Name: Un In Vitro Preparación para Obtener y grabar programas de alimentación del motor con los movimientos fisiológicos en Aplysia californica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 49 s
Description: Aprende a registrar la actividad eléctrica de nervios, músculos y neuronas durante los programas motores de alimentación en Aplysia californica. Este método permite relacionar directamente la actividad neuronal con los movimientos del aparato de alimentación.

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Esta investigación fue financiada por el NIH subvención NS047073 y NSF subvención DMS1010434.

<ol><li>Neustadter, D. M., Herman, R. L., Drushel, R. F., Chestek, D. W., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+kinematics+of+multifunctionality%3A+comparisons+of+biting+and+swallowing+in+Aplysia+californica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">The kinematics of multifunctionality: comparisons of biting and swallowing in Aplysia californica.</a> J. Exp. Biol. 210, 238-260 (2007).</li>
<li>Morton, D. W., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+buccal+nerve+activity+that+distinguishes+ingestion+from+rejection+can+be+used+to+predict+behavioral+transitions+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">In vivo buccal nerve activity that distinguishes ingestion from rejection can be used to predict behavioral transitions in Aplysia.</a> J. Comp. Physiol. A. 172, 17-32 (1993).</li>
<li>Hurwitz, I., Neustadter, D., Morton, D. W., Chiel, H. J., Susswein, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+patterns+of+the+B31%2FB32+pattern+initiators+innervating+the+I2+muscle+of+the+buccal+mass+during+normal+feeding+movements+in+Aplysia+californica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophys%22%5BJournal%5D)">Activity patterns of the B31/B32 pattern initiators innervating the I2 muscle of the buccal mass during normal feeding movements in Aplysia californica.</a> J. Neurophys. 75, 1309-1326 (1996).</li>
<li>Cullins, M. J., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrode+fabrication+and+implantation+in+Aplysia+californica+for+multi-channel+neural+and+muscular+recordings+in+intact%2C+freely+behaving+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Electrode fabrication and implantation in Aplysia californica for multi-channel neural and muscular recordings in intact, freely behaving animals.</a> J. Vis. Exp. (40), e1791(2010).</li>
<li>Warman, E. N., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+technique+for+chronic+single+extracellular+recording+in+freely+behaving+animals+using+pipette+electrodes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A new technique for chronic single extracellular recording in freely behaving animals using pipette electrodes.</a> J. Neurosci. Methods. 57, 161-169 (1995).</li>
<li>Lu, H., Chestek, C. A., Shaw, K. M., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+extracellular+stimulation+of+individual+neurons+in+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neural+Eng%22%5BJournal%5D)">Selective extracellular stimulation of individual neurons in ganglia.</a> J. Neural Eng. 5, 287-309 (2008).</li>
<li>Church, P. J., Lloyd, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+diverse+neuropeptide+cotransmitters+by+identified+motor+neurons+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Expression of diverse neuropeptide cotransmitters by identified motor neurons in Aplysia.</a> J. Neurosci. 11, 618-625 (1991).</li>
<li>Church, P. J., Lloyd, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+multiple+identified+motor+neurons+recorded+intracellularly+during+evoked+feedinglike+motor+programs+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophys%22%5BJournal%5D)">Activity of multiple identified motor neurons recorded intracellularly during evoked feedinglike motor programs in Aplysia.</a> J. Neurophys. 72, 1794-1809 (1994).</li>
