Name: Perfiles Integral del Reglamento de la dopamina en la sustancia negra y el área tegmental ventral (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 54 s
Description: Aprende a disecar la sustancia negra y el área tegmental ventral en roedores para analizar la regulación de la dopamina mediante HPLC y proteínas endógenas. Este método maximiza la información molecular obtenida de una sola muestra de tejido.

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El financiamiento para el trabajo de este, y 2,10, como se cita, fue proporcionada, en parte, por unos premios de investigación de subvención a Salvatore MF de la Federación Americana para la Investigación del Envejecimiento, el Edward P. Stiles Fondo Fiduciario y la Fundación para la Investigación Biomédica del Noroeste de Louisiana, y BS Pruett de la beca predoctoral Muslow Ike, LSU Health Sciences Center-Shreveport.

<ol><li>Trevitt, J. T., Carlson, B. B., Nowend, K., Salamone, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Substantia+nigra+pars+reticulate+is+a+highly+potent+site+of+action+for+the+behavioral+effects+of+the+D1+antagonist+SCH23390+in+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Substantia nigra pars reticulate is a highly potent site of action for the behavioral effects of the D1 antagonist SCH23390 in rat.</a> Psychopharmacology. 156, 32-41 (2001).</li>
<li>Salvatore, M. F., Pruett, B. S., Spann, S. L., Dempsey, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+reveals+a+role+for+nigral+tyrosine+hydroxylase+ser31+phosphorylation+in+locomotor+activity+generation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Aging reveals a role for nigral tyrosine hydroxylase ser31 phosphorylation in locomotor activity generation.</a> PLoS ONE. 4, e8466(2009).</li>
<li>Rossato, J. L., Bevilaqua, L. R. M., Izquierdo, I., Medina, J. H., Cammarota, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+controls+persistence+of+long-term+memory+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Dopamine controls persistence of long-term memory storage.</a> Science. 325, 1017-1020 (2009).</li>
<li>Keller, C. M., Salvatore, M. F., Pruett, B. S., Guerdin, G. F., Goeders, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biphasic+dopamine+regulation+in+mesoaccumbens+pathway+in+response+to+non-contigent+binge+and+escalating+methamphetamine+regimens+in+the+Wistar+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Biphasic dopamine regulation in mesoaccumbens pathway in response to non-contigent binge and escalating methamphetamine regimens in the Wistar rat.</a> Psychopharmacology. 215, 513-526 (2011).</li>
<li>Lu, L., Dempsey, J., Liu, S. Y., Bossert, J. M., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+infusion+of+brain-derived+neurotrophic+factor+into+the+ventral+tegmental+area+induces+long-lasting+potentiation+of+cocaine+seeking+after+withdrawal%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A single infusion of brain-derived neurotrophic factor into the ventral tegmental area induces long-lasting potentiation of cocaine seeking after withdrawal.</a> J. Neurosci. 24, 1604-1611 (2004).</li>
<li>Hoffer, B. J., Hoffman, A., Bowenkamp, K., Huettl, P., Hudson, J., Martin, D., Lin, L. F., Gerhardt, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+cell+line-derived+neurotrophic+factor+reverses+toxin-induced+injury+to+midbrain+dopaminergic+neurons+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Glial cell line-derived neurotrophic factor reverses toxin-induced injury to midbrain dopaminergic neurons in vivo.</a> Neurosci. Lett. 182, 107-111 (1994).</li>
