Name: Bilateral Común oclusión de la arteria carótida como un estímulo de preacondicionamiento adecuado para inducir la tolerancia isquémica precoz de isquemia cerebral focal (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-09T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: Aprende a inducir tolerancia isquémica temprana mediante oclusión bilateral de la arteria carótida común en ratones. Este método permite estudiar mecanismos de preacondicionamiento isquémico cerebral con aplicaciones terapéuticas potenciales para el tratamiento del ictus.

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Todos los procedimientos descritos en este artículo se realizaron de acuerdo con las directrices y normas del Landesamt für Gesundheit und Soziales, Berlín, Alemania. Procedimientos prequirúrgicos 1. Preparación de monofilamentos <ol><li> Para la preparación de filamentos intraluminales, se utilizaron 8-0 suturas de monofilamento de nylon y se cortaron a una longitud de 13 mm cada uno. </li><li> Para el recubrimiento de los monofilamentos, Xantopren M mucosa, (Heraeus Kulzer GmbH, Hanau, Alemania) se utilizó activa mediante la adición de una gota de solución de activador (Activador, más universal, Heraeus Kulzer GmbH, Hanau, Alemania). </li><li> El monofilamento se retiró lentamente a través de la silicona hasta que fue completamente cubierto con ella. Al hacerlo, el monofilamento estaría cubierto uniformemente con silicona. Evite esperar mucho tiempo ya que el material de revestimiento activo se convertirá en firme y seca rápidamente. </li><li> Antes de la silicona empieza a solidificar, Se recomienda quitarse de silicona excesiva del filamento tirando de él sobre una hoja de papel. De esta manera, la capa de silicona se puede diluir a un espesor aproximado de 200 micras. </li><li> La base del monofilamento de silicona cubierta estaba atrapado en plastilina con el fin de dejar que se seque durante la noche. </li></ol> Comentario: Idealmente, sólo esterilizados o desinfectados por lo menos monofilamentos deben utilizarse para asegurar la esterilidad en el sitio quirúrgico. En la práctica, la esterilización o desinfección de los monofilamentos hechos a mano es muy difícil debido a la calidad de los monofilamentos puede empeorar 9. Por lo tanto, podría ser preferible utilizar monofilamentos estériles disponibles comercialmente en su lugar. 2. Preparación de los instrumentos quirúrgicos y de los animales <ol><li> Todos los instrumentos quirúrgicos se mantuvieron en alcohol etílico 70%. Además, antes de cada nuevo procedimiento quirúrgico, todos los instrumentos quirúrgicos se limpiaron cuidadosamente unand desinfectarse utilizando alcohol etílico al 70%. </li><li> El área quirúrgica se desinfectó a fondo usando alcohol etílico 70% en todos los animales antes de la transección. Los sitios desinfectados se dejaron secar completamente antes de realizar las incisiones. Recorte adicional de la piel no se realizó ya que esto puede causar microabrasiones y la posterior inflamación de la piel 9. </li></ol> Los procedimientos quirúrgicos 3. El posicionamiento de la sonda LDF LDF y Monitoreo <ol><li> Para la inducción de la anestesia, los ratones fueron expuestos a una mezcla gaseosa que consiste en 30% de oxígeno, 70% de N 2 O y 2,5% de isoflurano usando un vaporizador. Para el mantenimiento de la anestesia, la concentración de isoflurano se redujo a 1,5%. Los ratones se respiraban espontáneamente a través de la máscara de respiración durante todo el procedimiento quirúrgico. </li><li> Una sonda de temperatura rectal se insertó y los ratones se fija al marco estereotáctico la exposición de la cabeza parietal. Durante la cirugía, los ratones estaban descansando en uncontrolado por termostato almohadilla térmica, garantizando una temperatura interna constante de 37,0 ± 0,5 ° C. Una incisión de línea media sagital (~ 1 cm de longitud) se realizó para exponer el cráneo parietal. </li><li> El lado izquierdo del cráneo se diseccionó cuidadosamente y una sonda de fibra óptica se fija directamente en el cráneo 2 mm caudal y 5 mm lateral desde el bregma usando pegamento instantáneo. Después, bordes de la herida fueron cuidadosamente adaptadas para evitar la hipotermia cerebral, así como las infecciones. </li><li> El ratón se dio la vuelta para exponer el lado ventral del cuello. La sonda de fibra óptica se conecta al dispositivo LDF (Periflux System 5000, Perimed, Järfälla, Suecia) a través de la conexión del adaptador de sonda (Master Sonda 418-1, Perimed; Järfälla, Suecia). </li></ol> Comentario: Al girar el ratón, la sonda de fibra óptica debe ser doblado con cuidado para evitar que se rompa el cráneo. <ol start="5"><li> El dispositivo LDF se conectó a un ordenador portátil comordenador. Grabación continua de los valores LDF se inició con PeriSoft para