<li>Nargeot, R. N., Baxter, D. A., Byrne, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contingent-dependent+enhancement+of+rhythmic+motor+patterns%3A+an+in+vitro+analog+of+operant+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Contingent-dependent enhancement of rhythmic motor patterns: an in vitro analog of operant conditioning.</a> J. Neurosci. 17, 8093-8105 (1997).</li>
<li>Kandel, E. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKandel%2C+ER+%22Behavioral+biology+of+Aplysia%22">Behavioral biology of Aplysia</a>. , Freeman. San Francisco. (1979).</li>
<li>Scott, M. L., Govind, C. K., Kirk, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuromuscular+organization+of+the+buccal+system+in+Aplysia+californica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neuromuscular organization of the buccal system in Aplysia californica.</a> J. Comp. Neurol. 312, 207-222 (1991).</li>
<li>Susswein, A. J., Rosen, S. C., Gapon, S., Kupfermann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+buccal+motor+programs+elicited+by+a+cholinergic+agonist+applied+to+the+cerebral+ganglion+of+Aplysia+californica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Characterization of buccal motor programs elicited by a cholinergic agonist applied to the cerebral ganglion of Aplysia californica.</a> J. Comp. Physiol. A. 179, 509-524 (1996).</li>
<li>Kupfermann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeding+behavior+in+Aplysia%3A+A+simple+system+for+the+study+of+motivation%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Biol%22%5BJournal%5D)">Feeding behavior in Aplysia: A simple system for the study of motivation.</a> Behav. Biol. 10, 1-26 (1974).</li>
<li>Morton, D. W., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+timing+of+activity+in+motor+neurons+that+produce+radula+movements+distinguishes+ingestion+from+rejection+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">The timing of activity in motor neurons that produce radula movements distinguishes ingestion from rejection in Aplysia.</a> J. Comp. Physiol. A. 173, 519-536 (1993).</li>
<li>Weiss, K. R., Chiel, H. J., Koch, U., Kupfermann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+an+identified+histaminergic+neuron%2C+and+its+possible+role+in+arousal+of+feeding+behavior+in+semi-intact+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Activity of an identified histaminergic neuron, and its possible role in arousal of feeding behavior in semi-intact Aplysia.</a> J. Neurosci. 6, 2403-2415 (1986).</li>
<li>Jing, J., Weiss, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+variants+of+a+motor+act+in+a+modular+and+hierarchical+motor+network%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Generation of variants of a motor act in a modular and hierarchical motor network.</a> Curr. Biol. 15, 1712-1721 (2005).</li>
<li>Jing, J., Weiss, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+mechanisms+of+motor+program+switching+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neural mechanisms of motor program switching in Aplysia.</a> J. Neurosci. 21, 7349-7362 (2001).</li>
<li>Morgan, P. T., Jing, J., Vilim, F. S., Weiss, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interneuronal+and+peptidergic+control+of+motor+pattern+switching+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Interneuronal and peptidergic control of motor pattern switching in Aplysia.</a> J. Neurophysiol. 87, 49-61 (2002).</li>
<li>Jing, J., Cropper, E. C., Hurwitz, I., Weiss, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+construction+of+movement+with+behavior-specific+and+behavior-independent+modules%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The construction of movement with behavior-specific and behavior-independent modules.</a> J. Neurosci. 24, 6315-6325 (2004).</li>
</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