<li>Salvatore, M. F., Zhang, J. L., Large, D. M., Wilson, P. E., Gash, C. R., Thomas, T. C., Haycock, J. W., Bing, G., Stanford, J. A., Gash, D. M., Gerhardt, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Striatal+GDNF+administration+increases+tyrosine+hydroxylase+phosphorylation+in+the+rat+striatum+and+substantia+nigra%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Striatal GDNF administration increases tyrosine hydroxylase phosphorylation in the rat striatum and substantia nigra.</a> J. Neurochem. 90, 245-254 (2004).</li>
<li>Lu, L., Wang, X., Wu, P., Xu, C., Zhao, M., Morales, M., Harvey, B. K., Hoffer, B. J., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+ventral+tegmental+area+glial+cell-line+derived+neurotrophic+factor+in+incubation+of+cocaine+craving%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Role of ventral tegmental area glial cell-line derived neurotrophic factor in incubation of cocaine craving.</a> Biol. Psychiatry. 66, 137-145 (2009).</li>
<li>Lavicky, J., Dunn, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corticotropin-releasing+factor+stimulates+catecholamine+release+in+hypothalamus+and+prefrontal+cortex+in+freely+moving+rats+as+assessed+by+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Corticotropin-releasing factor stimulates catecholamine release in hypothalamus and prefrontal cortex in freely moving rats as assessed by microdialysis.</a> J. Neurochem. 60, 602-612 (1993).</li>
<li>Salvatore, M. F., Pruett, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dichotomy+of+tyrosine+hydroxylase+and+dopamine+regulation+between+somatodendritic+and+terminal+field+areas+of+nigrostriatal+and+mesoaccumbens+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Dichotomy of tyrosine hydroxylase and dopamine regulation between somatodendritic and terminal field areas of nigrostriatal and mesoaccumbens pathways.</a> PLoS ONE. 7, e29867(2012).</li>
<li>Salvatore, M. F., Garcia-Espana, A., Goldstein, M., Deutch, A. Y., Haycock, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stoichiometry+of+tyrosine+hydroxylase+phosphorylation+in+the+nigrostriatal+and+mesolimbic+systems+in+vivo%3A+Effects+of+acute+haloperidol+and+related+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Stoichiometry of tyrosine hydroxylase phosphorylation in the nigrostriatal and mesolimbic systems in vivo: Effects of acute haloperidol and related compounds.</a> J. Neurochem. 75, 225-232 (2000).</li>
<li>Salvatore, M. F., Waymire, J. C., Haycock, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depolarization-stimulated+catecholamine+biosynthesis%3A+involvement+of+protein+kinases+and+tyrosine+hydroxylase+phosphorylation+sites+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Depolarization-stimulated catecholamine biosynthesis: involvement of protein kinases and tyrosine hydroxylase phosphorylation sites in situ.</a> J. Neurochem. 79, 349-360 (2001).</li>
<li>Haycock, J. W., Lew, J. Y., Garcia-Espana, A., Lee, K. Y., Harada, K., Meller, E., Goldstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+serine-19+phosphorylation+in+regulating+tyrosine+hydroxylase+studied+with+site-+and+phosphospecific+antibodies+and+site-directed+mutagenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Role of serine-19 phosphorylation in regulating tyrosine hydroxylase studied with site- and phosphospecific antibodies and site-directed mutagenesis.</a> J. Neurochem. 71, 1670-1675 (1998).</li>
<li>Lindgren, N., Xu, Z. Q., Linskog, M., Herrera-Marschitz, M., Goiny, M., Haycock, J. W., Goldstein, M., Hokfelt, T., Fisone, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+tyrosine+hydroxylase+activity+and+phosphorylation+at+ser19+and+ser40+via+activation+of+glutamate+NMDA+receptors+in+rat+striatum%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Regulation of tyrosine hydroxylase activity and phosphorylation at ser19 and ser40 via activation of glutamate NMDA receptors in rat striatum.</a> J. Neurochem. 74, 2470-2477 (2000).</li>
</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