Windows (versión 2.50, Järfälla, Suecia). Figura 1 demuestra el curso medio CBF obtenida de diez grabaciones LDF durante BCCAO y reperfusión. </li></ol> 4. Bilateral Común oclusión de la arteria carótida <ol><li> La anestesia se mantuvo como se describe en 3.1. Ratón se colocó en su espalda. La cola y las patas del animal se fijan a la almohadilla térmica con cinta adhesiva. Se realizó una incisión en la línea media ventral sagital (~ 1 cm de longitud). </li><li> Ambas glándulas salival fueron cuidadosamente separados y se movilizaron para visualizar el subyacente del CCA. </li><li> Tanto la CCA fueron separados de cuidado de los respectivos nervios vagos y venas acompañantes sin dañar estas estructuras. Las manipulaciones de los nervios vagales pueden conducir a la disfunción transitoria o permanente del sistema nervioso parasimpático, que tiene el potencial para la aparición de arr cardiaca significativahythmia o paro cardíaco, incluso irreversible. Por lo tanto, es crucial para evitar cualquier manipulación de los nervios vagales. Un 5-0 lazo de sutura de seda floja se hizo alrededor de cada CCA. </li><li> Un pequeño tubo de silicona (diámetro 2 mm) se insertó en entre el CCA y las suturas de seda en cada lado. Este tubo se utiliza como un entablillado de la CCA de con el fin de evitar daños de las paredes arteriales cuando se aprietan las suturas (Figura 4). </li><li> Tanto CCA del fueron ocluidas durante un minuto apretando las suturas de seda. Sólo los ratones, en el que la señal de LDF se redujo a &lt;10% de la señal de línea de base se incluyeron en el estudio. Después de la reapertura de dos de CCA, se inició un período de reperfusión Cinco minutos. Por LDF se aseguró una reperfusión completa. Se excluyeron los animales con reperfusión incompleta (es decir, la recuperación &lt;90% de la CBF en comparación con el valor basal CBF). La secuencia de un minuto de BCCAO y cinco minutos de la reperfusión se repitió dos veces para un total BCCAO DURATIen de 3 min. Figura 1 muestra el curso CBF media obtenida a partir de diez grabaciones LDF durante BCCAO y reperfusión. Durante el procedimiento, se recomienda mantener el cuello herida húmeda con solución salina normal. </li><li> Después de la última reperfusión, se eliminaron todos los tubos y suturas, así como la sonda de fibra óptica pegado al cráneo, las heridas se suturaron y pomada de lidocaína (Xylocain 2%; AstraZeneca GmbH, Wedel, Alemania) se aplicó varias veces para las heridas, según sea necesario para los manejo analgésico. </li><li> Los animales fueron trasladados a un pre-calentado (30 ° C) Caja de recuperación (MediHEAT. PecoServives Ltd. Brough, Cumbria, Reino Unido) hasta haber recuperado la conciencia completa. A partir de entonces, los ratones fueron devueltos a sus jaulas de los animales. </li></ol> 5. Medio oclusión de la arteria cerebral <ol><li> Los ratones se re-anestesiado, se insertó una sonda de temperatura rectal y los ratones fueron colocados en una almohadilla de calefacción para exponer el lado ventral del cuello. Después, were fijado como se describe en la sección BCCAO. </li><li> Una ligadura permanente utilizando una sutura de seda 7-0 larga se realiza alrededor de la izquierda proximal CCA y el hilo se tira suavemente caudalmente con una abrazadera de mosquitos (Figura 4). </li><li> Otra ligadura permanente se hizo alrededor de la arteria carótida externa izquierda (CEPA) y el hilo se estira hacia el lado derecho del animal (Figura 4). </li><li> El tejido conectivo que rodea el ICA izquierda se movilizó con cuidado y el nervio hipogloso se levantó con cuidado para obtener una buena visión general del curso distal del ICA. Las curvas ICA izquierda a la izquierda, mientras que la arteria pterigopalatina (PPA) sigue el curso de la ACI proximal a la derecha (figura 4). </li></ol> Comentario: Hay otra arteria para ser identificado, que gira a la derecha en dirección caudal. Esta es la arteria occipital, que se origina de forma variable ya sea desde la bifurcación de la ACC o de la proximal parte del Tribunal de Cuentas (Figura 4). <ol start="5"><li> Un lazo de sutura floja se hace alrededor de la ACI proximal mediante un hilo de seda 5-0. </li><li> Usando una pequeña pinza microvascular, la ACI se ocluyó temporalmente distalmente al bucle de sutura suelta 5-0 (Figura 4). </li><li> Una pequeña incisión fue hecha en la parte distal del CCA justo antes de la bifurcación de la ACC utilizando tijeras microvasculares (Figura 4). </li><li> Un preseleccionado monofilamento de silicona cubierta de se introdujo en el CCA a través de la pequeña incisión y se introduce en el ICA hasta que se detuvo en la pinza microvascular (Figura 4). </li><li> El microclamp se retiró cuidadosamente de la ACI, mientras que el monofilamento se hace avanzar más profundamente en el ICA hasta