El trabajo previo ha caracterizado Aplysia programas motores en el animal intacto y en preparaciones reducidas, tales como ganglios aislado. En el animal intacto, aunque las grabaciones de las neuronas individuales se han obtenido 5, estos experimentos son muy difíciles, y los electrodos no se puede mover desde una neurona a otra durante la alimentación. En los ganglios aislado, los movimientos de alimentación inducidos por la actividad neural no se puede observar. La preparación de la masa suspendid...

<table><tbody><tr><td>Cloruro de sodio</td><td>Fisher Scientific</td><td>S671</td><td>Biológico, Certificado</td></tr><tr><td>Cloruro de potasio</td><td>Fisher Scientific</td><td>P217</td><td>ACS Certificado</td></tr><tr><td>Cloruro de magnesio hexahidratado</td><td>Acros Organics</td><td>19753</td><td>99% </td></tr><tr><td>Sulfato de magnesio heptahidratado</td><td>Fisher Scientific</td><td>M63</td><td>ACS Certificado </td></tr><tr><td>Cloruro de calcio dihidratado</td><td>Fisher Scientifc</td><td>C79</td><td>ACS Certificado </td></tr><tr><td>Glucosa (dextrosa)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7528</td><td>BioXtra</td></tr><tr><td>Tampón MOPS</td><td>Acros Organics</td><td>17263</td><td>99%</td></tr><tr><td>Carbacol</td><td>Acros Organics</td><td>10824</td><td>99%</td></tr><tr><td>Hidróxido de sodio</td><td>Fisher Scientific</td><td>SS255</td><td>Certificado</td></tr><tr><td>Ácido clorhídrico</td><td>Fisher Scientific</td><td>SA49</td><td>Certificado</td></tr><tr><td>Vidrio capilar de un solo canal</td><td>A-M Systems</td><td>6150</td><td></td></tr><tr><td>Modelo P-80/PC de micropipeteador Flaming-Brown</td><td>Sutter Instruments</td><td></td><td>Filamento utilizado: FT345B</td></tr><tr><td>Alambre de acero inoxidable recubierto con esmalte</td><td>California Fine Wire</td><td></td><td>0.001D, recubrimiento h </td></tr><tr><td>Pegamento de silicona Household Silicone II</td><td>GE</td><td></td><td> </td></tr><tr><td>Supercola Duro Quick-Gel</td><td>Henkel corp.</td><td></td><td> </td></tr><tr><td>Amplificador modelo 1700 de A-M Systems</td><td>A-M Systems</td><td></td><td>Ajustes del filtro: 300-500 Hz nervios, 10-500 Hz músculo I2</td></tr><tr><td>Estimulador multicanal Pulsemaster</td><td>World Precision Instruments</td><td>A300</td><td></td></tr><tr><td>Aislador de estímulo</td><td>World Precision Instruments</td><td>A360</td><td></td></tr><tr><td>AxoGraph X</td><td>AxoGraph Scientific</td><td></td><td> </td></tr><tr><td>Contador totalizador Veeder-Root</td><td>Danaher</td><td>C342-0562</td><td></td></tr><tr><td>Pines conectoras de oro</td><td>Bulgin</td><td>SA3148/1</td><td></td></tr><tr><td>Enchufes conectoras de oro</td><td>Bulgin</td><td>SA3149/1</td><td></td></tr><tr><td>Elastómero de silicona Sylgard 184</td><td>Dow Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plato cristalizador de 100 x 50 mm</td><td>Pyrex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Grasa de alto vacío</td><td>Dow Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Puntas de pipeta</td><td>Fisher Scientific</td><td>21-375D</td><td></td></tr><tr><td>Alfileres Minutien</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>Plastilina</td><td>Sargent Art</td><td>22-4400</td><td></td></tr><tr><td>Suturas de seda</td><td>Ethicon</td><td>K89OH</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de aire Whisper</td><td>Tetra</td><td>77849</td><td></td></tr><tr><td>Tubo para acuario</td><td>Eheim</td><td>7783</td><td>12/16 mm</td></tr><tr><td>Piedra de aire Elite</td><td>Hagen</td><td>A962</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de resorte Vannas</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas finas Dumont n.º 5</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Alga nori para sushi Yaki</td><td>Rhee Bros</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34155</td><td></td></tr></tbody></table>

un<em&gt; in vitro</em&gt; preparación para obtener y grabar programas de alimentación del motor con los movimientos fisiológicos en<em&gt; aplysia californica</em

An In Vitro Preparation for Eliciting and Recording Feeding Motor Programs with Physiological Movements in Aplysia californica