Como se indica en la Figura 1, los métodos detallados anteriormente deben producir lecturas múltiples de dopamina y su TH proteínas reguladoras, DAT, y VMAT2 de una muestra de SN o VTA obtenerse a partir de la rata o el ratón. Una vez más, los beneficios de la realización de este protocolo es que el investigador puede obtener lecturas operativamente con ajuste de cómo se regula la dopamina in vivo bajo virtualmente cualquier paradigma experimental y, al hacerlo, ahorrar considerables recursos experimentales med...

Sistema de HPLC: El sistema básico consiste en un Shimadzu LC10-ADVP bomba HPLC, Waters WISP un 717 inyector automático de muestras, de 250 X 4,4 mm 5 micras Spherosorb SAO-1 C18 columna de fase inversa (Waters), un Bioanalytical Systems (BAS) TL12 de doble cristalino electrodo de carbón, dos detectores de BAS LC4B electroquímicas, y las aguas de un Empower 2 de recopilación de datos e integración de sistemas. La columna se mantiene a 30-45 ° C (BAS calentador columna LC22A). La fase móvil es fosfato de sodio 0,1 M (pH 3,0), 0,1 mM EDTA, 0.2-0.4 mM 1-octano sulfónico (Eastman-Kodak), y 0,35% de acetonitrilo (v / v), se filtró a través de un filtro de 0,45 micras. El caudal es de 1,2 ml / min. Cuatro lotes litros de fase móvil están optimizados para las separaciones por ajuste del pH, octano ácido sulfónico y temperatura de la columna. La fase móvil se recicla, y se purgó continuamente con gas helio para eliminar el oxígeno disuelto. El reciclado de la fase móviles casi imprescindible para mantener una buena resolución para un período de tiempo razonable. La fase móvil la vida útil se mantiene mediante el uso de un interruptor de flujo (controlada por el integrador) para desviar a perder el primero 2-7 minutos de cada carrera. Los electrodos se mantienen a potenciales de aproximadamente 0,78 y 0.95V con respecto a un electrodo de referencia Ag/AgC1. El electrodo en el potencial más alto se utiliza exclusivamente para la determinación de triptófano (y el estándar de NMDA interna). El potencial de 0,78 V proporciona una señal superior a ruido para la detección de las monoaminas y compuestos, excepto triptófano. Los cromatogramas se almacenan en el disco duro de la estación de trabajo Empower, y posteriormente se procesa y transfiere los datos directamente en una hoja de cálculo Excel para el cálculo de las cantidades de metabolitos y la compilación de datos del grupo. Bomba: Shimadzu LC-10AD Celular: BAS flujo cruzado. Carbono vidrioso electrodo de trabajo a 0,780 y 0,9Potencial V 50. Detector: BAS LC-4B, que opere en modo de doble canal. Los datos Adq. Sistema: Aguas Empower Pro 2. Inyector: 717 WISP Waters Columna: Aguas Spherosorb SAO-1, ​​5 mM de partícula, 4,4 mm x 250 mm. <table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> Dodecilsulfato sódico (SDS) </td><td> - JT Baker </td><td> 4095-02 </td></tr><tr><td> Trizma Base </td><td> Sigma </td><td> T1503-1kg </td></tr><tr><td> Trizma HCl </td><td> Sigma </td><td> T3253-1kg </td></tr><tr><td> Glicerol </td><td> Sigma </td><td> G8773-500 ml </td></tr><tr><td> PVP-40 </td><td> Sigma </td><td> PVP40-1kg </td></tr><tr><td> DPBS </td><td> Gibco </td><td> 21600-069 </td></tr><tr><td> Tween 20 </td><td> Sigma </td><td> P1379-500 ml </td></tr><tr><td> Glicina </td><td> Sigma </td><td> G8898-1kg</td></tr><tr><td> Ponceau S </td><td> Fluka </td><td> 81460 </td></tr><tr><td> Azul de bromofenol </td><td> Sigma </td><td> B8026-5G </td></tr><tr><td> Ditiotreitol </td><td> Sigma </td><td> D-9163 </td></tr><tr><td> Proteína estándar 2 mg de BSA </td><td> Sigma </td><td> P5619-25VL </td></tr><tr><td> Pierce BCA Protein ensayo Reactivo A </td><td> Thermo Fisher Scientific- </td><td> 23223 </td></tr><tr><td> Precision Plus estándar Proteína </td><td> Bio Rad </td><td> 161-0373 </td></tr><tr><td> [125I]-proteína A, la actividad específica </td><td> Perkin-Elmer </td><td></td></tr></tbody></table> Tabla 2. Reactivos específicos. <table border="1"><tbody><tr><td> Reactivos </td><td> Fórmulas </td></tr><tr><td> 10% de SDS </td><td> 10 g de SDS, 100 ml de H 2 0 </td></tr><tr><td> SDS al 1% (pH 8,2) </td><td><ol><li> 10 ml10% de SDS </li><li> 60,5 mg de base Trizma </li><li> 37,22 mg de EDTA </li><li> 90 ml de H 2 0 </li></ol></td></tr><tr><td> Cobre II solución de sulfato </td><td><ol><li> 1 g de cobre II sulfato de </li><li> 25 ml de H 2 0 </li></ol></td></tr><tr><td> Tampón de muestra 3X </td><td><ol><li> Trizma base 2,27 g </li><li> SDS 6 g </li><li> Ditiotreitol 0,463 g </li><li> Glicerol 30 g </li><li> 10 mg de azul de bromofenol </li><li> DIH 2 0 (añadir inicialmente por encima de los reactivos a 40 mL de H 2 0 en un cilindro graduado, a continuación, agregar H 2 0 hasta que el volumen llegue a 100 ml) </li><li> HCl (añadir según sea necesario para alcanzar un pH de 6,85) </li><li> Congelar solución en 50 tubos de 2,0 ml. </li></ol> (Hace 100 ml): Volumen de tampón de muestra 3X necesario = volumen de la mitad de SDS utilizado en la muestra. </td></tr><tr><td> 1X tampón de muestra </td><td> Diluir tampón de muestra 3X abajo a 1X tampón de muestra utilizando DI H 2 0 </td></tr><tr><td> 10 veces<html> Funcionamiento de amortiguación (Rinde 4 L) </td><td><ol><li> Trizma base 121,1 g </li><li> La glicina 577 g </li><li> 40 g de SDS </li></ol></td></tr><tr><td> Tampón de transferencia 10 veces: (para 4 L) </td><td><ol><li> La glicina 360 g </li><li> Trizma base 96 g </li></ol></td></tr><tr><td> Ponceau </td><td><ol><li> Ponceau S. 0,5 g </li><li> Ácido acético 5 ml </li><li> DI H 2 0 95 ml </li></ol></td></tr><tr><td> 0,2% solución de HCl </td><td> 5,2 ml de HCl en 500 ml de H 2 0 </td></tr><tr><td> PVP-T20 bloqueo Soln. (Hace 4 L) </td><td><ol><li> PVP-40 40 g </li><li> DPBS 38,2 g </li><li> Tween20 2 g </li><li> Timerisol 0,4 g </li><li> 1M Tris pH 7,6 (60,6 g de Tris HCl + 13,9 g de Tris base en 500 ml de H DI 2 0) - 50 ml </li></ol></td></tr><tr><td> Buffer 10X Blot (Rinde 4 L) </td><td><ol><li> Tween 20 20 g </li><li> Tris Base 14 g </li><li> Tris-HCl 61 g </li></ol></td></tr></tbody></table>CONTENIDO &quot;&gt; la Tabla 3. de ensayo de proteínas y Western Blotting fórmulas. Las normas de la tirosina hidroxilasa TH: Los calibrados los estándares y la fosforilación de proteínas utilizadas por este laboratorio se derivan de extractos de células PC12, que se analizaron el contenido de proteína TH y estequiometría de fosforilación de las normas en contra de un TH previamente calibrados que en última instancia se originaron en el laboratorio del Dr. John Haycock 11 .