que se detuvo (Figura 4). Comentario: En este punto, girar las pinzas en la mano izquierda de modo que usted no la mantiene como una pluma. Esto ayuda a tomar el filamento con las pinzas con mayor facilidad.La vascular clamp-aplicador se celebre en la mano derecha. Puede que sea necesario a casi apriete la flojo 5-0 sutura alrededor del ICA con el fin de prevenir el sangrado de la incisión lateral. </li><li> La ubicación exacta de la punta del monofilamento se identificó para comprobar si se ha avanzado en el ICA y no en el PPA. Si la punta del monofilamento se introdujo en el PPA proximal, el filamento se tiró suavemente de nuevo justo antes de la bifurcación ACI / PPA. Se intentó hacer avanzar el monofilamento en el ICA de nuevo, mientras que tirando suavemente de la ACI proximal un poco hacia el lado derecho. De esta manera, el curso natural de la ACI distal se simuló por lo que es más fácil acceder a la ICA. </li><li> Después el monofilamento se hace avanzar en el ICA casi por completo, la suelta 5-0 lazo de sutura alrededor de la ACI proximal se apretó con el fin de mantener el filamento en su lugar. Después, todos los hilos de seda se acortaron y la herida se suturó la piel. </li><li> La pérdida de líquidos durante la cirugía se replenished mediante la inyección de 1,0 ml de solución salina normal ip Después, el ratón fue transferido a la caja de recuperación precalentado hasta que se recuperó el conocimiento completo. </li><li> Para la reperfusión, los ratones fueron anestesiados y re-monofilamento se retiró después de aflojar con cuidado el hilo de sutura de seda 5-0 alrededor del ICA proximal. Posteriormente, el 5-0 de sutura se apretó de nuevo con cuidado con el fin de prevenir el sangrado. </li><li> Después de la confirmación de la hemostasia completa, la herida del cuello se suturó. </li><li> La lidocaína ungüento se aplicó varias veces localmente a la piel según sea necesario para aliviar el dolor y el ratón fue transferido a la pre-calentado (30 ° C) caja de recuperación hasta que se recuperó el conocimiento completo. </li><li> Como se observó una primera sugerencia para un procedimiento MCAO éxito, una de las agujas del reloj girando el animal. La gravedad del déficit funcional se cuantificó mediante la puntuación de Bederson modificado para los ratones 10. De acuerdo con esta puntuación Bederson modificado, los resultados neurológicos quevolver clasificado de la siguiente manera: 0 (función motora normal), 1 (flexión de tronco y extremidad anterior contralateral cuando el ratón se levantó por la cola), 2 (en circuito en el lado contralateral cuando el ratón se llevó a cabo por la cola en una superficie plana, pero lo normal postura en reposo), 3 (que se inclina hacia el lado contralateral en reposo), y 4 (sin actividad motora espontánea o muerto). </li></ol> 6. BCCAO Cirugía Sham Para los procedimientos de BCCAO simuladas, los ratones fueron anestesiados durante la duración de un procedimiento real de BCCAO PC, las glándulas salivación se movilizaron y el CCA del fueron expuestos. Es crucial que las manipulaciones directas a las arterias carótidas o de los nervios vagales se evitan durante el procedimiento simulado. Las manipulaciones de la CCA pueden dañar su capa endotelial, lo cual puede resultar en una liberación de compuestos vasoactivos de endotelio o inducir trombosis local dentro de la luz arterial. Como consecuencia, los eventos tromboembólicos pueden ocurrir después de una cirugía simulada. Esto sería un importante factor de confusión de thprocedimiento e. Por otro lado, las manipulaciones de los nervios vagales pueden conducir a la disfunción transitoria o permanente del sistema nervioso parasimpático, que tiene el potencial para la aparición de la arritmia cardiaca significativa o paro cardíaco, incluso irreversibles. Por lo tanto, es crucial para evitar cualquier manipulación de los nervios vagales durante BCCAO. Procedimientos posteriores a la cirugía 7. Infarto mediciones de volumen Para la evaluación de los tamaños de infarto, los ratones sobrevivieron durante 72 horas después de MCAO. Después los animales se anestesiaron profundamente, se retiraron los cerebros, se congelaron en metilbutan, seccionadas y teñidas con hematoxilina (utilizando el protocolo de Papanicolau) para las mediciones de volumen del infarto. Secciones de cerebro se recogieron a 600 micras de intervalos y los volúmenes de infarto se determinó usando un analizador de imágenes (MCID núcleo 7.0 Rev.2.0, GE Healthcare Cataratas Inc) y corregido para el edema de acuerdo con el método de Lin et al. 7,11 </sup&gt;. 