Multifuncionalidad, la capacidad de una estructura periférica de generar comportamientos múltiples y distintas 1, permite a los animales adaptarse rápidamente su comportamiento a los cambios del entorno. El molusco marino Aplysia californica proporciona un sistema tratable para el estudio de la multifuncionalidad. Durante la alimentación, Aplysia genera varios tipos distintos de comportamientos utilizando el mismo aparato de alimentación, la masa bucal. Los ganglios que controlar estos comportamientos contener un número de neuronas grandes, identificados que son accesibles para el estudio electrofisiológico. La actividad de estas neuronas se ha descrito en los programas motores que se pueden dividir en dos tipos, programas de ingestión y egestive, basado en el tiempo de la actividad neural que se cierra la pinza de agarre de alimentos relativa a la actividad neural que prolonga o se retrae la pinza 2. Sin embargo, en los ganglios aislados, los movimientos musculares que se producen estos comportamientos están ausentes, por lo que esmás difícil estar seguro de si los programas de motores observados son correlatos de los comportamientos reales. En grabaciones vivo, nerviosas y musculares se han obtenido correspondiente a los programas de alimentación 2,3,4, pero es muy difícil de grabar directamente de las neuronas individuales 5. Además, en vivo, programas de ingestión puede ser dividida en picaduras y 1,2 traga, una distinción que es difícil de hacer en la mayoría se ha descrito previamente en preparaciones in vitro. La preparación de la masa suspendida bucal (Figura 1) cierra la brecha entre los ganglios aislados y animales intactos. En esta preparación, los comportamientos de ingestión - incluyendo tanto mordiendo y tragando - y comportamientos egestive (rechazo) puede ser obtenido, al mismo tiempo, como las neuronas individuales pueden ser grabadas desde y estimulado con electrodos extracelulares 6. Los movimientos de alimentación asociados con estas conductas diferentes puede ser RecorDED, cuantificado y relacionado directamente con los programas motores. Los programas de motor en la preparación de la masa suspendida bucal parecen ser más similares a los observados in vivo que son los programas de motor provocada en los ganglios aislado. Así, los programas de motor en esta preparación puede ser más directamente relacionada con el comportamiento in vivo; al mismo tiempo, las neuronas individuales son más accesibles para registro y estimulación que en los animales intactos. Además, como un paso intermedio entre los ganglios aislado y animales intactos, los hallazgos de la masa suspendida bucal puede ayudar en la interpretación de los datos obtenidos en configuraciones tanto más reducidas y más intacta. La preparación de la masa suspendida bucal es una herramienta útil para caracterizar el control neural de la multifuncionalidad en Aplysia.

Cuando un electrodo extracelular se coloca por encima del soma de una neurona y se utiliza para estimularla, puede observarse una correspondencia uno a uno entre los potenciales de acción en el canal del soma y en el(los) nervio(s) al que la neurona proyecta (Figura 6, panel izquierdo, estimulación de la neurona identificada B9). El canal del soma (canal superior) se configura en modo de estimulación cuando se aplica la corriente (tiempo 1 en la figura) y luego se cambia rápidamente a modo de registro (t...

Se describe una técnica para registrar extracelularmente y estimular los nervios, los músculos y las neuronas individuales identificados<em&gt; In vitro</em&gt; Tiempo que se obtiene y la observación de los diferentes tipos de comportamientos de alimentación en el aparato de la alimentación de<em&gt; Aplysia</em&gt;.

Un<em&gt; In Vitro</em&gt; Preparación para Obtener y grabar programas de alimentación del motor con los movimientos fisiológicos en<em&gt; Aplysia californica</em

La multifuncionalidad, la capacidad de una estructura periférica para generar múltiples comportamientos distintos1, permite que los animales adapten rápidamente sus comportamientos...