perfiles integral del reglamento de la dopamina en la sustancia negra y el área tegmental ventral

Comprehensive Profiling of Dopamine Regulation in Substantia Nigra and Ventral Tegmental Area

La dopamina es un neurotransmisor con fuerza estudió en el SNC. De hecho, su participación en la actividad locomotora y la conducta relacionada con la recompensa ha promovido cinco décadas de investigación sobre las deficiencias moleculares asociados con la regulación de la dopamina. La mayoría de estas investigaciones de la regulación de la dopamina en el centro del cerebro sobre la base molecular para su regulación en las regiones terminales de campo de las vías y nigroestriatales mesoaccumbens, cuerpo estriado y núcleo accumbens. Además, estos estudios se han concentrado en el análisis del contenido de tejido dopamina con la normalización de peso sólo tejido húmedo. La investigación de las proteínas que regulan la dopamina, como la tirosina hidroxilasa (TH) de proteínas, la fosforilación de TH, transportador de dopamina (DAT), y el transportador vesicular de monoaminas 2 (VMAT2) de proteínas a menudo no incluyen el análisis de contenido de tejido de la dopamina en la misma muestra. La capacidad de analizar tanto el contenido de tejido dopamina y sus proteínas reguladoras (incluyendo el post-TRAmodificaciones nslational) no sólo le da el poder inherente a la interpretación de la relación de la dopamina con el nivel de proteínas y la función de TH, DAT, o VMAT2, sino que también se extiende a la economía de la muestra. Esto se traduce en un menor costo, y sin embargo, produce ideas sobre la regulación molecular de la dopamina en prácticamente cualquier paradigma de la elección de los investigadores. Nos centramos el análisis en el cerebro medio. Aunque el SN y VTA son típicamente descuidado en la mayoría de los estudios de regulación de dopamina, estos núcleos son fácilmente disecados con la práctica. Una lectura completa del contenido de los tejidos la dopamina y la TH, DAT, o VMAT2 puede llevarse a cabo. Existe un creciente literatura sobre el impacto de la función de la dopamina en el VTA SN y en el comportamiento y las Tropezaciones de sustancias exógenas o procesos de enfermedades en ellos 1-5. Además, los compuestos tales como factores de crecimiento tiene un profundo efecto sobre las proteínas de dopamina y la dopamina-regulación, en un grado relativamente mayor en el SN o VTA <sup&gt; 6-8. Por lo tanto, esta metodología se presenta para referencia a los laboratorios que deseen ampliar sus investigaciones sobre cómo los tratamientos específicos modulan el comportamiento y la regulación de la dopamina. Aquí, un método de varios pasos que se presentan para el análisis de contenido de tejido de dopamina, los niveles de proteína de TH, DAT, o VMAT2 y TH fosforilación de la sustancia negra del mesencéfalo y VTA de los roedores. El análisis de la fosforilación de TH puede proporcionar importantes conocimientos sobre no sólo cómo la actividad de TH se regula, sino también las cascadas de señalización en los núcleos afectados somatodendrítica en un paradigma determinado. Vamos a ilustrar la técnica de disección para separar estos dos núcleos y el procesamiento de la muestra de tejido disecado que produce un perfil de revelar los mecanismos moleculares de regulación de dopamina in vivo, específicos para cada núcleos (Figura 1).

La dopamina está claramente regulado en los núcleos del cerebro medio, que contiene la celda de los cuerpos y las dendritas de las neuronas de dopamina. Aquí se describe un método de disección y manejo de la muestra-para maximizar los resultados, y por lo tanto las conclusiones y puntos de vista, sobre la regulación de la dopamina en el núcleo del cerebro medio de la sustancia negra (SN) y el área tegmental ventral (VTA) en los roedores.

Perfiles Integral del Reglamento de la dopamina en la sustancia negra y el área tegmental ventral

La dopamina es un neurotransmisor ampliamente estudiado en el SNC. De hecho, su implicación en la actividad locomotora y en el comportamiento relacionado con la recompensa ha fomentado cinco ...

El objetivo general de este procedimiento es maximizar la información de las respuestas moleculares asociadas con la regulación de la dopamina a partir de una única disección de tejido de las regiones somatodendríticas del cerebro medio. Esto se logra primero mediante una disección precisa para separar la sustancia negra del área tegmental ventral. El segundo paso consiste en procesar los tejidos para el análisis de dopamina mediante HPLC y en procesar adicionalmente la proteína endógena precipitada para su análisis.A continuación, el procesamiento de la proteína precipitada para determinar el contenido total de proteínas permite identificar qué proteínas reguladoras de la dopamina o qué fosforilaciones proteicas pueden medirse junto con la cuantificación del contenido tisular de dopamina en la muestra. En última instancia, los análisis de la dopamina y sus proteínas reguladoras en regiones somatodendríticas discretas del mesencéfalo permiten extraer conclusiones sobre los mecanismos moleculares asociados con la regulación de la dopamina.Las monoaminas afectan muchos resultados conductuales, y de hecho, los investigadores en el campo de la adicción, la biología y la disfunción loco

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Un protocolo para realizar unilaterales 6-OHDA lesiones del haz medial del cerebro anterior en ratones se ha descrito. Este método tiene una baja tasa de mortalidad (13,3%) con el 89% de los animales sobrevivientes que muestran la pérdida de&gt; 95% de la dopamina estriatal y 90,63 ± -4,02% sesgo ipsiversive de rotación hacia el lado de la lesión.