8. Criterios de inclusión Se incluyeron sólo los animales que tenían una reducción CBF LDF-medido en más de un 90% durante cada uno de los tres episodios BCCAO. Idealmente, el monitoreo LDF se debe realizar en ambos hemisferios cerebrales durante BCCAO. Para practicabilidad, se realizó el seguimiento LDF sólo en los hemisferios izquierdo, que serán sometidos a MCAO más adelante. Este enfoque se ha descrito antes 6,12. Reperfusión después de cada episodio BCCAO debía ser completa (es decir, volver a los valores de referencia). En aras de la reducción del tiempo de duración de los ratones se mantuvieron bajo anestesia, no controlamos CBF durante la cirugía MCAO. En un estudio piloto con un grupo separado de animales sin embargo, que supervisó CBF por LDF durante la cirugía MCAO. En este grupo de ratones, se midió consistentemente una reducción en el FSC en un 90% en comparación con el valor basal antes de la oclusión CCA. Además, después de la eliminación de monofilamentos CBF recuperado a&gt; 90% de la respectivalos valores basales después de la oclusión de CCA. Estos criterios LDF se establecen en la literatura y el resultado en volúmenes de infarto consistentes 7. Sólo se incluyeron los animales que tenían una puntuación Bederson de al menos de 1 después de la recuperación de la anestesia después de MCAO. Por otra parte, sólo los animales que sobrevivieron durante 72 horas después de la MCAO y que no mostraron signos de hemorragia intracraneal se incluyeron en el estudio.

<ol><li>Roger, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2011+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2011 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 123, e18-e209 (2011).</li>
<li>Khaja, A. M., Grotta, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Established+treatments+for+acute+ischaemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Established treatments for acute ischaemic stroke.</a> Lancet. 369, 319-330 (2007).</li>
<li>Foerch, C., Sitzer, M., Steinmetz, H., Neumann-Haefelin, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Future+demographic+trends+decrease+the+proportion+of+ischemic+stroke+patients+receiving+thrombolytic+therapy%3A+a+call+to+set-up+therapeutic+studies+in+the+very+old%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Future demographic trends decrease the proportion of ischemic stroke patients receiving thrombolytic therapy: a call to set-up therapeutic studies in the very old.</a> Stroke. 40, 1900-1902 (2009).</li>
<li>Gidday, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+preconditioning+and+ischaemic+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cerebral preconditioning and ischaemic tolerance.</a> Nat. Rev. Neurosci. 7, 437-448 (2006).</li>
<li>Atochin, D. N., Clark, J., Demchenko, I. T., Moskowitz, M. A., Huang, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+cerebral+ischemic+preconditioning+in+mice+deficient+in+endothelial+and+neuronal+nitric+oxide+synthases%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Rapid cerebral ischemic preconditioning in mice deficient in endothelial and neuronal nitric oxide synthases.</a> Stroke. 34, 1299-1303 (2003).</li>
<li>Cho, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obligatory+role+of+inducible+nitric+oxide+synthase+in+ischemic+preconditioning%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood.+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Obligatory role of inducible nitric oxide synthase in ischemic preconditioning.</a> J. Cereb. Blood. Flow Metab. 25, 493-501 (2005).</li>
<li>Kunz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurovascular+protection+by+ischemic+tolerance%3A+role+of+nitric+oxide+and+reactive+oxygen+species%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neurovascular protection by ischemic tolerance: role of nitric oxide and reactive oxygen species.</a> J. Neurosci. 27, 7083-7093 (2007).</li>
<li>Dirnagl, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+operating+procedures+%28SOP%29+in+experimental+stroke+research%3A+SOP+for+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Precedings%22%5BJournal%5D)">Standard operating procedures (SOP) in experimental stroke research: SOP for middle cerebral artery occlusion in the mouse.</a> Nature Precedings. , (2010).</li>
<li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+stroke+in+mice+-+middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> J. Vis. Exp. (47), e2423(2011).</li>
<li>Bederson, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+middle+cerebral+artery+occlusion%3A+evaluation+of+the+model+and+development+of+a+neurologic+examination%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination.</a> Stroke. 17, 472-476 (1986).</li>
<li>Lin, T. N., He, Y. Y., Wu, G., Khan, M., Hsu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+brain+edema+on+infarct+volume+in+a+focal+cerebral+ischemia+model+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Effect of brain edema on infarct volume in a focal cerebral ischemia model in rats.</a> Stroke. 24, 117-121 (1993).</li>
