Name: Este mes de noviembre en JoVe (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 51 s
Description: Descubre los avances en neurociencia y biología del número de noviembre de JoVE. Este artículo destaca nuevos hallazgos sobre comportamiento neuronal y técnicas experimentales innovadoras para investigadores.

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<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3505/">Medición de flujos rápidos de calcio en cardiomiocitos</a></h2>
Urszula Golebiewska1, Suzanne Scarlata2 1Departamento de Ciencias Biológicas y Geología, Queensborough Community College, 2Departamento de Fisiología y Biofísica, Universidad de Stony Brook
Presentamos un método para aislar eventos rápidos (de microsegundos) de calcio de flujos más lentos en células vivas utilizando microscopía confocal de barrido láser. El método mide las fluctuaciones de la intensidad de fluorescencia de los indicadores de calcio mediante el registro de escaneos lineales de varios cientos de píxeles en una celda. El análisis de histogramas nos permite aislar las escalas de tiempo de diferentes flujos de calcio.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3373/">Síntesis de submonómeros en fase sólida de polímeros peptoides y su autoensamblaje en nanohojas altamente ordenadas </a></h2>
<color de fuente='black'>Helen Tran, <color de fuente='black'>Sarah L. Gael, Michael D. Connolly, Ronald N. Fundición Molecular Zuckermann , Laboratorio Nacional Lawrence Berkeley
Se describe un método de síntesis manual de peptoides simple y general que involucra equipo básico y reactivos disponibles comercialmente, lo que permite sintetizar peptoides fácilmente en la mayoría de los laboratorios. Se describe la síntesis, purificación y caracterización de un peptoide anfifílico 36mer, así como su autoensamblaje en nanohojas altamente ordenadas.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3258/">Evaluación conductual de la destreza manual en primates no humanos</a></h2>
<color de fuente='black'>Eric Schmidlin*, <color de fuente='negro'>Mélanie Kaeser*, <color de fuente='negro'>Anne- Dominique Gindrat, <color de fuente='negro'>Julie Savidan, <color de fuente='negro'>Pauline Chatagny, <color de fuente='negro'>Simon Badoud, <color de fuente='negro'>Adjia Hamadjida, <color de fuente='negro'>Marie-Laure Beaud, <color de fuente='negro'>Thierry Wannier, Abderraouf Belhaj-Saif, Eric M. Departamento de Medicina Rouiller , Universidad de Friburgo * Estos autores contribuyeron igualmente
Dado que la destreza manual es una prerrogativa principalmente de los primates, se han desarrollado tareas de comportamiento en monos macacos. Cuatro tareas de alcance y prensión, que miden la capacidad de manipulación de la mano y la fuerza, permiten establecer la recuperación funcional después de una lesión del sistema nervioso central y probar el efecto de un tratamiento.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3588/">Determinación de la actividad fagocítica de muestras clínicas de anticuerpos</a></h2>
Elizabeth G. McAndrew1, Anne-Sophie Dugast1, Anna F. Licht1, Justin R. Eusebio1, Galit Alter1, Margaret E. Ackerman2 1Hospital General de Massachusetts, Instituto Ragon de MGH, MIT y Harvard, 2Escuela de Ingeniería Thayer, Dartmouth College
