) Extracto de BSA-enlazado Pd-TCPP mediante flujo por gravedad o una cromatografía en columna de centrifugación para separarlo de libre Pd-TCPP. </li><li> Centrifugar la solución para eliminar sin disolver Pd-TCPP, y filtrar el sobrenadante con un filtro de membrana que tiene 0,22 micras-poros. &lt;/ Li&gt; <li> Tienda 1-ml alícuotas en tubos a -20 ° C. Evitar una repetición de los ciclos de congelación-descongelación. </li></ol> 3. Preparación de Animales <ol><li> Por observación microscópica de la microcirculación preparar una placa de plástico con un agujero de 20 mm de diámetro, y una cinta de vidrio de 30-mm cuadrados cubierta cuadrada sobre el agujero. </li><li> Anestesiar a un ratón, quite la piel, y la preparación de la piel. Colocar un catéter en la cola vano para la inyección de drogas mediante el uso de una aguja G 30 conectado a un polietileno de 10 cm (PE 10) catéter lleno con heparinizada PBS. </li><li> Tras la incisión mediana, extender un lóbulo principal del hígado en la placa de plástico, y colocar el ratón en decúbito esternal. </li><li> Preparar pequeños trozos con una envoltura de cocina (3 mm x 8 mm) y baldosa ellos alrededor del borde del lóbulo hepático para inhibir movimiento del hígado con la respiración y evitando que el secado. </li><li> Observe la microcirculación hepática en el microscopio (con luz transmitida), y confirmar que el blood flujo no tiene ninguna estasis en el campo de visión por lo menos durante 15 min. </li><li> Lentamente inyectar 0,2 ml de eritrocitos marcadas fluorescentemente para la observación del flujo sanguíneo o 0,2 ml de Pd-TCPP solución para pO 2 medición. Esta cantidad de glóbulos rojos marcados con FITC representarán el 1/50 de todos los glóbulos rojos en circulación en la región visualizada. </li></ol> 4. Visualización de flujo de la sangre <ol><li> Excitar el FITC por irradiación con luz de una lámpara de mercurio que ha pasado por un filtro de banda (450-490 nm) 1. </li><li> Grabe la imagen fluorescente con una cámara CCD. </li></ol> 5. PO 2 de Medición Pd-TCPP fosforescencia es relativamente débil y debe ser detectado con un detector de alta sensibilidad. Todos los experimentos deben realizarse en un cuarto oscuro. <ol><li> Los picos de absorción de Pd-TCPP son a 410 nm y 532 nm, de modo que el segundo armónico de longitud de onda 532 nm es recomendado para la excitación. Esta longitud de onda puede ser generada por un láser Nd: YAG de pulso del láser 2. </li><li> Pase el haz del láser de Nd: YAG en el puerto apropiado en el microscopio invertido, y ajustar el haz de luz a una posición central en el plano focal. La resolución espacial depende del tamaño del punto láser, que se cambia al pasar el haz a través de un orificio. </li><li> Para detectar la fosforescencia, conecte un filtro de paso largo (&gt; 620 nm) y un tubo fotomultiplicador (PMT) para el otro puerto del microscopio. La PMT debe ser sensible a longitudes de onda rojas, especialmente alrededor de 700 nm. </li><li> Muestra la señal de fosforescencia (500 puntos muestreados a 200 kHz) y calcular la constante de tiempo de la decadencia mediante el ajuste de una función exponencial a la decadencia. </li><li> Para la calibración de preparar dos grupos de muestras de Pd-TCPP solución con pO 2 150 mmHg y 0. Añadir ditionito de sodio al 1% en volumen de muestra para producir ausencia de oxígeno. Mantener el pH de las muestras a 7,4 y la temperaturatura a 37 ° C durante la calibración. </li><li> Fijar el tiempo de la luminiscencia de Stern-Volmer constante de desintegración q k y el oxígeno libre τ 0 en la ecuación (1) 3. En nuestro caso, con Pd-TCPP soluciones a 37 ° C y un pH de 7,4, k q es 374 mm Hg -1 s -1 y τ 0 es de 0,74 ms. Estos parámetros de medición dependerá del equipo (es decir, láser, detector, otros dispositivos ópticos) y el método de procesamiento de señales, de modo de calibración se necesita en cada sistema de medición 4. τ 0 / τ = ​​1 + k q • τ 0 • PO 2 (1) </li><li> Ponga el ratón en la placa de la platina del microscopio, observar la microcirculación hepática, y ajustar la posición de la microvasculatura de destino hasta el punto de que el punto láser. </li></ol> 6. La hepatitis Modelo <ol><li> Los ratones rápidos con acceso libre al agua durante la noche. </li><li> Prepare una20 mg por ml de solución de acetaminofeno (APAP) en DMSO. </li><li> Inyéctela intraperitonealmente a 1 ml/100 g de peso corporal (es decir, 200 mg / kg de peso corporal). Después de la inyección, el ratón se puede dar acceso libre a comida y agua 5. </li><li> 24 horas después de la inyección, anestesiar el ratón y exponer el hígado, al hacer una incisión mediana. Si se logra la hepatitis, necrosis en la región pericentral será fácilmente visible para el ojo desnudo. </li></ol> 7. Los resultados representativos Imágenes de ejemplo de la microcirculación hepática se muestra en la Figura 1, donde (a) es una imagen de luz transmitida y (b) es una imagen de fluorescencia. Individuales de los eritrocitos FITC marcado se observan en la película de vídeo, y vénulas portales, sinusoides y vénulas centrales son reconocidos por la dirección del flujo de sangre. Como se muestra en la Figura 2, el punto láser irradiar una vénula central a través de una lente de objetivo x100 era aproximinmediatamente 10 micras de diámetro. Intravascular pO 2 en la microcirculación hepática se midió en C57BL macho / 6 ratones, y la Figura 3 (a) muestra las relaciones entre pO 2 y el diámetro del vaso en vénulas portales y central. La PO 2 gradiente desde el portal de vénulas centrales indica que los glóbulos rojos liberan oxígeno de manera eficiente al pasar por sinusoides. Como se muestra en la Figura 3 (b), el promedio de pO 2 fue de 59,8 mmHg en los vasos portales, 48,2 mmHg en sinusoides, y 38,9 mmHg en vénulas centrales. Cuando se produce una hepatitis aguda mediante la inyección de APAP intraperitoneal, intravascular pO 2 fue significativamente elevado en cada parte de la microcirculación hepática: p &lt;0,05 en las venas porta y p &lt;0,01 en los sinusoides y venas centrales (Figura 3 (c)). <img src="/files/ftp_upload/3996/3996fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Baja magnificación iLos magos que muestra la microcirculación hepática con (a) de luz transmitida y fluorescencia (b). <img src="/files/ftp_upload/3996/3996fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Imagen del punto láser irradiar una vénula dirigido central de PO 2 de medición. <img src="/files/ftp_upload/3996/3996fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3. PO 2 gradiente en la microcirculación hepática de ratones sanos y ratones con lesión hepática inducida por paracetamol. (A) muestra PO 2 en comparación con el diámetro del vaso para el portal de vénulas (PV) y el centro de las vénulas (CV), y (b) muestra el gradiente de oxígeno del PV a la CV a través de los sinusoides (S). La PO 2 diferencia entre PV y el CV refleja el consumo de oxígeno de los hepatocitos y otras células del parénquima. (C) muestra que en las condiciones de la hepatitis inducida por la administración de APAP, pO 2 fue significativamente elevado en Puerto Vallarta, S, y el CV y la pO 2gradiente de disminución, lo que indica que el consumo de oxígeno hepático se ha visto comprometida.