<li>Kawano, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((iNOS-derived+NO+and+nox2-derived+superoxide+confer+tolerance+to+excitotoxic+brain+injury+through+peroxynitrite%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">iNOS-derived NO and nox2-derived superoxide confer tolerance to excitotoxic brain injury through peroxynitrite.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 27, 1453-1462 (2007).</li>
<li>Qi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublethal+cerebral+ischemia+inhibits+caspase-3+activation+induced+by+subsequent+prolonged+ischemia+in+the+C57Black%2FCrj6+strain+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Sublethal cerebral ischemia inhibits caspase-3 activation induced by subsequent prolonged ischemia in the C57Black/Crj6 strain mouse.</a> Neurosci. Lett. 315, 133-136 (2001).</li>
<li>Wu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+forebrain+ischemic+preconditioning+model+established+in+C57Black%2FCrj6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A forebrain ischemic preconditioning model established in C57Black/Crj6 mice.</a> J. Neurosci. Methods. 107, 101-106 (2001).</li>
<li>Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+Stroke+Model+Guidelines+for+Preclinical+Stroke+Trials+%281st+Edition%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Stroke+Transl.+Med%22%5BJournal%5D)">Rodent Stroke Model Guidelines for Preclinical Stroke Trials (1st Edition).</a> J. Exp. Stroke Transl. Med. 2, 2-27 (2009).</li>
<li>Nishio, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothermia-induced+ischemic+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+N.Y.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Hypothermia-induced ischemic tolerance.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 890, 26-41 (1999).</li>
<li>DeBow, S., Colbourne, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+temperature+measurement+and+regulation+in+awake+and+freely+moving+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Brain temperature measurement and regulation in awake and freely moving rodents.</a> Methods. 30, 167-171 (2003).</li>
<li>Colbourne, F., Sutherland, G. R., Auer, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+automated+system+for+regulating+brain+temperature+in+awake+and+freely+moving+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">An automated system for regulating brain temperature in awake and freely moving rodents.</a> J. Neurosci. Methods. 67, 185-190 (1996).</li>
<li>Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+induced+prolonged+protection+against+cerebral+ischemia+in+mice%3A+a+redox+sensitive+mechanism%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism?</a> Neuroreport. 13, 1431-1435 (2002).</li>
<li>Li, L., Zuo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+preconditioning+improves+short-term+and+long-term+neurological+outcome+after+focal+brain+ischemia+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Isoflurane preconditioning improves short-term and long-term neurological outcome after focal brain ischemia in adult rats.</a> Neuroscience. 164, 497-506 (2009).</li>
<li>Xiong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preconditioning+with+isoflurane+produces+dose-dependent+neuroprotection+via+activation+of+adenosine+triphosphate-regulated+potassium+channels+after+focal+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth.+Analg%22%5BJournal%5D)">Preconditioning with isoflurane produces dose-dependent neuroprotection via activation of adenosine triphosphate-regulated potassium channels after focal cerebral ischemia in rats.</a> Anesth. Analg. 96, 233-237 (2003).</li>
<li>Spratt, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+the+method+of+thread+manufacture+improves+stroke+induction+rate+and+reduces+mortality+after+thread-occlusion+of+the+middle+cerebral+artery+in+young+or+aged+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Modification of the method of thread manufacture improves stroke induction rate and reduces mortality after thread-occlusion of the middle cerebral artery in young or aged rats.</a> J. Neurosci. Methods. 155, 285-290 (2006).</li>
<li>Zarow, G. J., Karibe, H., States, B. A., Graham, S. H., Weinstein, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endovascular+suture+occlusion+of+the+middle+cerebral+artery+in+rats%3A+effect+of+suture+insertion+distance+on+cerebral+blood+flow%2C+infarct+distribution+and+infarct+volume%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol.+Res%22%5BJournal%5D)">Endovascular suture occlusion of the middle cerebral artery in rats: effect of suture insertion distance on cerebral blood flow, infarct distribution and infarct volume.</a> Neurol. Res. 19, 409-416 (1997).</li>
</ol>

No tenemos nada que revelar.