El objetivo general de este procedimiento es registrar la actividad eléctrica de los nervios, músculos y neuronas, así como los movimientos correspondientes del aparato bucal durante los programas motores de alimentación. Esto se logra primero extrayendo la masa bucal de una pleurobranchia anestesiada y colocando electrodos de gancho en nervios y músculos clave. El segundo paso consiste en colocar la masa bucal en una placa de registro y preparar los ganglios para la grabación extracelular.A continuación, se localizan las neuronas diana utilizando electrodos extracelulares. El paso final consiste en inducir y registrar programas motores de alimentación, como morder, tragar y rechazar. En última instancia, se utiliza la preparación de la masa bucal suspendida para mostrar la actividad de los nervios, los músculos y las neuronas individuales durante diferentes movimientos similares a la alimentación de la masa bucal.La principal ventaja de esta técnica frente a métodos existentes como los estudios de ganglios aislados es que las grabaciones de nervios, músculos y neuronas individuales pueden relacionarse directamente con los movimientos del aparato alimentario. Quien ayudará a demostrar el procedimiento será huu, un estudiante de posgrado de nuestro laboratorio. Para comenzar el procedimiento, anestesie una plejía sana de 200 a 300 gramos en una bandeja de disección inyectando aproximadamente el 50 % del peso corporal en cloruro de magnesio isotónico. Después de la primera inyección cerca de la cola del animal, masajee suavemente la superficie del animal para distribuir el cloruro de magnesio.Administre inyecciones adicionales cerca de la cabeza del animal según sea necesario. Después de que el animal deje de responder a estímulos táctiles suaves, fíjelo en la bandeja con el lado dorsal hacia arriba. Coloque un alfiler en la cola y un alfiler en cada tentáculo anterior.Luego, use la pinza para pellizcar y levantar la piel del animal en la parte media de la cabeza. Detrás de los cuernos del rinoceronte, realice una incisión coronal a través de la cabeza del animal, justo detrás del punto que se está sujetando. Después de eso, haga una incisión sagital media entre los cuernos del rinoceronte hacia la boca para exponer la masa bucal.A continuación, separe la aleta de piel del macizo bucal y corte los nervios y el tejido conectivo que se adhieren a la pared corporal. Para separar completamente esta aleta de piel del macizo bucal, asegúrese de no cortar ningún nervio ni tejido intrínseco del macizo bucal. Posteriormente, tome y sostenga el esófago.Corte el esófago por detrás del punto que se está sujetando. Tire hacia arriba del esófago y levante la masa bucal detrás de la masa bucal. Los ganglios cerebral, pleural y pedal forman un anillo, con el ganglio cerebral unido a los ganglios bucales mediante los conectivos cerebro-bucales.Deje estos ganglios anulares adheridos a la masa bucal y corte todos los nervios que se proyectan desde estos ganglios hacia otras partes del cuerpo. Luego, corte el tejido conectivo alrededor de la masa bucal y continúe levantando la masa bucal a medida que se desprende del cuerpo. Una vez que la masa bucal solo esté adherida a la boca, sostenga el esófago y la masa bucal.Directamente hacia arriba. Realice un corte final justo anterior a las mandíbulas para liberar la masa bucal del cuerpo. Coloque la masa bucal en una solución de 50% de cloruro de magnesio isotónico y 50% de solución salina SIA para mantener una anestesia parcial mientras se colocan los electrodos.Posteriormente, coloque la masa bucal con la solución en una placa de Petri con fondo de cigarro, cortando a través de la arteria bucal en la superficie ventral de la masa bucal. Luego, retire los ganglios pleurales y pedales cortando sus conexiones con el ganglio cerebral. Deje el ganglio cerebral unido a los ganglios bucales y a la masa bucal mediante los CBC y seccione las demás conexiones entre el ganglio cerebral y la masa bucal.Recorte el esófago y las glándulas salivales a longitudes cortas. En este paso, fije los electrodos con gancho al nervio ocular ular, a los dos nervios musculares bucales dos y tres, y a la rama A del nervio bucal dos. Utilice un procedimiento similar al demostrado en la publicación de JoVE por Collins y Shield, y resumido brevemente aquí.Para cada desprendimiento de electrodo, coloque el electrodo cerca del nervio o músculo, introduzca el nervio objetivo en el gancho y levántelo suavemente utilizando un manipulador. Luego seque la sección del nervio con una toallita Kim. Aplique una gota de pegamento rápido tipo gel al nervio enganchado y asegúrese de que el gancho quede completamente cubierto con pegamento y que la punta del alambre de referencia no esté cubierta con pegamento.A continuación, utilice una jeringa con una fijación de tubo de polietileno para aplicar la solución desde el recipiente sobre el adhesivo, lo que inducirá al adhesivo a solidificarse en su superficie. El siguiente paso consiste en preparar un recipiente redondo de grabación de Pyrex de 100 por 50 milímetros para usarlo como cámara de registro; aplique una capa delgada de grasa de vacío en la muesca entre las cámaras cerebral y dorsal con la punta de una pipeta, con el fin de minimizar las fugas. Luego, llene la cámara frontal con una solución salina de plescia.Transfiera cuidadosamente la masa bucal desde la placa de