Name: La producción de seda sintética araña a escala de laboratorio (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-18T12:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 36 s
Description: Aprende a producir seda sintética de araña a escala de laboratorio mediante la imitación del proceso natural de hilado. Este método eficiente utiliza proteínas recombinantes expresadas en bacterias y purificadas por cromatografía.

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Este trabajo fue apoyado por la NSF RUI Becas MCB-0950372 y DMR-1105310 titulada &quot;Caracterización molecular de Black Widow sedas de araña y comportamiento mecánico de araña Sedas pegamento&quot;, respectivamente.

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<li>La Mattina, C., Reza, R., Hu, X., Falick, A. M., Vasanthavada, K., McNary, S., Yee, R., Vierra, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spider+minor+ampullate+silk+proteins+are+constituents+of+prey+wrapping+silk+in+the+cob+weaver+Latrodectus+hesperus%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Spider minor ampullate silk proteins are constituents of prey wrapping silk in the cob weaver Latrodectus hesperus.</a> Biochemistry. 47, 4692-4700 (2008).</li>
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No hay conflictos de interés declarado.

Las fibras sintéticas hiladas a partir de esta metodología son mecánicamente en el mismo orden de magnitud en comparación con las fibras naturales. Al disminuir la cantidad de errores humanos mediante la mecanización de la cola de impresión y los procesos posteriores de giro del sorteo, la variación entre muestras experimentales son más controlado y reducido en gran medida. Nuestra metodología ofrece la posibilidad de investigar las propiedades mecánicas de las fibras de otros que se tejen a...