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No tenemos nada que revelar.

Entrega de oxígeno a los tejidos es una función esencial de la microcirculación, y un montón de artículos describen las enfermedades relacionadas con la anatomía y la reología de los microvasos 6. Flujo sanguíneo hepático es una combinación de la sangre arterial y venosa. Aproximadamente el 30% del flujo de sangre hacia el hígado es bien oxigenada sangre proporcionada por la arteria hepática y la otra 70%, suministrado por la vena porta, es la salida de sangre venosa mal oxigenada desde el bazo y el tracto ga...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> Pd (II) meso-tetra (4-carboxifenil) porfirina </td><td> Frontier Scientific, Inc. </td><td> PdT790 </td></tr><tr><td> Isotiocianato de fluoresceína que isómero </td><td> Sigma-Aldrich Co. </td><td> F7250 </td></tr><tr><td> El acetaminofeno </td><td> Sigma-Aldrich Co. </td><td> A7085 </td></tr></tbody></table> <table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del equipo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Equipo </td></tr><tr><td> tubo fotomultiplicador </td><td> Hamamatsu Photonics KK </td><td> H10722-20 </td></tr></tbody></table>

visualización y análisis de flujo de la sangre y del consumo de oxígeno en la microcirculación hepática: aplicación a un modelo de cuadro de hepatitis aguda