En nuestro estudio, hemos demostrado que las tres secuencias de BCCAO, con una duración de un minuto y seguida de reperfusión durante cinco minutos, son un estímulo suficiente para inducir PC isquémico temprano IT. Por otra parte, hemos demostrado que el protocolo de preacondicionamiento utilizado es un procedimiento invasivo seguro y de menor importancia sin la morbilidad postoperatoria digno de mención, sin signos de apoptosis en el cerebro y sin mortalidad. Varios protocolos de preacondic...

El ictus isquémico es una enfermedad con una alta mortalidad y una enorme carga socio-económica 1. A pesar de intensos esfuerzos científicos experimentales y clínicos de todo las últimas décadas, las opciones de tratamiento para los pacientes con accidente cerebrovascular isquémico agudo sigue siendo muy limitada 2. En contraste con esto, el incremento en el porcentaje de personas de edad avanzada en los países desarrollados aumentará dramáticamente incidencias y prevalencias de los pacientes con accidente cerebrovascular isquémico en las próximas décadas 3. Por lo tanto, hay una necesidad urgente de nuevas estrategias de tratamiento en los pacientes con accidente cerebrovascular isquémico. Un enfoque consiste en lograr una mejor comprensión de los mecanismos de adaptación endógena del cerebro para hacer frente a un estímulo dañino. Esta neuroprotección derivado del cerebro también se conoce como el precondicionamiento isquémico (PC) o la tolerancia isquémica (TI) y describe un fenómeno, en el que un estímulo nocivo no perjudicial aplicada al cerebro, induce una resistencia transitoriacontra un posterior daño isquémico insulto 4. Se presenta en dos ventanas de tiempo diferentes: principios de IT, que se produce en pocos minutos a unas pocas horas después de la PC y lo retrasó, que necesita una latencia de un par de horas para producir 4. Hasta ahora, la investigación sobre TIC en el cerebro se ha centrado en lo retrasó. Mucho menos se sabe sobre los mecanismos de principios de IT. El objetivo de este estudio es establecer oclusión de la arteria carótida común bilateral (BCCAO), que es un estímulo creado para inducir retraso de TI, como un estímulo PC adecuada para inducir a tiempo a la isquemia cerebral focal transitoria (inducida por la oclusión de la arteria cerebral media, MCAO) en ratones C57BL6 / J. Durante los dos procedimientos quirúrgicos (BCCAO y MCAO), se realizó el seguimiento del flujo sanguíneo cerebral (CBF) por la flujometría láser Doppler (LDF). BCCAO se realizó en ratones anestesiados y con respiración espontánea. Ambas arterias carótidas comunes (CCA) fueron expuestosy ocluido durante 60 segundos seguido de 5 min de reperfusión. Esta secuencia / reperfusión BCCAO se repitió dos veces. Después de la cirugía, los ratones se recuperaron rápidamente y no mostraron signos de deterioro funcional. Con el fin de descartar, que el protocolo BCCAO descrito anteriormente no dio lugar a la muerte celular retardada en el cerebro, se realizó un dUTP-biotina nick fin de etiquetado TdT-mediada (TUNEL) tinción de 72 horas después de BCCAO (o cirugía simulada) en un grupo separado. MCAO es un modelo ampliamente establecido para la inducción de isquemia cerebral focal en los roedores 5-7. Los procedimientos quirúrgicos se llevaron a cabo usando procedimientos operativos normalizados (SOP) 8. Después de exponer CCA izquierda, un monofilamento de silicio-cubierto se introdujo en el CCA distal, avanzado a través de la arteria carótida interna (ACI) en el círculo de Willis hasta que la arteria cerebral anterior (ACA) y de ese modo, el origen de la arteria cerebral media ( MCA) fue ocluida por un período de tiempo definido. En este estudio, seutilizado 45 min de MCAO, que por lo general resulta en una lesión isquémica en el territorio de la ACM que implica áreas del cerebro del cuerpo estriado y corticales. En nuestro estudio, analizamos el perfil temporal de los principios de IT utilizando BCCAO como estímulo PC. Nuestros datos indican que el tiempo de retardo óptimo entre BCCAO y MCAO para inducir temprana es de 30 min. En este video, vamos a dar una demostración de ambos procedimientos quirúrgicos, es decir BCCAO y MCAO.