Petri a la cámara frontal del recipiente redondo de Pyrex, y asegúrese de que ninguno de los electrodos quede estirado con fuerza, lo cual podría romper los nervios. Tenga mucho cuidado con los electrodos en forma de gancho si es necesario trasladar el recipiente a otro microscopio estereoscópico. Para adelgazar la vaina.Agrupe los electrodos en cada lado de la masa bucal. Sostenga cuidadosamente los electrodos agarrando la cinta de laboratorio que cubre los pasadores del conector, y nuevamente, asegúrese de que ninguno de los electrodos quede tensado. Cuando el recipiente esté colocado bajo el microscopio, los electrodos deben colgar suavemente sobre los bordes del recipiente y descansar sobre la plataforma durante las pausas y entre las etapas del experimento; airee la solución salina en la cámara de la masa bucal utilizando una piedra aireadora para acuario.A continuación, sujete el ganglio cerebral en la cámara posterior con los CBC pasando por la muesca. Aplique más grasa de vacío sobre los CBC. Luego, añada más solución salina SIA a ambas partes del recipiente para que los ganglios queden completamente sumergidos.Asegúrese de que el nivel de salino esté por debajo de la altura de la grasa al vacío entre las cámaras cerebral y bucal para que no ocurra ninguna fuga entre las cámaras. En esta etapa, la masa bucal debe quedar en el fondo de la cámara frontal. A continuación, sujete con alfileres los ganglios bucales en la plataforma intermedia para evitar dañar los nervios que aún están unidos a la masa bucal.Coloque las agujas únicamente en la vaina entre dos nervios. Luego añada dos agujas más en el lateral de las CBC para estirarlas y fijarlas. Mantenga los ganglios bucales planos o girados según la ubicación de las neuronas de interés.Para rotar el ganglio bucal, utilice un par de pinzas finas para agarrar un exceso de la vaina del CBC y fíjelo entre el nervio bucal dos y el nervio bucal tres. Luego, la mayor parte de los cuerpos celulares que están próximos a la cámara posterior y no se pueden acceder fácilmente desde la parte superior del ganglio bucal ahora pueden verse. Por último, coloque dos alfileres en la vaina del ganglio bucal cercanos al lado de la masa bucal.Para minimizar el movimiento del ganglio bucal, sujete la vaina del ganglio bucal próxima a la cámara posterior y corte el exceso de vaina con tijeras finas sin exponer los cuerpos celulares. Con el fin de minimizar daños, retire únicamente la cantidad de vaina necesaria para visualizar los cuerpos celulares una vez finalizado el adelgazamiento de la vaina. Conecte todos los pines de los electrodos a sus conectores en los cables que se unen a los amplificadores.Asegúrese de que los electrodos no estén tensos y que estén correctamente conectados a sus cables correspondientes, y de que las polaridades sean correctas para lavar cualquier resto de cloruro de magnesio. Reemplace la salina SIA en la cámara del mase bucal con salina SIA fresca. A continuación, pase un hilo de seda a través del tejido blando en la parte frontal del mase bucal y dorsal al cartílago de la mandíbula.Utilice dos piezas de arcilla modelable para sujetar la sutura al borde del platillo, suspendiendo así la masa bucal desde su posición en el extremo anterior. Un manipulador sostiene un electrodo extracelular de vidrio de forma que la punta del electrodo esté cerca del ganglio bucal. Para localizar e identificar una neurona, baje suavemente la punta del electrodo extracelular sobre la vaina.Sobre el soma neuronal. Aplique una corriente estimulante y luego cambie el canal que se está utilizando para excitar el soma a modo de grabación, con el fin de registrar la actividad en el electrodo extracelular y la actividad correspondiente en los nervios para inducir el rechazo. Como los programas motores estimulan el nervio bucal dos A con una larga serie de pulsos de dos hercios y un milisegundo para generar patrones de ees.Los patrones continúan durante toda la duración de la estimulación y pueden persistir hasta poco después de que finalice la estimulación. Para inducir programas motores similares a la mordedura, coloque unos pocos cristales de caracol sólido directamente sobre el ganglio cerebral.Los patrones repetitivos generalmente comienzan dentro de los cinco minutos y duran aproximadamente de 10 a 15 minutos antes de empezar a disminuir para inducir la deglución. Al igual que con los programas motores, aplique caracol y espere hasta que la masa bucal genere mordidas fuertes. Luego, durante una mordida, coloque una tira de alga marina en la boca del animal de modo que esta atrape el alga marina.Aquí se muestra la estimulación y grabación del motoneurona identificado B nueve y la grabación de la misma neurona, el músculo I dos y varios nervios durante programas motores de alimentación. Aquí se presentan las imágenes de video tomadas de la misma serie de programas motores. Se indujeron patrones de deglución mediante la aplicación de carbacol al ganglio cerebral y la posterior colocación de una tira de alga en el órgano de prensión durante la mordida inducida por carbacol.En esta imagen, la rádula se ha protruido para agarrar el alga, y en esta imagen, la rádula se ha retraído, introduciendo el alga en la boca. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo preparar la masa bucal suspendida y obtener grabaciones de los programas motores de alimentación in vitro.