Visualization and Analysis of Blood Flow and Oxygen Consumption in Hepatic Microcirculation: Application to an Acute Hepatitis Model

Hay una discrepancia considerable entre la oferta y la demanda de oxígeno en el hígado, porque el consumo de oxígeno hepático es relativamente alto, pero aproximadamente el 70% del suministro sanguíneo hepático no está bien oxigenado sangre de la vena portal de deriva en el tracto gastrointestinal y bazo. El oxígeno es transportado a los hepatocitos por la sangre que fluye de una rama terminal de la vena porta con una vénula central a través de los sinusoides, y esto hace que un gradiente de oxígeno en los lóbulos hepáticos. El gradiente de oxígeno es un parámetro importante físico que implica la expresión de las enzimas de aguas arriba y aguas abajo de la microcirculación hepática, pero la falta de técnicas para medir el consumo de oxígeno en la microcirculación hepática ha retrasado la elucidación de los mecanismos relacionados con el metabolismo del oxígeno en el hígado. Por lo tanto, utiliza FITC-etiquetados eritrocitos para visualizar la microcirculación hepática y utilizado asistida por láser fosforimetría para medir la presión parcial de oxígeno en los microvasos allí. Noncontact y medición óptica continua puede cuantificar velocidades del flujo sanguíneo, los diámetros de los vasos, y los gradientes de oxígeno relacionados con el consumo de oxígeno en el hígado. En un modelo de hepatitis aguda hemos hecho mediante la administración de paracetamol a los ratones que hemos observado aumento de la presión de oxígeno en los dos vénulas portales y la central, sino un gradiente de disminución de oxígeno en los sinusoides, lo que indica que la necrosis de hepatocitos en la zona pericentral podría cambiar la presión de oxígeno y afectar la expresión de enzimas en la zona periportal. En conclusión, nuestros métodos ópticos para la medición hemodinámica hepática y el consumo de oxígeno puede revelar los mecanismos relacionados con la enfermedad hepática.

Un sistema óptico fue desarrollado para visualizar la microcirculación hepática con eritrocitos de FITC-etiquetados y para medir la presión parcial de oxígeno en los microvasos con asistida por láser fosforimetría. Este método puede ser utilizado para investigar los mecanismos fisiológicos y patológicos mediante el análisis de la estructura microvascular, el diámetro, la velocidad del flujo de sangre, y la tensión de oxígeno.

Visualización y análisis de flujo de la sangre y del consumo de oxígeno en la microcirculación hepática: Aplicación a un Modelo de cuadro de hepatitis aguda

Existe una discrepancia considerable entre el suministro y la demanda de oxígeno en el hígado, debido a que el consumo de oxígeno hepático es relativamente alto, pero aproximadamente el 70 % de ...