Presentamos un ensayo citométrico de flujo de alto rendimiento para determinar la actividad fagocítica de anticuerpos específicos de antígeno a partir de muestras clínicas, utilizando perlas recubiertas de antígeno fluorescente y una línea celular monocítica que expresa múltiples receptores Fc, proporcionando el uso del receptor y determinaciones de la actividad fagocítica de manera estandarizada y reproducible para cualquier antígeno de interés.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3187/">Estudio del citoesqueleto de actina en células endoteliales vivas que expresan GFP-actina</a></h2>
<color de fuente='black'>Travis M. Doggett, Jerome W. Breslin , Departamento de Fisiología, Centro de Ciencias de la Salud de la Universidad Estatal de Luisiana, Imágenes microscópicas de células endoteliales vivas que expresan GFP-actina permiten caracterizar los cambios dinámicos en las estructuras del citoesqueleto. A diferencia de las técnicas que utilizan muestras fijas, este método proporciona una evaluación detallada de los cambios temporales en el citoesqueleto de actina en las mismas células antes, durante y después de diversos estímulos físicos, farmacológicos o inflamatorios.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3260/">Implantación de transmisores de radiotelemetría que proporcionan datos sobre ECG, frecuencia cardíaca, temperatura corporal central y actividad en ratones de laboratorio que se mueven libremente</a></h2>
<color de fuente='black'>Nikola Cesarovic1, Paulin Jirkof2, Andreas Rettich2, Margarete Arras1 1División de Investigación Quirúrgica, Hospital Universitario de Zúrich, 2Instituto de Ciencia de Animales de Laboratorio, Universidad de Zúrich
Se muestra una técnica quirúrgica para la implantación de transmisores de telemetría disponibles comercialmente que se utilizan para la medición continua del biopotencial (ECG de una derivación), la frecuencia cardíaca, la temperatura corporal central y la actividad locomotora en ratones que se mueven libremente. También se presentan recomendaciones y protocolos para el cuidado postoperatorio y el alivio del dolor, mejorando la recuperación, el bienestar y la tasa de supervivencia.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3381">Electroporación del mesénquima craneofacial</a></h2>
<color de fuente='black'>Jacqueline M. Tabler, Karen J. Departamento de Desarrollo Craneofacial de Liu , King's College de Londres
Los cartílagos craneofaciales se desarrollan en estrecho contacto con otros tejidos y son difíciles de manipular en animales vivos. Estamos utilizando la electroporación para administrar herramientas moleculares durante el crecimiento del esqueleto craneofacial mientras evitamos los efectos embrionarios tempranos. Este enfoque nos permitirá probar de manera eficiente las moléculas candidatas in vivo.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3379">Slice Registro electrofisiológico y estimulación optogenética de neuronas adultas en el bulbo olfatorio</a></h2>
<color de fuente='black'>Matthew Valley, <color de fuente='negro'>Sebastian Wagner, <color de fuente='negro'>Benjamin W. Gallarda, Laboratorio Pierre-Marie Lledo para la Percepción y la Memoria, Institut Pasteur y Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS)
Las neuronas adultas que expresan ChR2 pueden ser manipuladas en preparaciones electrofisiológicas para examinar su contribución a la función de los circuitos neuronales olfativos.