Desarrollo de una manera unilateral-lesionado 6-OHDA modelo de ratón de la enfermedad de Parkinson

El uso rápido de exploración voltametría cíclica para medir la dinámica evocada eléctricamente presináptica de dopamina estriatal en rodajas de cerebro.

Dinámica presináptica de dopamina estriatal en rodajas de cerebro de voltametría cíclica rápida de exploración

Este video muestra la implantación de electrodos y cánulas en una rata anestesiada para medir la liberación de dopamina en el núcleo accumbens utilizando un potenciostato y la infusión de fármacos para modular la actividad dopaminérgica en el área tegmental ventral.

Monitorización de la liberación de dopamina en un modelo de rata con manipulación del receptor de neuronas dopaminérgicas VTA

Este protocolo describe dos manipulaciones ambientales diferentes y un protocolo de infusión cerebral concurrente para estudiar los cambios cerebrales inducidos por el medio ambiente que subyacen al comportamiento adaptativo y la reparación cerebral en ratones adultos.

Modulaciones Ambientales del Número de dopamina mesencéfalo neuronas en ratones adultos

La voltamperometría cíclica de exploración rápida puede monitorizar la neurotransmisión in vivo de dopamina en el contexto de fármacos, enfermedades y otras manipulaciones experimentales. Este trabajo describe la implementación de QNsim1.0, un software para modelar las respuestas de dopamina eléctricamente estimuladas de acuerdo con el modelo neurobiológico cuantitativo para cuantificar las estimaciones de liberación de dopamina y la dinámica de recaptura.

Modelado de datos de voltametría cíclica de exploración rápida de datos de neurotransmisión de dopamina estimulada eléctricamente usando QNsim1.0

Absorción de la dopamina Synaptosomal y cromatografía líquida de alto rendimiento representan experimental las herramientas de análisis para investigar la homeostasis de la dopamina en ratones mediante la evaluación de la función de transportador de la dopamina y los niveles de dopamina en el tejido estriado, respectivamente. Aquí presentamos los protocolos para medir contenido de tejido de dopamina y evaluar la funcionalidad del transportador de dopamina.

Evaluación de la Homeostasis dopaminérgica en ratones por medio de análisis de cromatografía líquida de alto rendimiento y absorción de la dopamina Synaptosomal

Identificación del receptor de dopamina D1-alfa en el Núcleo accumbens es fundamental para clarificar la disfunción del receptor D1 durante una enfermedad del sistema nervioso central. Se realizó un análisis para un RNA nuevo en situ hibridación para visualizar solo moléculas de ARN en un área específica del cerebro.

Identificación del Receptor de dopamina D1-alfa en roedores núcleo Accumbens por una innovador ARN In Situ la tecnología de detección

El objetivo de este protocolo es manipular directamente los receptores del área tegmental ventral para estudiar su contribución a la liberación de dopamina de subsectores.

Infusión y estimulación combinadas con voltamperometría cíclica de exploración rápida (CIS-FSCV) para evaluar la regulación del receptor del área tegmental ventral de la dopamina fásica

Aquí presentamos un método automatizado para la determinación semicuantita cuantitativa del número de neuronas dopaminérgicas en el compacta de las igualdades del nigra del substantia de la rata.

Determinación Semicuantita cuantitativa de la densidad de la neurona dopaminérgica en la sustancia negra de modelos de roedores utilizando el análisis automatizado de imágenes

Este protocolo muestra cómo adquirir datos de imágenes de resonancia magnética sensibles a la neuromelanina de la sustancia negra.

Adquisición estandarizada de datos para imágenes de resonancia magnética sensibles a la neuromelanina de la sustancia negra

Aprende a disecar la sustancia negra y el área tegmental ventral en roedores para analizar la regulación de la dopamina mediante HPLC y proteínas endógenas. Este método maximiza la información molecular obtenida de una sola muestra de tejido.

Perfiles Integral del Reglamento de la dopamina en la sustancia negra y el área tegmental ventral

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