<table><tbody><tr><td>Microscopio quirúrgico binocular</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000 C</td><td></td></tr><tr><td>Fuente de luz para microscopio</td><td>Zeiss</td><td>SteREO CL 1500 ECO</td><td></td></tr><tr><td>Almohadilla térmica con sonda rectal</td><td>FST</td><td>21061-10</td><td></td></tr><tr><td>Marco estereotáxico</td><td>David Kopf</td><td>Modelo 930</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras</td><td>FST</td><td>91460-11</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas Dumont n.º 5</td><td>FST</td><td>11251-10</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas Dumont n.º 7</td><td>FST</td><td>11271-30</td><td></td></tr><tr><td>Pinza microvascular</td><td>FST</td><td>00398-02</td><td></td></tr><tr><td>Aparato aplicador de pinzas</td><td>FST</td><td>00072-14</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de resorte</td><td>FST</td><td>15372-62</td><td></td></tr><tr><td>Portaagujas</td><td>FST</td><td>12010-14</td><td></td></tr><tr><td>Agujas</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td>BER 562-20</td><td></td></tr><tr><td>Sutura de seda 5-0</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura de seda 7-0</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura de seda 8-0</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bilateral común oclusión de la arteria carótida como un estímulo de preacondicionamiento adecuado para inducir la tolerancia isquémica precoz de isquemia cerebral focal

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

Hay evidencia acumulada, que el precondicionamiento isquémico - un reto isquémico no perjudicial para el cerebro - confiere una protección transitoria a una posterior lesión isquémica perjudicial. Hemos establecido oclusión de la arteria carótida común bilateral como un estímulo para inducir preacondicionamiento isquémico principios de la tolerancia a la isquemia cerebral focal transitoria en ratones C57BL6 / J. En este video, vamos a demostrar la metodología utilizada en este estudio.

Nuestro protocolo BCCAO resultó en reducciones CBF inmediatos y profundos (&gt; 90%) cuando ambos estaban ocluidos de CCA (Figura 1). Reapertura de la CCA de Led para completar la reperfusión como la supervisión de LDF (Figura 1). Después de PC, los animales no mostraron signos de discapacidad funcional. Por otra parte, no hubo mortalidad. La tinción de TUNEL realizó 72 h después de BCCAO en un grupo separado de animales no mostraron signos de muerte celular retardada en el cerebro desp...

Hay evidencia acumulada, que el precondicionamiento isquémico (PC) - un reto isquémico no perjudicial para el cerebro - confiere una protección transitoria a una posterior lesión isquémica perjudicial. Hemos establecido oclusión de la arteria carótida común bilateral (BCCAO) como un estímulo para inducir la tolerancia de preacondicionamiento isquémico temprano (IT) de la isquemia cerebral focal transitoria (inducida por la oclusión de la arteria cerebral media, OACM) en ratones C57BL6 / J.

Bilateral Común oclusión de la arteria carótida como un estímulo de preacondicionamiento adecuado para inducir la tolerancia isquémica precoz de isquemia cerebral focal

Existe evidencia acumulada de que el preacondicionamiento isquémico —un desafío isquémico no dañino para el cerebro— confiere una protección transitoria a un...