La seda de araña tiene extraordinarias propiedades mecánicas que lleva a cabo a cabo varios materiales hechos por el hombre, incluyendo acero de alta resistencia, kevlar y nylon. 1 Las arañas tejen por lo menos 6-7 diferentes tipos de fibras que presentan diversas propiedades mecánicas, cada uno diseñado con cantidades variables de resistencia a la tracción y capacidad de ampliación para llevar a cabo tareas específicas de biológicos. 2 Los investigadores científicos están buscando rápidamente el uso de sedas de araña como biomateriales de próxima generación, debido a sus excelentes propiedades mecánicas, de su biocompatibilidad, y su carácter no tóxico y material verde. 3,4 Debido a la caníbal y la naturaleza venenosa de los arácnidos, la cosecha sedas de araña a través de la agricultura no es una estrategia práctica para satisfacer las demandas necesarias para la fabricación a escala industrial. Por lo tanto, los científicos han recurrido a la producción de proteínas recombinantes en seda organismos transgénicos, junto con in vitro hilado de fibras sintéticas de lasE proteínas purificadas. 8.5 Expresión de larga duración en proteínas recombinantes de seda de araña ha sido técnicamente difícil, dadas las propiedades intrínsecas de sus secuencias genéticas, que incluyen su naturaleza altamente repetitivo y longitudes físicas (&gt; 15 kb), GC-rica de contenido y parcial alanina y glicina uso de codones. 9.11 Hasta la fecha, la mayoría de los laboratorios se han centrado en la expresión de formas truncadas de las principales proteínas de la seda ampullate MaSp1 o MASP2 usando secuencias parciales de ADNc o genes sintéticos. 12-15 Spinning sintética las sedas de araña es un proceso difícil que requiere el dominio y el conocimiento en varias disciplinas científicas, y las complejidades del proceso de hilado no se han revelado al público en general por la representación de vídeo. De hecho, sólo un puñado de laboratorios en todo el mundo tienen la experiencia para expresar el ADNc de seda de araña, purificar las proteínas de la seda, hacer girar las fibras sintéticas y llevar a cabo después de la vuelta empate, y, finalmente, probar sus propiedades de biomateriales. 8,16,17 Diferentes enfoques para la hilatura de fibras sintéticas han abarcado hilado en húmedo y seco, así como los métodos de electrospinning 16,18,19 Todos los procedimientos tienen una meta en común -. El desarrollo de un protocolo que produce la seda de araña sintética con propiedades mecánicas que rivalizan con hilos naturales a gran escala los procesos de fabricación comerciales. A continuación se describe el procedimiento para generar las sedas de araña artificiales a escala de laboratorio utilizando una metodología de hilatura en húmedo. En comparación con otros métodos de hilado, hilado en húmedo ha producido los resultados más consistentes para el análisis de fibra. Se describen este procedimiento comenzando con la expresión de las proteínas recombinantes en bacterias de seda, seguido por la purificación de ellos y, a continuación se describen los pasos de preparación de proteínas para el hilado, incluyendo una metodología sorteo posterior giro aplicado a &quot;como&quot; fibras hiladas en que los rendimientos de hilos con propiedades de los materiales que se acercan a la calidad de las sedas de araña naturales. Nuestro METODOLOGÍy está diseñado para imitar el proceso natural de hilado de fibras de seda y se basa en gran medida nuestra experiencia de la arquitectura y el funcionamiento de las glándulas productoras de seda de la orbe-y mazorca de tejido de las arañas. 20-22 Además, se concluye con la necesaria pasos para determinar las propiedades del material de las fibras sintéticas utilizando un tensiómetro para trazar curvas tensión-deformación, que permiten a los investigadores a calcular la resistencia última, deformación última, y ​​la tenacidad de las fibras. Por último, pero de gran valor, los aparatos de hilatura, cola, y el dibujo puede estar en casa-construida con piezas disponibles en el mercado, en lugar de la compra de equipos a medida elaborado y costoso.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reactivo / Equipo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> pBAD / TOPO ThioFusion Kit de Expresión </td><td> Invitrogen </td><td> K370-01 </td><td></td></tr><tr><td> Lisis de la célula FastBreak reactivo, 10x </td><td> Promega </td><td> V857C </td><td></td></tr><tr><td> Ni-NTA agarosa </td><td> Qiagen </td><td> 30210 </td><td> Incluye instrucciones para tampones </td></tr><tr><td> ProteoSilver kit de tinción de plata </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> PROTSIL1-1KT </td><td></td></tr><tr><td> FreeZone liofilizador </td><td> Labconco </td><td> 7960041 </td><td> FreeZone 12plus </td></tr><tr><td> Hexafluoroisopropanol (HFIP) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 52512 </td><td></td></tr><tr><td> Jeringa </td&gt; <td> Hamilton </td><td> 7657-01 </td><td> 250 L </td></tr><tr><td> Aguja </td><td> Hamilton </td><td> 7780-01 </td><td> Medidor de 26s, extremo romo aguja intercambiable; </td></tr><tr><td> Bomba de jeringa </td><td> Aparato de Harvard </td><td> 702208 </td><td> 11Plus </td></tr><tr><td> Caliper Digital </td><td> Carrera </td><td> CP5906 </td><td> Rango 0-150 mm </td></tr><tr><td> Pinzas de acero inoxidable </td><td> World Precision Instruments </td><td> 501764 </td><td> Mini Dumont # M5S </td></tr><tr><td> Motor </td><td> Naturaleza Molino </td><td> 7090529 </td><td> 12 V CC, 2 rpm de velocidad </td></tr><tr><td> Actuador lineal </td><td> Warner Electric </td><td> 01-D024-0050-A06-LP-IP65 </td><td> 24VDC, rango de 6 pulgadas </td></tr><tr><td> Microscopio de disección </td><td> Leica Microsystems </td><td> Leica MZ16 </td><td></td></tr><tr><td> Digital MicroscOpe cámara </td><td> Leica Microsystems </td><td> DFC320 </td><td> Software: Leica Application Suite v2.8.1 </td></tr><tr><td> Vannas tijera </td><td> World Precision Instruments </td><td> 500260 </td><td></td></tr><tr><td> Microtensometer </td><td> Aurora, la Ciencia </td><td> 310C </td><td> 5N de modo dual del sistema </td></tr></tbody></table>