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Investigación

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Neurociencia

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Aquí te presentamos un protocolo para lesiones quirúrgicas mínimamente invasivas de los músculos intrínsecos al aparato de alimentación del molusco marino Aplysia californica para entender las funciones de estos músculos durante el comportamiento de alimentación.

Una técnica de lesión mínimamente invasiva para los músculos intrínsecos al odontoforo de Aplysia californica

Este protocolo presenta un método para obtener imágenes de la actividad de la población neuronal con resolución de una sola célula en especies de invertebrados no transgénicos utilizando colorantes sensibles al voltaje de absorbancia y una matriz de fotodiodos. Este enfoque permite un flujo de trabajo rápido, en el que las imágenes y el análisis se pueden realizar en el transcurso de un solo día.

Imágenes ópticas basadas en fotodiodos para registrar dinámicas de red con resolución de una sola neurona en invertebrados no transgénicos

Este protocolo detalla un ensayo cuantitativo de defecación en el joven mutante RAC1/ CED-10 Caenorhabditis elegans, proporcionando un modelo sencillo para estudiar los estadios de la enfermedad prodrómica de Parkinson. Supera las limitaciones de otros modelos animales y facilita la prueba de estrategias terapéuticas dirigidas a la patología parkinsoniana temprana.

Evaluación de la motilidad gastrointestinal en mutantes de Caenorhabditis elegans RAC1/CED-10 como herramienta para estudiar la enfermedad de Parkinson en los primeros años

Aprende a registrar la actividad eléctrica de nervios, músculos y neuronas durante los programas motores de alimentación en Aplysia californica. Este método permite relacionar directamente la actividad neuronal con los movimientos del aparato de alimentación.

Un In Vitro Preparación para Obtener y grabar programas de alimentación del motor con los movimientos fisiológicos en Aplysia californica (Video) | JoVE Journal

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