este mes de noviembre en jove

November 2011: This Month in JoVE

El número de noviembre del Journal of Visualized Experiments comienza con una serie de experimentos conductuales para medir la capacidad de prensión en primates. Investigadores de la Universidad de Friburgo demuestran cuatro tareas de agarre y alcance, que siguen pasos comunes para restringir cómodamente al animal y posicionar correctamente su cabeza. La prueba del tablero de Brinkman se utiliza para evaluar el alcance hacia objetos estáticos, mientras que el tablero de Brinkman giratorio presenta una condición en la que los animales deben anticipar la posición del objeto. La prueba de la caja de Brinkman permite investigar la destreza en condiciones en las que el mono tiene menos grados de libertad para realizar la tarea de agarre y no puede usar la visión para guiar el movimiento. Mientras que las pruebas del tablero y la caja de Brinkman dependen únicamente del análisis de video obtenido durante los experimentos, para generar datos, el aparato de la tarea de alcance a un cajón cuenta con detectores que monitorean las fuerzas de agarre y carga, así como la posición del cajón, lo que hace que esta prueba sea adecuada para medir la fuerza y la capacidad de prensión. En conjunto, estas cuatro pruebas ofrecen un enfoque potente para evaluar el control motor en la extremidad anterior distal, y el grupo de Friburgo presenta datos tanto de estudios con lesiones como de experimentos destinados a probar terapias potenciales para lesiones de la médula espinal. En Clinical and Translational Medicine, colaboradores de la División de Investigación Quirúrgica del Hospital Universitario de Zúrich y del Instituto de Ciencias de Animales de Laboratorio de la Universidad de Zúrich trabajan juntos para implantar un dispositivo de radiotelemetría en ratones, que puede utilizarse para obtener mediciones fisiológicas en animales que se mueven libremente. Los dispositivos constan de dos electrodos, capaces de medir la actividad biopotencial (ECG, EEG o EMG) así como la temperatura, y un transmisor de radio ligero (de 1-200 Hz de ancho de banda) que puede implantarse en la cavidad abdominal. El estrés provocado por el manejo de los animales, así como la anestesia, son elementos de confusión conocidos que afectan las mediciones fisiológicas, por lo que los dispositivos de radiotelemetría son una forma conveniente de obtener datos fisiológicos de los animales en un estado natural e inalterado, además de permitir la medición simultánea de múltiples animales. JoVE también amplía su conjunto de protocolos de electroforesis con un método para introducir macromoléculas en el mesénquima craneofacial de renacuajos en desarrollo de Xenopus laevis, procedente del Laboratorio Liu del King's College de Londres. Los renacuajos de Xenopus se transfieren a una cámara de electroforesis, donde pueden inyectarse con ácidos nucleicos y luego someterse a electroforesis, lo que permitirá la entrega de vectores de expresión o morfolinos al tejido craneofacial en desarrollo. La entrega génica a cartílago diferenciado es inherentemente problemática, y el laboratorio Liu muestra que, mediante electroforesis, los morfolinos pueden introducirse en tejidos procartilaginosos y cartilaginosos del renacuajo de Xenopus a lo largo de una serie de etapas de desarrollo. En Bioingeniería, el grupo Zuckerman del Laboratorio Nacional Lawrence Berkeley ilustra su método para sintetizar peptoides, una clase de moléculas orgánicas biológicamente activas que se asemejan a los péptidos, pero cuyas cadenas laterales están unidas al nitrógeno del enlace peptídico, en lugar del carbono alfa, lo que los hace resistentes a la proteólisis. El grupo Zuckerman demuestra la síntesis por submonómeros, en la que los monómeros peptídicos se añaden secuencialmente mediante reacciones de bromoacetilación y desplazamiento de bromuro, permitiendo un control preciso de la longitud y composición de la cadena de peptoide. Además, el hecho de que la síntesis se realice sobre resina de amida, y por tanto sea una síntesis en fase sólida, simplifica enormemente la purificación de los peptoides sintetizados. Estos autores también muestran cómo los peptoides recién sintetizados pueden inducirse a autoensamblarse en estructuras altamente ordenadas, denominadas nanohojas, que pueden visualizarse mediante microscopía de fluorescencia y microscopía electrónica de barrido. Estas nanohojas podrían servir como una plataforma potencial para miméticos de proteínas y membranas. Más adelante en el mes, JoVE presenta un ensayo para medir la actividad fagocítica en células expuestas a muestras clínicas de anticuerpos en nuestra sección de Inmunología e Infección. Colaboradores del Hospital General de Massachusetts y del Colegio Dartmouth demuestran que las células THP-1 engullen perlas recubiertas con antígenos unidos a anticuerpos en microscopía de video de lapso de tiempo, y presentan un método basado en placas de citometría de flujo para cuantificar el grado de fagocitosis. Nuestros autores utilizan este método para determinar la capacidad de diferentes muestras de anticuerpos para inducir fagocitosis, como las procedentes de pacientes con VIH tratados y no tratados con terapias antirretrovirales. Este resumen del contenido de JoVE en noviembre ofrece una breve descripción general de los artículos destacados del mes. Otros artículos notables incluyen métodos para la imagen en vivo de la dinámica del citoesqueleto en células endoteliales, la medición del flujo de calcio en cardiomiocitos y la electrofisiología de corte de neuronas adultas nacidas en el bulbo olfativo.