la producción de seda sintética araña a escala de laboratorio

Synthetic Spider Silk Production on a Laboratory Scale

Mientras la sociedad avanza y los recursos se vuelven escasos, cada vez es más importante cultivar las nuevas tecnologías que los biomateriales de ingeniería de última generación con propiedades de alto rendimiento. El desarrollo de estos nuevos materiales estructurales debe ser rápida, rentable y hacer participar a las metodologías de procesamiento y productos respetuosos con el medio ambiente y sostenible. Las arañas tejen una multitud de diferentes tipos de fibras con diversas propiedades mecánicas, que ofrece una rica fuente de material próximos generación de ingeniería para el biomimetismo que rivalizan con los mejores materiales naturales y artificiales. Desde la recogida de grandes cantidades de seda de araña natural es poco práctico, la producción de seda sintética tiene la capacidad de proporcionar a los científicos el acceso a un suministro ilimitado de temas. Por lo tanto, si el proceso de hilatura puede ser simplificado y perfeccionado, fibras artificiales araña tiene el uso potencial de una amplia gama de aplicaciones que van desde chalecos antibalas, sutura quirúrgicas, cuerdas y cordajes, neumáticos, cuerdas para instrumentos musicales, y materiales compuestos para la aviación y la tecnología aeroespacial. Con el fin de avanzar en el proceso de producción de seda sintética y para producir fibras que muestran poca variación en sus propiedades materiales de la vuelta a girar, se desarrolló un protocolo de hilatura en húmedo que se integra la expresión de proteínas recombinantes de seda de araña en las bacterias, la purificación y concentración de las proteínas , seguido por extrusión de fibra y un tratamiento mecánico posterior giro. Esta es la primera representación visual que revela un proceso paso a paso para hacer girar y analizar fibras de seda artificial a escala de laboratorio. También proporciona detalles para minimizar la introducción de variabilidad entre las fibras hiladas a partir de la mezcla de hilatura mismo. En conjunto, estos métodos impulsará el proceso de producción de seda artificial, lo que lleva a las fibras de mayor calidad que superan las sedas de araña naturales.

A pesar de las excelentes propiedades mecánicas y bioquímicas de las sedas de araña, este material no pueden ser cosechadas en grandes cantidades por medios convencionales. A continuación se describe una estrategia eficiente para hacer girar las fibras artificiales de seda de araña, que es un proceso importante para los investigadores que estudian la producción de seda de araña y su uso como la próxima generación de biomateriales.

La producción de seda sintética araña a escala de laboratorio

A medida que la sociedad progresa y los recursos escasean, resulta cada vez más importante desarrollar nuevas tecnologías que diseñen la próxima generación de...

