Procedimientos Quirúrgicos para un modelo de rata de trasplante hepático ortotópico parcial con reconstrucción arterial hepática

El objetivo general de este procedimiento es realizar un trasplante hepático ortotópico parcial en ratas como un modelo experimental reproducible para la investigación en trasplantes. Esto se logra primero extrayendo el hígado de la rata donante. El segundo paso es la preparación del injerto hepático ex vivo, que incluye una resección hepática del 50 %.

A continuación, se extirpa el hígado nativo de la rata receptora. El paso final consiste en la implantación del injerto hepático parcial en la rata receptora. Finalmente, se miden los niveles séricos de alanina aminotransferasa para evaluar el daño hepatocelular en el injerto hepático tras el trasplante.

Generalmente, las personas nuevas en este procedimiento tienen dificultades debido a la complejidad del mismo, que requiere habilidades avanzadas de microcirugía. Para comenzar este procedimiento, coloque la rata donante anestesiada sobre una almohadilla térmica después de confirmar, mediante un pellizco en el dedo del pie, que el animal está completamente anestesiado, y fije los brazos superiores utilizando el sistema de fijación magnética con retracción. Afeite el vello de toda el área abdominal de la rata y esterilice la piel correspondiente con una solución de povidona yodada.

Abra el abdomen mediante una incisión media con extensiones bilaterales. Coloque una jeringa de cinco mililitros debajo de la espalda de la rata de modo que la vena cava suprahepática se eleve ventralmente utilizando una pinza de mosquito, tire del proceso hacia la cabeza y coloque los retractores subcostales para abrir el campo quirúrgico. Debido a la necesidad de manipular frecuentemente los retractores y la jeringa de cinco mililitros durante el procedimiento, no se utilizan campos quirúrgicos alrededor de la incisión; trabajando bajo un microscopio quirúrgico con un aumento de 16x, diseca el ligamento falciforme y el ligamento triangular izquierdo en forma de ocho, divide la vena frénica izquierda y retrae los lóbulos medio y lateral izquierdo hacia arriba con una gasa húmeda.

Con pinzas bipolares, coagule y divida los vasos paraesofágicos entre el lóbulo lateral izquierdo y el lóbulo anterior. Mueva los intestinos fuera del abdomen hacia el lado izquierdo de la rata y cúbralos con una gasa húmeda. Con la gasa húmeda, retráigase hacia arriba el lóbulo lateral derecho.

Aislar la vena cava infrahepática del tejido retroperitoneal y ligar la vena suprarrenal derecha, que se dividirá más tarde justo antes de la extracción del injerto para insertar una endoprótesis en el conducto biliar; primero, ligar el conducto biliar a nivel de la bifurcación de la arteria gastroduodenal. Realizar una pequeña incisión en la pared anterior del conducto biliar proximal al punto ligado, y mientras se sostiene la pared anterior de la incisión con una pinza microquirúrgica recta en la mano izquierda, utilizar una pinza microquirúrgica curva en la mano derecha para insertar una endoprótesis en el conducto. Fijarla con un hilo de seda seis cero.

Mantenga uno de los extremos cortados del hilo en el conducto biliar con una longitud de cuatro milímetros para que el hilo pueda sujetarse durante la anastomosis posterior. Libere la vena porta de las venas porí y esplénica mediante ligadura y sección; ligue y seccione la arteria gastroduodenal. Luego aísle la arteria hepática común desde la cabeza del páncreas hasta su raíz.

Gire el hígado hacia la derecha con hisopos de algodón y disecque el ligamento alrededor de la parte posterior del hígado y del esófago al finalizar los preparativos. Para la escisión hepática. Retire los retractores, la pinza mosquito del proceso xifoides y la jeringa de cinco mililitros colocada debajo de la parte posterior de la rata.

Devuelva los intestinos a la cavidad abdominal. Inyecte 500 UI de heparina sódica en dos mililitros de solución salina normal a través de la vena peneana. Aproximadamente tres minutos después, coloque nuevamente la jeringa de cinco mililitros, la pinza de mosquito y el retractor, y ligue la arteria hepática común proximal a su raíz.

Mantenga uno de los extremos cortados del hilo ligado para la arteria hepática común. Mucho tiempo después de ocluir la vena cava infrahepática. Cerca de la vena renal derecha con una pinza de mosquito.

Sujete la vena porta con una pinza desechable para microvasos por debajo del muñón de la vena esplénica. Incise la pared anterior de la vena porta e inserte un catéter de calibre 18 en la vena porta. Perfunda el hígado in situ con 60 mililitros de solución fría de histidina, triptófano y alfa-cetoglutarato.

A una presión hidrostática de 20 centímetros, el agua cortó inmediatamente el diafragma, la vena cava intratorácica y la pared anterior de la vena cava infrahepática para permitir que la solución de perfusión fuera lavada fuera del hígado. Sujete la vena cava infrahepática con una pinza para microvasos justo debajo del hígado. Extirpe el hígado disecando la vena cava infrahepática.