Este mes de noviembre en JoVe

El número de noviembre del Journal of Visualized Experiments comienza con una serie de experimentos conductuales para medir la capacidad de prensión en primates. Investigadores de la Universidad de Friburgo demuestran cuatro tareas de agarre y alcance que siguen pasos comunes para restringir cómodamente al animal y posicionar correctamente su cabeza. La prueba del tablero de Brinkman se utiliza para evaluar el alcance de objetos estáticos, mientras que el tablero de Brinkman rotatorio presenta una condición en la que los animales deben anticipar la posición del objeto. La prueba de la caja de Brinkman permite investigar la destreza en condiciones en las que el mono tiene menos grados de libertad para realizar la tarea de agarre y no puede utilizar la visión para guiar el movimiento. Mientras que las pruebas del tablero y la caja de Brinkman se basan únicamente en el análisis de video obtenido durante los experimentos, para generar datos, el aparato de la tarea de alcance del cajón posee detectores que monitorizan las fuerzas de agarre y carga, así como la posición del cajón, lo que hace que esta prueba sea adecuada para medir tanto la fuerza como la capacidad de prensión. En conjunto, estas cuatro pruebas proporcionan un enfoque potente para evaluar el control motor en la parte distal del miembro anterior, y el grupo de Friburgo presenta datos tanto de estudios de lesiones como de experimentos destinados a probar terapias potenciales para lesiones de la médula espinal.

En Medicina Clínica y Traslacional, colaboradores de la División de Investigación Quirúrgica del Hospital Universitario de Zúrich y del Instituto de Ciencia de Animales de Laboratorio de la Universidad de Zúrich trabajan conjuntamente para implantar un dispositivo de radiotelemetría en ratones, el cual puede utilizarse para realizar mediciones fisiológicas en animales en movimiento libre. Los dispositivos constan de dos electrodos, capaces de medir la actividad del biopotencial (ECG, EEG o EMG) así como la temperatura, y un transmisor de radio ligero (de 1-200 Hz de ancho de banda) que puede implantarse en la cavidad abdominal. Se sabe que el estrés provocado por la manipulación del animal y la anestesia son elementos confusores que afectan las mediciones fisiológicas, por lo que los dispositivos de radiotelemetría son una forma conveniente de adquirir datos fisiológicos de animales en un estado natural y no perturbado, además de permitir la toma de mediciones de múltiples animales simultáneamente.

JoVE también amplía su repertorio de protocolos de electroporación con un método para introducir macromoléculas en el mesénquima craneofacial de renacuajos de Xenopus laevis en desarrollo, proveniente del laboratorio de Liu en el King's College de Londres. Los renacuajos de Xenopus se transfieren a una cámara de electroporación, donde se les puede inyectar ácido nucleico y posteriormente someter a electroporación, lo que permite la entrega de vectores de expresión o morfolinos en el tejido craneofacial en desarrollo. La entrega de genes en el cartílago diferenciado es intrínsecamente problemática, y el laboratorio de Liu demuestra que, mediante electroporación, se pueden introducir morfolinos en los tejidos procartilaginosos y cartilaginosos del renacuajo de Xenopus a lo largo de diversas etapas del desarrollo.

En Bioingeniería, el grupo de Zuckerman del Laboratorio Nacional Lawrence Berkeley ilustra su método para sintetizar peptoides, una clase de moléculas orgánicas biológicamente activas que se asemejan a los péptidos, pero que tienen sus cadenas laterales unidas al nitrógeno del enlace peptídico en lugar del carbono alfa, lo que las hace resistentes a la proteólisis. El grupo de Zuckerman demuestra la síntesis de submonómeros, donde los monómeros peptídicos se añaden secuencialmente en reacciones de bromoacetilación y desplazamiento de bromuro, lo que permite controlar con precisión la longitud y la composición de la cadena del peptoide. Además, el hecho de que la síntesis se realice sobre resina de amida y sea, por tanto, una síntesis en fase sólida, simplifica enormemente la purificación de los peptoides sintetizados. Estos autores también muestran cómo los peptoides recién sintetizados pueden inducirse a autoensamblarse en estructuras altamente ordenadas, denominadas nanoláminas, que pueden visualizarse mediante fluorescencia y microscopía electrónica de barrido.

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Descubre los avances en neurociencia y biología del número de noviembre de JoVE. Este artículo destaca nuevos hallazgos sobre comportamiento neuronal y técnicas experimentales innovadoras para investigadores.

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Aaron Kolski-Andreaco

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