Se desarrolló un sistema óptico para visualizar la microcirculación hepática con eritrocitos marcados con fluorescencia y para medir la presión parcial de oxígeno en los microvasos mediante imágenes de fosfo con asistencia láser. Este método puede utilizarse para investigar mecanismos fisiológicos y patológicos mediante el análisis de la estructura microvascular, el diámetro, la velocidad del flujo sanguíneo y la tensión de oxígeno. En la microcirculación hepática, la sangre fluye desde los ES portales hasta los Es centrales, creando un gradiente de oxígeno entre ambos.La concentración de oxígeno en el hígado afecta tanto la expresión enzimática como la patología, convirtiendo el análisis del flujo sanguíneo y la medición del oxígeno en temas importantes de investigación. Nuestro método experimental consiste en la administración intravenosa de glóbulos rojos marcados con fluorescencia.Con el fin de visualizar la microcirculación utilizando fluorescencia para la medición de la presión parcial de oxígeno, administramos por vía intravenosa pofirina de paladio, que emite fosforescencia en la corriente sanguínea cuando es excitada por un láser en un grado dependiente de la concentración de oxígeno circundante. Este proceso permite el análisis cuantitativo del oxígeno; la medición de la presión parcial en la microcirculación hepática mostró una presión parcial de oxígeno portal y central de 59,8 y 38,9 milímetros de mercurio, respectivamente, demostrando una medición efectiva de la concentración de oxígeno. A continuación, aplicamos esta metodología a un modelo de hepatitis.Encontramos una presión parcial de oxígeno elevada en los sinusoides ES portales y en los ES centrales, pero una diferencia de presión reducida entre los ES portales y centrales. Esto probablemente se deba a una disminución del consumo de oxígeno en la zona venosa central debido a la necrosis de hepatocitos. Estos resultados demuestran que nuestra metodología, que utiliza un sistema óptico para medir la hemodinámica hepática y el consumo de oxígeno, es capaz de elucidar los mecanismos de diversas enfermedades hepáticas en la microcirculación hepática.El gradiente de oxígeno es un parámetro esencial que interviene en la expresión de enzimas en las regiones periportales y paracentrales, así como en diversos tipos de enfermedades hepáticas relacionadas con distribuciones microscópicas, por lo que es importante cuantificar el flujo sanguíneo y el consumo de oxígeno. Para esclarecer los mecanismos, la ventaja de nuestro método radica en que permite mediciones ópticas continuas y sin contacto, capaces de cuantificar el flujo sanguíneo, los diámetros de los vasos sanguíneos y el gradiente de oxígeno en la microcirculación hepática. Se extrajo sangre completa de un ratón donante y los eritrocitos se lavaron dos veces con PBS mediante centrifugación a 400 G durante cinco minutos.A continuación, disuelva dos miligramos de FITC en un mililitro de fosfato monosódico de sodio desionizado 100 milimolar, antes de filtrar a través de una membrana con poros de 0,2 micrones. Luego coloque una solución de un mililitro de FITC en un tubo de ensayo junto con 0,15 mililitros de una solución de dextrano 3 milimolar, 0,25 mililitros de fosfato monosódico de sodio desionizado 180 milimolar y 1,5 mililitros de fosfato monosódico de sodio desionizado 100 milimolar, y agite suavemente para mezclar. Incube a temperatura ambiente durante dos horas antes de lavar los glóbulos rojos teñidos dos veces con PBS.A continuación, coloque una pequeña cantidad de suspensión de GR en un portaobjetos de vidrio y confirme tanto la apariencia normal de los GR como la fluorescencia suficiente. Suspender 0,1 mililitro de GR en 0,9 mililitros de PBS y mantenerlo a cuatro grados Celsius hasta su uso. A continuación, disuelva 500 miligramos de albúmina sérica bovina en 10 mililitros de PBS. Luego agregue 30 miligramos de porfirina de paladio y agite durante la noche. Centrifugue la solución para eliminar cualquier porfirina de paladio no disuelta y filtre el sobrenadante a través de una membrana de poro de 0,2 micrones. Aliquote un mililitro del filtrado en tubos de ensayo y almacene a menos 20 grados Celsius. Tenga cuidado de evitar congelaciones y descongelaciones repetidas.Para visualizar microscópicamente la microcirculación, corte un orificio de 20 milímetros de diámetro en una placa de plástico y cubra el orificio con un cubreobjetos cuadrado de 30 milímetros por lado. Extienda el lóbulo hepático principal sobre una placa de plástico en posición prona tras canular una vena de la cola. A continuación, utilice varias secciones de film plástico para alimentos de tres milímetros por ocho milímetros para cubrir la zona que