Name: Aislamiento de células T CD4 + de los ganglios linfáticos del ratón utilizando Miltenyi Purificación MACS (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-11-01T00:34:55.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: Aprenda a aislar células T CD4+ de ganglios linfáticos de ratón mediante selección negativa con el kit Miltenyi MACS. Este método eficiente proporciona pureza ≥96% para estudios inmunológicos avanzados.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Queremos agradecer a Rebecca Paquett para la preparación de buffer MACS.

Por favor, lea y siga el protocolo incluido en el kit de Miltenyi o en línea en <a href="http://www.miltenyibiotec.com/">http://www.miltenyibiotec.com/</a> .

<ol><li>Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+repertoire+scanning+is+promoted+by+dynamic+dendritic+cell+behavior+and+random+T+cell+motility+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).</li>
<li>Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Class+IA+phosphoinositide+3-kinase+modulates+basal+lymphocyte+motility+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node.</a> J Immunol. 179, 2261-2269 (2007).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Aislamiento de las células de la fuente primaria es un paso necesario en muchos protocolos más complejos. Miltenyi ofrece kits para aislar las células de varios organismos incluyendo los humanos, primates no humanos, ratas y, como se describe aquí ratones. Con bolas magnéticas basadas en la separación de células permite, ya sea para la selección positiva (o agotamiento de las células), así como la selección negativa. Este sentido, demuestran la selección negativa de CD4 he tocado ni na + células T colaboradoras. El uso de este protocolo est...

<table><tbody><tr><td>Tampón MACS</td><td>Reactivo</td><td>Ninguno</td><td>Ninguno</td><td>Preparar según lo descrito por Miltenyi.</td></tr><tr><td>Kit de Aislamiento de Células T CD4+: Aislamiento No Tocado</td><td>Reactivo</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-860</td><td>Para uso con el sistema Miltenyi.</td></tr><tr><td>Solución Salina Tamponada con Fosfato (PBS) estéril</td><td>Reactivo</td><td></td><td></td><td>Para uso en la preparación del tampón MACS.</td></tr><tr><td>Placa de Cultivo de 35 mm de Corning sin Tratamiento TC</td><td>Otro</td><td>Corning</td><td>430588</td><td>Utilizado en la preparación de una suspensión de células individuales.</td></tr><tr><td>Filtro para Células de 70 micrones</td><td>Herramienta</td><td>BD Biosciences</td><td>352350</td><td>Utilizado en la preparación de una suspensión de células individuales.</td></tr><tr><td>Jeringa de 6 mL</td><td>Herramienta</td><td>Tyco Healthcare, Covidien</td><td>8881516051</td><td>Utilizado en la preparación de una suspensión de células individuales.</td></tr><tr><td>Solución Salina Tamponada con Fosfato de Dulbecco&amp;rsquo;s al 10x (DPBS)</td><td>Reactivo</td><td>Invitrogen</td><td>14200-075</td><td>Para uso en la lisis de GR.</td></tr><tr><td>Agua estéril</td><td>Reactivo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W4502</td><td>Para uso en la lisis de GR.</td></tr></tbody></table>

aislamiento de células t cd4 + de los ganglios linfáticos del ratón utilizando miltenyi purificación macs

Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification

Aislamiento de las células de la fuente primaria es un paso necesario en muchos protocolos más complejos. Miltenyi ofrece kits para aislar las células de varios organismos incluyendo los humanos, primates no humanos, ratas y, como se describe aquí ratones. Con bolas magnéticas basadas en la separación de células permite, ya sea para la selección positiva (o agotamiento de las células), así como la selección negativa. Este sentido, demuestran la selección negativa de CD4 he tocado ni na + células T colaboradoras. El uso de este protocolo estándar que suele purificar las células que son CD4 ≥ 96% puro + / CD3 +. Este protocolo se utiliza en conjunción con el protocolo de disección y 2-Photon imagen de los ganglios linfáticos periféricos en ratones publicado en el número 7 de Jove, para la purificación de las células T y otros tipos de células para la transferencia adoptiva con fines de imagen. A pesar de que no demostró el análisis FACS en este video de protocolo, se recomienda comprobar la pureza total de células aisladas con los anticuerpos apropiados a través de la FACS. Además, se demuestra que el método no estéril de aislamiento de células T. Si las células estériles son necesarios para su particular aplicación de usuario final, asegúrese de hacer todos los procedimientos se demuestra en la capilla de cultivo de tejidos en condiciones estándar de estéril. Gracias por su atención y buena suerte con tus propios experimentos!

Aislamiento de linfocitos utilizando el kit de Miltenyi MAC es una manera confiable para purificar las células de todo homogeneizados de tejido linfoide. Células purificadas utilizando el sistema de Miltenyi suelen ser ≥ 96% de pureza. Este sentido, demuestran las medidas adoptadas para aislar las células CD4 + T, uno de los kits que se ofrecen por Miltenyi.

Aislamiento de células T CD4 + de los ganglios linfáticos del ratón utilizando Miltenyi Purificación MACS

El aislamiento de células de la fuente primaria es un paso necesario en muchos protocolos más complejos. Miltenyi ofrece kits para aislar células de diversos...