El objetivo general de este procedimiento es producir seda sintética de araña imitando el proceso natural de hilado de seda para replicar el proceso de hilado de seda en el laboratorio. Grandes cantidades de proteína de seda recombinante se producen en bacterias, seguidas de purificación mediante cromatografía y concentración mediante liofilización. La proteína se solubiliza y la solución de hilado se impulsa a través de una jeringa con una aguja de pequeño diámetro hacia un baño de alcohol deshidratante.Finalmente, las fibras sintéticas recién hiladas se someten a un estirado posterior al hilado para mejorar la orientación molecular de las cadenas proteicas. La principal ventaja de esta técnica frente a métodos existentes como la electrohilatura o la hilatura en seco es su menor costo, facilidad de manipulación y el potencial para ampliar el procedimiento a un formato de producción a gran escala. Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia el desarrollo de una nueva clase de biomateriales.Estos materiales pueden utilizarse en una amplia variedad de aplicaciones diferentes, como suturas, armaduras corporales y cuerdas para instrumentos musicales. Aunque este método puede proporcionar información sobre las propiedades materiales de las sedas de araña, también puede aplicarse al estudio de otros tipos de biopolímeros producidos a partir de proteínas recombinantes. En general, las personas nuevas en esta técnica tendrán dificultades porque requiere experiencia en muchas disciplinas, incluyendo bioingeniería, biofísica, biología celular y molecular, y bioquímica.La primera vez que tuvimos la idea de este método fue cuando necesitamos imitar el proceso natural de hilado que realiza la araña, con el fin de producir fibras sintéticas. Para generar el plásmido que se utilizará en la producción de seda de araña, se amplifica el ADNc deseado de la seda de araña utilizando conjuntos específicos de cebadores y se liga a un vector de expresión procariota, como el PBA topo thio fusion. Este vector posee una etiqueta N-terminal de tiorredoxina para facilitar la solubilización de la proteína de seda y una etiqueta C-terminal de seis x his para la purificación de la proteína.Una vez ligados, los productos de ligación se transforman en células competentes de E. coli y se cultiva una colonia que contiene el plásmido. La expresión de la proteína de seda de araña se induce entonces mediante la adición de AOSe, y las células se centrifugan y almacenan a menos 80 grados Celsius hasta su uso para lisar las células bacterianas. Añada 20 mililitros de tampón de lisis 1x al precipitado celular para resuspendir completamente las células. A continuación, para promover una mayor lisis celular, añada lisozima hasta una concentración de un miligramo por mililitro para digerir el ADN cromosómico, lo que reduce la viscosidad de la solución en 100 microgramos de ADN.Luego, coloque la muestra en un agitador orbital y agite suavemente durante 20 minutos a temperatura ambiente. Someta la solución a sonicación durante un minuto en el nivel 19 para aclararla, luego centrifugue a 16.000 Gs durante 10 minutos a cuatro grados Celsius. Tras la centrifugación, verifique que el sobrenadante sea no viscoso y claro; si la solución es viscosa y turbia, agregue más ADN, vuelva a sonicar y recupere el sobrenadante.Una vez que el sobrenadante esté claro, transfiéralo a una columna limpia de 25 mililitros BioRad Poly-Prep para cromatografía de afinidad con níquel NTA. Para purificar la proteína de fusión, agregue un mililitro de suspensión de níquel N游戏副本 que contenga 0,5 mililitros de perlas a la columna, asegure firmemente la tapa y la llave de paso, y luego coloque la columna en un agitador durante una hora para equilibrarla y permitir la unión de la etiqueta seis X his a las perlas de níquel NTA. Coloque la columna verticalmente en un soporte y deje que las perlas de níquel NTA sedimenten durante aproximadamente dos minutos.Cuando las perlas estén completamente sedimentadas, se puede observar una capa de color azul claro en el fondo. Retire la tapa y deje que la solución fluya a través de la llave de paso. Recopile la solución en un tubo cónico de 15 mililitros.Para análisis adicionales, agregue 20 mililitros de tampón de lavado 1x y permita que las remolachas sedimenten. Abra la llave de paso y recopile el flujo en cuatro alícuotas de cinco mililitros. Para análisis posteriores, almacene las alícuotas a cuatro grados Celsius o a menos 80 grados Celsius para almacenamiento a corto o largo plazo, respectivamente.Tenga en cuenta que se pueden usar volúmenes adicionales de lavado para reducir la proteína contaminante; sin embargo, esto puede disminuir el rendimiento total de proteína. A continuación, agregue 20 mililitros de tampón de elución 1x y deje que la resina se asiente; abra la llave de paso y permita que la solución fluya. Recoja esta solución, que contiene 20 mililitros, en cuatro alícuotas de cinco mililitros para su posterior análisis.Almacene a cuatro grados Celsius o a menos 80 grados Celsius para almacenamiento a