rodea el lóbulo y evitar el movimiento provocado por la respiración y la desecación.Visualice la circulación hepática con un microscopio de transmisión y confirme que no hay estasis del flujo sanguíneo en el campo de visión durante al menos 15 minutos. Para observar gradualmente el flujo sanguíneo, inyecte punto dos mililitros de glóbulos rojos marcados con fluorescencia.Para medir la presión parcial de oxígeno, inyecte 0,2 mililitros de solución de porfirina de paladio. Los glóbulos rojos marcados con FITC representarán un cincuentavo del total de glóbulos rojos en circulación en la región visualizada; excite el FITC irradiándolo con una lámpara de mercurio que pase a través de un filtro de banda pasante de 450 a 490 nanómetros y registre la fluorescencia con una cámara CCD. La fosforescencia de la porfirina de paladio es relativamente débil y requiere un detector de alta sensibilidad y una habitación oscura.Los picos de absorción de la porfirina de paladio se sitúan alrededor de 410 y 532 nanómetros, y se recomienda la longitud de onda del segundo armónico de 532 nanómetros. Esta longitud de onda es producida por un láser de pulso de neodimio YAG; conecte el haz láser a un microscopio invertido y ajústelo de modo que el haz ilumine el centro del plano focal. La resolución espacial del láser depende del tamaño del punto, que puede ajustarse haciendo pasar el haz a través de un diafragma de orificio.Conecte un filtro de paso largo y un tubo fotomultiplicador al microscopio también para detectar la fosforescencia. El PMT debe ser sensible a longitudes de onda rojas, especialmente alrededor de 700 nanómetros. Muestree la señal fosforescente y calcule la constante de tiempo de decaimiento aplicando una función exponencial.En este experimento, muestreamos 500 puntos a 200 kilohercios. Para calibrar, prepare dos soluciones de porfirina de paladio con una presión parcial de oxígeno de 150 y cero milímetros de mercurio, respectivamente. Para la solución de cero milímetros de mercurio, agregue 1% de dihi sodio a las muestras para crear la condición en la que el oxígeno está ausente durante la calibración.Mantenga un pH de la muestra de 7,4 y una temperatura de 37 grados Celsius. Coloque el ratón sobre la platina del microscopio y ajuste los microvasos para los cuales desea visualizar la microcirculación hepática al punto del haz láser. Los ratones con acceso libre al agua durante la noche reciben una inyección intraperitoneal de acetaminofén a 200 miligramos por kilogramo. Veinticuatro horas después de la inyección, anestesie al ratón y exponga el hígado mediante una incisión mediana. Si existe hepatitis, será fácilmente visible a simple vista mediante la necrosis en la región paracentral.Nuestra medición de la presión parcial de oxígeno y de microvasos hepáticos en ratones mostró presiones medias de oxígeno para las venas portales, los senos sinusoides y las venas centrales de 59,8, 48,2 y 38,9 milímetros de mercurio, respectivamente. En otras palabras, el gradiente de oxígeno desde las venas portales hasta las venas centrales indica una liberación suficiente de oxígeno por los glóbulos rojos a medida que pasan a través de los sinusoides. Preparamos ratones con hepatitis inducida por acetaminofén para medir los microvasos hepáticos.Como modelo de patología, descubrimos que las presiones parciales de oxígeno en las venas portales, los sinusoides y las venas centrales eran más altas en el grupo con acetaminofén en comparación con los ratones normales. La diferencia de presión parcial de oxígeno entre las venas portales y centrales fue de 20,9 milímetros de mercurio en ratones normales y de 16,9 milímetros de mercurio en ratones con el modelo de hepatitis. La diferencia de presión parcial de oxígeno entre las venas portales y centrales fue de 20,9 milímetros de mercurio en ratones normales y de 16,9 milímetros de mercurio en ratones con el modelo de hepatitis.El gradiente de oxígeno en la microcirculación hepática surge principalmente debido al suministro de oxígeno proveniente de la vena porta que es consumido por los hepatocitos; la necrosis de hepatocitos en la zona venosa central causada por el acetaminofén provoca una disminución del consumo de oxígeno, de la microcirculación aguas abajo y, por lo tanto, problemas relacionados con la hemodinámica. El suministro y el consumo de oxígeno están implicados en muchas formas de enfermedad hepática. Creamos un modelo de hepatitis aguda y encontramos un aumento de la tensión de oxígeno en los microvasos.Nuestro sistema óptico puede utilizarse para investigar mecanismos fisiológicos y patológicos mediante el análisis de la estructura microvascular, más que la distribución del flujo y el consumo de oxígeno.