Este es un imán Max MIDI. Indica: precaución, campos magnéticos extremadamente fuertes. Hola, soy Melanie Matthew del laboratorio de Mike Collins en el Departamento de Fisiología y Biofísica de la Universidad de California en Irvine.Hoy les vamos a mostrar una preparación por selección negativa de células T CD4 positivas utilizando los kits de Milton Biotechnology. Aquí tenemos el Minimax y los imanes Minimax; el Minimax se utiliza para separaciones de mayor tamaño. Puede procesarse hasta 10⁹ células a través de una columna que se coloca en el Minimax, mientras que los Minimax se emplean para volúmenes de células mucho más pequeños.Entonces, dependiendo de si está realizando una separación positiva o negativa, etiquetará sus células con el anticuerpo apropiado. Estos tienen una microesfera magnética que se unirá al imán. En el caso de una selección negativa, las células de su interés pasarán a través de la columna y podrá recolectar el efluente, que contendrá sus células de interés.Debo mencionar que las técnicas que les muestro esta noche no son estériles. Por lo tanto, si desea utilizar estas células para cultivo celular, debe realizar todos los pasos en la cabina de seguridad bi

isolation-cd4-t-cells-from-mouse-lymph-nodes-using-miltenyi-macs

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Una preparación altamente purificada de células dendríticas del pulmón del ratón se describe. Especial énfasis se da al aislamiento de subgrupo de células dendríticas convencionales.

Aislamiento de células dendríticas del pulmón de ratón

Este video describe el enriquecimiento de células T del bazo de un ratón mediante selección negativa utilizando un separador magnético. La técnica consiste en dirigirse a las otras células de la muestra para su agotamiento mediante el uso de anticuerpos o ligandos dirigidos contra antígenos específicos de la superficie celular.

Enriquecimiento de células T: una técnica para aislar células T de una población de células mixtas mediante separación magnética

Este video muestra un protocolo para el aislamiento basado en marcaje magnético de una población de baja concentración de células T CD4 + Vδ1 + γδ de células mononucleares de sangre periférica humana (PBMC). Utilizando una combinación de anticuerpos anti-Vδ1 conjugados con FITC, microesferas magnéticas anti-FITC y perlas superparamagnéticas recubiertas de anticuerpos anti-CD4, las células T CD4 + Vδ1 + se pueden purificar con éxito a partir de la población de PBMC.

Aislamiento selectivo de células T CD4+ Vδ1+ γδ de células mononucleares de sangre periférica humana

Con funciones efectoras diferenciadas de otros subconjuntos de células T, las células Th17 se han implicado en el centro de la autoinmunidad inflamatoria. Este protocolo de diferenciación in vitro de Th17 en proporciona un medio para determinar si ingenuas linfocitos T CD4 + pueden diferenciarse en células Th17, y para examinar aún más su papel en la autoinmunidad y la respuesta del huésped.

Aislamiento y diferenciación de Th17 Naïve linfocitos T CD4

Este protocolo detalla un método para aislar células presentadoras de antígeno de timo humano a través de diferentes etapas de la digestión enzimática del tejido seguido por centrifugación de densidad de la suspensión de células individuales y la clasificación finalmente magnético y / o FACS de las poblaciones de células de interés.

Aislamiento de células dendríticas mieloides y células epiteliales de timo humano

+ &gt; 'jove_content'Naïve se polarizan en varios subconjuntos dependiendo del entorno en el momento de la activación.  La diferenciación de los linfocitos T CD4+ naïve a varios subconjuntos efectores se puede lograr in vitro mediante la adición de estímulos del receptor de linfocitos T y señales específicas de citocinas.

Ratón Naïve CD4<sup&gt; +</sup&gt; Aislamiento de células T y<em&gt; In vitro</em&gt; Diferenciación en subconjuntos de células T

Existen distintos subconjuntos de células dendríticas como poblaciones raras en los órganos linfoides y, por lo tanto, son difíciles de aislar en número y pureza suficientes para los experimentos inmunológicos. Aquí describimos un método de alta eficiencia y alto rendimiento para el aislamiento de todos los principales subconjuntos actualmente conocidos de células dendríticas esplénicas de ratón.

Un método de rendimiento eficiente y de alta para el aislamiento de ratón subconjuntos de células dendríticas

Aquí describimos un protocolo detallado para el aislamiento de los linfocitos de los sitios inductivos como el tejido linfoide asociado a intestino de Peyer y los ganglios linfáticos mesentéricos drenantes y los sitios efectores incluyendo la lámina propia y la epitelio intestinal del pequeño sistema inmune intestinal.

Aislar los linfocitos desde el sistema de inmune Intestinal pequeño ratón

Aquí, presentamos un protocolo para aislar las células dendríticas de bazos murinos por clasificación magnética celular y posterior transferencia adoptiva en ratones ingenuos. El modelo de células dendríticas activadas de sal fue elegido para explicar los procedimientos paso a paso de transferencia adoptiva y citometría de flujo.

Aislamiento y la transferencia adoptiva de sal alta tratan células dendríticas presentadoras de antígenos

De dos fotones de imágenes ha descubierto la motilidad de linfocitos y las interacciones celulares en el ganglio linfático en condiciones basales y durante una respuesta inmune 1. En este caso, se demuestra la transferencia adoptiva de células T, el aislamiento de los ganglios linfáticos, y la motilidad de imágenes de células CD4 + T en los ganglios linfáticos explantados.

La disección y 2-Photon imagen de los ganglios linfáticos periféricos en ratones

Aprenda a aislar células T CD4+ de ganglios linfáticos de ratón mediante selección negativa con el kit Miltenyi MACS. Este método eficiente proporciona pureza ≥96% para estudios inmunológicos avanzados.

Aislamiento de células T CD4 + de los ganglios linfáticos del ratón utilizando Miltenyi Purificación MACS

Explorar más videos