corto o largo plazo, respectivamente. Tenga en cuenta que se pueden recolectar volúmenes adicionales de elución del resina de níquel NTA si es necesario. A continuación, separe las proteínas según sus masas moleculares.Mediante análisis por electroforesis en gel SDS-PAGE, visualice las proteínas con plata o azul brillante de Coomassie R-250; solo deben utilizarse fracciones puras para los siguientes pasos. Confirme la identidad de la proteína purificada mediante análisis por inmunotransferencia (Western blot). Para eliminar sales y concentrar la proteína, realice diálisis y liofilice la muestra según las instrucciones del documento adjunto, y almacene las muestras liofilizadas a menos 80 grados Celsius. El propósito de los siguientes pasos es preparar la solución de hilado y la jeringa para el proceso de hilado, trabajando bajo una campana de seguridad.Agregue cuidadosamente la cantidad adecuada de HEXA fluoro, ISOPROPANOL o HFIP a cada tubo con polvo de proteína seca para obtener una concentración de 200 miligramos por mililitro a 500 miligramos por mililitro, o del 20 % al 50 % semanal en volumen. Tape inmediatamente el tubo después de agregar HFIP, envuelva los tubos con película y colóquelos sobre un agitador para solubilizar la proteína mediante vortex, facilitando así la solubilización. Este proceso puede tardar hasta dos días.Una vez solubilizada, centrifugue la muestra a 16.000 Gs durante dos o tres minutos. Una vez que la proteína esté en solución, se denominará disolución de hilado. La solución será extremadamente viscosa.Asegúrese de que no haya agregados presentes, ya que podrían obstruir la jeringa. En el siguiente paso, cargue cuidadosamente al menos 25 microlitros de la solución viscosa en una jeringa Hamilton Gast tight, equipada con una aguja de 127 micrones de diámetro interno, sosteniendo la jeringa con la aguja hacia arriba para presionar el émbolo. Para eliminar cualquier burbuja de aire, es muy importante eliminar las burbujas de aire, ya que crearán inconsistencias en la fibra.A continuación, fije la jeringa a un aparato Harvard, bomba de jeringa 11 plus. Coloque un vaso de precipitados de 400 mililitros lleno con isopropanol al 95 % sobre un soporte móvil de manera que la punta de la jeringa rompa ligeramente la superficie del alcohol. Configure la bomba de jeringa a 15 microlitros por minuto y presione inicio.La extrusión de la fibra. Debe tardar de uno a dos minutos, dependiendo del volumen inicial de la solución de hilado. Una vez que toda la solución se haya convertido en fibra, deje la fibra en el isopropanol durante 20 minutos para que alcance completamente el equilibrio.A continuación, se recoge la muestra utilizando un dispositivo de bobinado. El dispositivo de bobinado utilizado aquí fue fabricado pegando peines metálicos a un calibrador digital. Como se muestra en esta imagen, aplique cinta adhesiva de doble cara a ambos lados del peine del dispositivo de bobinado.Luego, sujete el dispositivo de bobinado a un motor. Ajuste el motor para bobinar los hilos a dos RPM. A continuación, utilizando pinzas, tome suavemente un extremo de la fibra y tire lentamente de ella fuera del isopropanol.Sujételo al borde de uno de los brazos del peine en el carrete. Utilizando la cinta de doble cara, realice los siguientes pasos sin detenerse para evitar que las fibras se sequen. Encienda el motor y use una varilla de vidrio para guiar suavemente la fibra hacia el dispositivo de enrollado.No permita que la fibra se doble ni se acumule. La cinta adhesiva de doble cara debe evitar que toda la fibra se deslice y permite el estiramiento selectivo de los segmentos internos de las fibras dentro de los brazos del calibrador.Una vez que toda la fibra esté enrollada, desacople el carrete del motor y aplique pegamento al borde de cada fibra de seda sobre la cinta de doble cara. Esto fija la seda de araña al aparato. Fije el carrete al actuador lineal para realizar el estirado posterior al hilado.Determine la longitud inicial de las fibras utilizando la C. Esta es la longitud interna de la fibra. No incluye la longitud pegada y enrollada alrededor del carrete. Sumerja el carrete en un baño de isopropanol al 75 %.Deje que las fibras se equilibren durante 10 minutos. Establezca la velocidad del actuador lineal en 1,5 milímetros por segundo. Con base en la longitud inicial, calcule la longitud final para la relación de estirado deseada después del estirado.La cantidad de estiramiento puede controlarse según la velocidad o la longitud, dependiendo del montaje. Por ejemplo, con una longitud inicial de 15 milímetros y una relación de estirado posterior deseada de tres x, la longitud final debe ser de 45 milímetros. Esto también puede calcularse como accionar el actuador lineal durante 20 segundos a una velocidad de 1,5 milímetros por segundo.En segundo lugar, una vez completada la extracción del cilindro, eleve lentamente el carrete fuera del isopropanol. Permita que las gotas de isopropanol se evaporen durante un minuto para recolectar las muestras. Primero, corte un extremo de la fibra mientras