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Injertos marginales, tales como hígados grasos, los injertos procedentes de donantes de edad avanzada, o hígados recuperados después de la muerte cardíaca (DCD) toleran el almacenamiento estático convencional, fría solamente mal. Hemos desarrollado un novedoso modelo de subnormothermic vivo de perfusión ex hígado para su conservación, evaluación y reparación de los injertos hepáticos marginales antes del trasplante.

Técnica de Subnormothermic<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Perfusión hepática para el Almacenamiento, Evaluación y Reparación de marginales injertos hepáticos

Este artículo informa sobre un método detallado para la medición dinámica y cuantificación de la velocidad del flujo sanguíneo dentro de los vasos sanguíneos individuales de la vasculatura hepática del ratón utilizando imágenes de microscopía intravital en combinación con una metodología específica para la adquisición y análisis de imágenes.

Microscopia intravital de imágenes del hígado después<em&gt; Leishmania</em&gt; Infección: Una Evaluación de Hemodinámica hepática

Las herramientas utilizadas para visualizar la regeneración vascular requieren métodos para contrastar los árboles vasculares. Esta película demostró una delicada técnica de inyección utilizada para lograr un contraste óptimo de los árboles vasculares e ilustra los beneficios potenciales resultantes de un análisis detallado de la muestra resultante utilizando μCT y secciones histológicas seriadas.

La visualización del parénquima vascular y la regeneración después del 70% hepatectomía parcial en ratones normales

Aquí describimos un protocolo detallado para las mediciones invasivas de parámetros hemodinámicos como la presión portal, el flujo sanguíneo esplácnico y hemodinámica sistémica para caracterizar el síndrome de hipertensión portal en ratas.

Caracterización hemodinámica invasiva del síndrome de hipertensión Portal en cirróticos ratas

Aquí presentamos un protocolo para evaluar experimentalmente la coagulación con plasma en el tejido hepático en vivo. En un modelo porcino, microcirculación es examinada por láser Doppler, profundidad de coagulación se mide histológicamente, temperatura en el sitio de coagulación por termómetro infrarrojo, cámara termográfica y conducto efecto del lacre está documentada por la presión de explosión experimentos.

Evaluación de la coagulación con Plasma en tejido del hígado en un modelo Animal grande en Vivo

El protocolo describe un método sencillo de resección de un hígado de ratón intacto para estudios metabólicos a través de la perfusión de la vena porta.

Ex Vivo Perfusión hepática a través de la vena porta en el ratón

Aquí, presentamos un método robusto para la perfusión in situ del hígado de ratón para estudiar la regulación aguda y directa del metabolismo hepático sin alterar la arquitectura hepática pero en ausencia de factores extrahepáticos.

Producción hepática de glucosa, ureagénesis y lipólisis cuantificadas mediante el modelo de hígado de ratón perfundido

La ecografía Doppler ultrarrápida (UFUS) con alta resolución espacial (100 μm) y sensibilidad representa una modalidad de imagen no invasiva adecuada para obtener una visión cualitativa completa de la vasculatura hepática. UFUS también facilita las mediciones cuantitativas de la microvasculatura, con el objetivo de mejorar nuestra comprensión de los mecanismos de la enfermedad vascular.

Imagen y cuantificación de la vasculatura hepática de ratones mediante ecografía Doppler ultrarrápida

Este protocolo introduce una herramienta de imagen hepática reutilizable (RHIT) de última generación para la microscopía intravital (IVM) de ratones vivos, que mejora la estabilidad tisular para experimentos rápidos y agudos. El diseño impreso en 3D del RHIT ofrece producción, escalabilidad y versatilidad rentables, permitiendo una observación prolongada de los procesos metabólicos en ratones de diversos tamaños.

Herramienta reutilizable de imagen hepática: Una herramienta reutilizable impresa en 3D para microscopía intravital hepática

Aquí, presentamos un protocolo para un sistema de perfusión ex vivo normotérmico modificable de código abierto diseñado para superar el alto costo y la flexibilidad limitada de las plataformas existentes, lo que permite un uso más accesible, rentable e iterativo en la investigación biomédica preclínica.

Un sistema de perfusión normotémica de código abierto diseñado para científicos investigadores

Aprende a visualizar la microcirculación hepática y medir la presión parcial de oxígeno usando eritrocitos fluorescentes y fosforimetría láser. Este método permite analizar la estructura microvascular, el flujo sanguíneo y la tensión de oxígeno en modelos de hepatitis aguda.

Visualización y análisis de flujo de la sangre y del consumo de oxígeno en la microcirculación hepática: Aplicación a un Modelo de cuadro de hepatitis aguda (Video) | JoVE Journal

Visualización y análisis de flujo de la sangre y del consumo de oxígeno en la microcirculación hepática: Aplicación a un Modelo de cuadro de hepatitis aguda

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