La vena porta, el diafragma, los ligamentos restantes, la vena suprarrenal derecha y la arteria hepática común. Coloque el hígado extirpado en solución HTK fría dentro de un vaso metálico colocado en una caja de plástico llena de hielo triturado. Los procedimientos para el injerto hepático se realizan en el vaso metálico lleno de solución HTK helada, para la fijación de una manga en la vena porta; sujete el tronco venoso portal con una pinza DeBakey tipo bulldog y coloque la pinza en posición puente sobre el vaso.

Pase la vena porta a través de la manga y sujete nuevamente la vena al lado de la extensión de la manga en la posición de las 12 en punto; invierta la pared de la vena porta sobre la manga para colocar el muñón de la vena esplénica fuera de la manga en la posición de las 7 en punto, y asegure la vena porta con un hilo de seda seis cero para insertar un stent en la arteria hepática. Fije el hígado sujetando con pinzas ambos bordes del diafragma y tense la arteria hepática común sujetando el hilo ligado con la pinza DeBakey tipo bulldog y tijeras microquirúrgicas rectas. Realice una pequeña incisión en la pared anterior de la arteria hepática común con la mano izquierda.

Sujete la pared anterior de la incisión con una pinza microquirúrgica recta y, con la mano derecha, inserte un stent en la arteria hepática común. Utilizando una pinza microquirúrgica curva, fije el stent con un hilo de seda seis cero y deje uno de los extremos cortados del hilo con una longitud de cuatro milímetros. Lave el hígado a través del catéter arterial con cinco mililitros de solución HTK fría para la resección del 50 % del hígado.

Primero, sujete el lóbulo de la coordenada posterior con una pinza de mosquito para fijarlo en su lugar. Luego, ligue su pedículo con un hilo de seda cuatro ceros y reseque el lóbulo.

Se retira el lóbulo coracoideo anterior de la misma manera. A continuación, gire la caja de plástico 90 grados. Sujete el borde derecho del diafragma y la porción izquierda del lóbulo medio.

Realice una pequeña incisión en el borde superior del límite de las porciones bilaterales del lóbulo medial y luego retire la porción izquierda tras la ligadura. Tras la ligadura del pedículo con un hilo de seda cuatro ceros, retire el lóbulo lateral izquierdo y cauterice cuidadosamente la superficie hepática resecada con fórceps bipolar. La masa hepática ahora se ha reducido aproximadamente en un 50 % para la plastia de la vena cava suprahepática.

Primero, fije la posición del hígado sujetando ambos bordes del diafragma con una pinza mosquito. Luego, recorte la pared anterior de la vena cava suprahepática eliminando la porción correspondiente del diafragma. Coloque 2 suturas de polipropileno 7-0 desde el exterior hacia el interior en ambas esquinas como suturas de retención para la anastomosis posterior.

A continuación, recorte la pared posterior de la vena cava suprahepática. Almacene el injerto hepático a cuatro grados Celsius en solución HTK dentro de un baño de agua fría. Prepare al receptor para la cirugía de manera similar al procedimiento del donante y abra el abdomen mediante una incisión en línea media.

Coloque un hisopo húmedo de gasa sobre el lado derecho del duodeno y sobre todo el intestino. Para obtener un campo quirúrgico alrededor de la vena cava infrahepática, coloque los lóbulos laterales izquierdo y medio en la cavidad subfrénica izquierda y retráigase el lóbulo lateral derecho hacia arriba con un hisopo húmedo de gasa.

Aislar la vena cava infrahepática del tejido retroperitoneal, ligar y dividir la vena suprarrenal derecha con gasa húmeda y torundas de algodón. Rotar el hígado hacia la izquierda y disecar el ligamento alrededor de la parte posterior del hígado. Seccionar el conducto biliar justo por debajo de la rama del lóbulo caudado.

Mantenga uno de los extremos cortados del hilo ligado para el conducto biliar de cuatro milímetros de longitud; ligue y divida la arteria gastroduodenal y la arteria hepática propia a una distancia de tres milímetros del punto de bifurcación desde la arteria hepática común, para obtener una estructura arterial amplia en el extremo de la arteria hepática común. Aplique un clamp vascular metálico microvascular en la vena cava infrahepática justo por encima de la vena renal derecha, y en la vena porta a nivel de su bifurcación en el hilio hepático mediante una pinza tipo mosquito. Aplique un clamp vascular periférico en la vena cava suprahepática junto con el diafragma, y fije el clamp en un bloque de arcilla oleosa. Reduzca la anestesia con isoflurano al 0,4 por ciento en volumen. Extirpe el hígado nativo del receptor disecando la vena cava suprahepática en la zona límite entre esta y el hígado.