sostiene el otro extremo con pinzas.Corte ese extremo y monte la fibra sobre portas o marcos de aluminio para fines de prueba. Si se desean relaciones adicionales de estirado posterior, baje nuevamente el carrete en el baño de isopropanol al 75 %. Deje que las fibras se equilibren durante 10 minutos y luego continúe con el siguiente baño posterior.Relación de estiramiento. Registre la humedad y la temperatura, ya que pueden afectar las fibras. Propiedades mecánicas.Deje que las muestras recogidas se equilibren en el ambiente estándar del laboratorio. Un 40% de humedad y 25 grados Celsius son ideales durante al menos una hora antes de la prueba mecánica. Con la fibra montada en el marco de cartulina, aplique pegamento instantáneo a los bordes de la cartulina o del papel de aluminio para asegurar la fibra en el marco.Tome nota del tamaño de la abertura del marco. Esta es la longitud inicial de la fibra ensayada. Aquí se muestra un marco con abertura de una pulgada utilizando un microscopio óptico con un aumento de 100x o mayor para tomar mediciones del diámetro a lo largo del eje longitudinal de la fibra.Se deben registrar al menos tres mediciones. Cuanto mayor sea la ampliación utilizada y mayor la cantidad de mediciones realizadas, mejor será la precisión. Fije el marco de cartulina resistente a un marco mecánico de carga tensora.Luego corte el marco por ambos lados para que la tensión solo actúe a través de la fibra. Rompa el portaobjetos y recolecte los datos. Se recomienda una velocidad de deformación estándar de 2% por segundo.El procedimiento de recopilación de datos mecánicos puede variar dependiendo de la marca de la estiradora utilizada para los estudios. Utilizando los datos recopilados sobre el diámetro promedio, se puede trazar una curva de tensión-deformación en Microsoft Excel. Ahora, la fibra rota puede montarse en un microscopio electrónico de barrido, Stu, para análisis morfológico y mediciones del diámetro en el punto de ruptura.El segmento de fibra alejado del punto de ruptura puede utilizarse para estimar y verificar el diámetro inicial medido mediante el microscopio óptico. La proteína de seda de araña MASP1 se expresó y purificó a partir de bacterias para determinar la pureza de la proteína antes de hilar la fibra; las proteínas se sometieron a fraccionamiento por tamaño. Mediante análisis por electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS seguido de visualización con tinción de plata, como se muestra aquí, las seis soluciones revelan que la mayor parte de la muestra se libera dentro de las primeras cuatro fracciones.La proteína de seda de araña TUSP1 también se produjo según el protocolo presentado aquí y se hiló en fibras para determinar las propiedades mecánicas de las sedas sintéticas en forma tubular. Las fibras se hilaron y se realizaron relaciones crecientes de estiramiento posterior. Los colores en esta imagen muestran fibras sometidas a diferentes relaciones de estiramiento posterior que varían desde 2,5 x hasta 6 x. Las fibras muestran baja variación dentro de su grupo de relación.Al aumentar las relaciones de estirado del hilado, se incrementa la resistencia de la fibra mientras disminuye su extensibilidad. Sin embargo, las fibras mostraron niveles equivalentes de tenacidad para evaluar la ultraestructura de las fibras mediante microscopía electrónica de barrido; se obtuvieron imágenes de fibras hiladas a partir de proteínas recombinantes de tsp uno, como se puede observar aquí. La superficie externa lisa puede observarse con un aumento de 500 veces y a 5.000 aumentos.El núcleo interno denso puede observarse a partir de una fractura natural de la fibra. Esto sugiere que las proteínas recombinantes se están ensamblando y empaquetando adecuadamente durante el proceso de extrusión. Una vez dominada, esta técnica puede realizarse en 10 días si se lleva a cabo correctamente.Al realizar este procedimiento, es importante eliminar toda la sal de la proteína recombinante purificada antes del paso de liofilización y asegurarse también de utilizar la concentración correcta de la solución viscosa para hilar, a fin de evitar que la aguja se obstruya durante el proceso de extrusión siguiendo este procedimiento. Otras fibroínas, como mes, P one TUSB one y P ysb one, pueden hilarse en fibras individuales o como materiales compuestos para producir una amplia gama de biomateriales tras su desarrollo. Esta técnica allanó el camino para que investigadores en el campo de la bioingeniería y la ciencia de materiales exploraran el uso de sedas sintéticas de araña en aplicaciones con implicaciones en los ámbitos médico militar, artístico, atlético y automotriz.Después de ver este video, debería tener una mejor comprensión de cómo hilar fibras de seda sintéticas o materiales compuestos utilizando proteínas purificadas de bacterias. No olvide que trabajar con AFib puede ser extremadamente peligroso y que siempre se deben tomar precauciones, como trabajar bajo una campana extractora, al realizar este procedimiento.

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