La vena porta justo por encima de la mordaza de la pinza para mosquitos y la vena cava infrahepática ligeramente por debajo del punto medio entre el hígado y la vena renal derecha. Coloque el injerto hepático de forma ortotópica. La reconstrucción del vaso es la parte más difícil e importante de este procedimiento.

Debe hacerse con mucha precaución pero rápidamente para la anastomosis de la vena cava suprahepática mediante sutura continua. Coloque la sutura de fijación en la vena cava suprahepática del receptor de dentro hacia fuera utilizando el polipropileno siete cero adjunto en la esquina derecha del injerto, seguido de hacer un nudo de la misma manera. Coloque la segunda sutura de fijación en la esquina izquierda.

Este será el punto inicial de una sutura corrida. Para ampliar la anastomosis, sujete y mantenga los hilos mediante pinzas DeBakey en ambas esquinas, aplicando tracción suave en dirección superior lateral. A continuación, atraviese con el hilo la esquina izquierda a través de la pared en el lado del injerto, de fuera hacia dentro, cerca del nudo exterior, y realice la fila posterior de la vena cava satélite intraluminal con siete u ocho puntos hasta la esquina derecha.

Realice las primeras puntadas con cuidado para que las luzes internas queden enfrentadas entre sí en la esquina correcta. Pase el polipropileno siete ceros a través del vaso desde el lado del injerto hacia el exterior. Suture la fila anterior desde el exterior de derecha a izquierda con aproximadamente 10 puntadas.

Lave el interior con solución de Ringer con lactato. Para eliminar las burbujas de aire, realice el último punto cerca del punto de fijación y luego átelos juntos. Para la reconstrucción de la vena porta, ocluya la vena porta mediante una pinza para microvasos y fije la pinza mosquito en la arcilla. A continuación, haga una incisión en la pared anterior de la v游戏副本

Lave el interior de la vena porta receptora y la manga con solución de Ringer con lactato. Inserte la manga en la vena porta y fíjela con un hilo de seda seis cero de forma circunferencial. Por último, vuelva a perfundir el hígado.

Retire la jeringa de cinco mililitros de la espalda de la rata y aumente la concentración de isoflurano al 0,8 por ciento en volumen para la reconstrucción del hígado mediante una técnica de stent. Primero, sostenga el hilo de la arteria hepática propia con pinzas de mosquito y fíjelo en el barro. Luego, ocluya la arteria hepática común del receptor.

Realice una pequeña incisión en la bifurcación de la estructura en Y al final de la arteria hepática común para crear una abertura con forma de embudo. Sujete el stent colocado en la arteria hepática común del injerto con una pinza microquirúrgica curva. Introduzca el stent en la arteria hepática común del receptor y fíjelo con un hilo de seda seis ceros. Amarre un extremo de este hilo junto con el hilo de cuatro milímetros en la arteria hepática común del injerto, de modo que ambas arterias hepáticas comunes queden más cercanas entre sí, reduciendo la tensión en el sitio de anastomosis.

Después de eso, suelte la pinza del amplificador para la anastomosis de la vena cava infrahepática mediante una sutura continua anastos de la misma manera que para la vena cava suprahepática, pero utilice más puntos con mordeduras más finas. Después del desclampaje, aumente la concentración de anestesia a 1,0 por ciento en volumen para la reconstrucción del conducto biliar. Sujete el hilo del conducto biliar del receptor con una pinza mosquito y fíjelo en el barro.

Realice una pequeña incisión en el conducto biliar al nivel adecuado para que el conducto biliar reconstruido no sea demasiado largo. Inserte el stent y fíjelo con un hilo de seda seis ceros. Anude este hilo y el hilo del conducto del injerto.

Juntos ahora, todos los procedimientos de reconstrucción han finalizado. Cierre la incisión abdominal mediante suturas continuas de Vicryl cuatro ceros en capas. Inmediatamente después de la operación, trate a la rata receptora con una inyección subcutánea de sodio esférico y buprenorfina en un total de 1,5 mililitros de solución salina normal.

Permita que la rata se recupere durante 60 minutos en una jaula especial de unidad de cuidados intensivos con aire caliente y suministro de oxígeno antes de devolverla a una jaula normal. Todas las ratas receptoras sobrevivieron hasta la eutanasia programada para la extracción de sangre a las 1, 3, 24 y 168 horas tras la reperfusión portal. Las muestras de suero se analizaron para determinar los niveles de alanina aminotransferasa, que reflejan el grado de daño hepatocelular en los injertos hepáticos tras el trasplante.

Como se muestra en este injerto, los niveles de LT alcanzaron un pico a las 24 horas y luego disminuyeron hasta alcanzar valores normales a las 168 horas. Tras ver este video, deberías tener una buena comprensión de cómo realizar trasplantes hepáticos parciales en ratas como un modelo experimental reproducible para la investigación en trasplantes.