El objetivo general del siguiente experimento es demostrar que la oclusión bilateral de las arterias carótidas comunes induce un estado transitorio de tolerancia isquémica frente a la isquemia cerebral en una ventana temporal temprana. Esto se logra colocando una sonda de láser doppler de fibra óptica sobre la corteza para monitorear continuamente el flujo sanguíneo cerebral. Como segundo paso, se realiza la oclusión bilateral de las arterias carótidas comunes, lo que induce la tolerancia isquémica temprana.A continuación, se realiza la oclusión de la arteria cerebral media con el fin de inducir isquemia cerebral focal. Se obtienen resultados que muestran diferencias en el tamaño de las lesiones isquémicas entre animales preacondicionados y no preacondicionados, basados en mediciones histológicas del volumen de infarto. Los métodos descritos se utilizarán para responder a la pregunta de si la tolerancia isquémica, que es un estímulo establecido en la ventana temporal tardía, también puede inducir tolerancia isquémica en la ventana temporal temprana. Tras la inducción de la anestesia con un 2,5 % de ISO (fluorano), fije al animal en el marco estereotáxico y luego inserte una sonda rectal para monitorear su temperatura. Coloque al ratón sobre una almohadilla calefactora controlada por termostato para mantener una temperatura central constante de 37 ± 0,5 °C durante la cirugía.A continuación, limpie y desinfecte el sitio quirúrgico. Realice una incisión sagital en la línea media de aproximadamente un centímetro para exponer el cráneo parietal bajo el microscopio. Retire cuidadosamente el tejido conectivo con un par de pinzas.Luego, fije una sonda de fibra óptica directamente al cráneo, dos milímetros caudales y cinco milímetros laterales desde BRE MA, utilizando pegamento instantáneo. A continuación, gire el ratón para exponer el lado ventral del cuello. Después, conecte la sonda de fibra óptica al dispositivo de LDF mediante el adaptador de la sonda.El programa Peri soft se utiliza para registrar el valor de LDF. En este procedimiento, realice una incisión sagital media ventral de aproximadamente un centímetro. Separe las glándulas salivales derecha e izquierda entre sí.Disecar cuidadosamente los nervios vagos y las venas circundantes para exponer las arterias carótidas subyacentes. A continuación, hacer un lazo suelto de sutura de seda 5-0 alrededor de cada ACA. Después, insertar un pequeño tubo de silicona de dos milímetros de diámetro entre las ACAs y las suturas de seda en cada lado de la arteria carótida común.Este tubo se utiliza como una férula para las AAC con el fin de evitar dañar las paredes arteriales cuando se aprietan los puntos de sutura. Posteriormente, ocluya ambas AAC durante un minuto apretando los puntos de sutura de seda. Incluya únicamente el ratón con una reducción de la señal de LDF menor al 10 % de la señal basal en el estudio.Tras la reapertura de las AC, inicie un período de reperfusión de cinco minutos. Repita la secuencia de un minuto B-C-C-A-O y cinco minutos de reperfusión hasta un total de tres minutos de B-C-C-A-O. Mientras tanto, después de la última reperfusión, use suero fisiológico para mantener húmeda la herida del cuello, retire todos los tubos y suturas.Cierre la herida con sutura. Luego aplique la pomada de lidocaína en el sitio quirúrgico para lograr analgesia. Posteriormente, gire al ratón.Retire la sonda de fibra óptica unida al cráneo, sutúre la herida y aplique lidocaína. Después de eso, transfiera el ratón a una caja de recuperación precalentada. Devuélvalo a la jaula del animal después de que recupere completamente la conciencia bajo el microscopio.Realice una ligadura permanente alrededor de la AAC proximal con una sutura de seda 7-0 larga. Tire suavemente del hilo utilizando una pinza de mosquito. Luego, realice otra ligadura permanente alrededor de la arteria carótida externa.Tire del hilo hacia el lado derecho del animal. A continuación, retire el tejido conectivo que rodea la arteria carótida interna. Levante cuidadosa y suavemente el nervio hipogloso para obtener una buena visión general del trayecto distal de la ACI; doble la ACI izquierda hacia la izquierda, mientras que la arteria pterigopalatina sigue el trayecto de la ACI proximal hacia la derecha.A continuación, realice un lazo de sutura suelto alrededor de la AIC proximal con un hilo de seda 5-0. Utilizando un pequeño clamp microvascular, ocluya temporalmente la AIC distalmente al lazo de sutura suelto 5-0 para prevenir el sangrado retrógrado procedente de la AIC. A continuación, realice una pequeña incisión en la parte distal de la ACC justo antes de la bifurcación de la ACC utilizando tijeras microvasculares.Introduzca un monofilamento recubierto de silicona previamente seleccionado en la ACF a través de la pequeña incisión hasta que se detenga en la pinza microvascular. Luego, retire cuidadosamente la pinza microvascular de la AIC al mismo tiempo que avanza el monofilamento más profundamente en la AIC hasta que se detenga, tras haber avanzado casi completamente el monofilamento dentro de la AIC. Apriete el lazo suelto de sutura de cinco oh alrededor de la AIC proximal para mantener el filamento en su lugar y verifique si ha entrado en el vaso correcto.El primer signo que indica un procedimiento MCAO exitoso es el giro en sentido horario del animal y el encorvamiento del animal hacia un solo lado cuando se levanta por la cola; la gravedad del déficit funcional puede cuantificarse. Utilizando la puntuación de Peterson modificada para ratones en la reapertura, reanestesie al ratón y retire el monofilamento tras aflojar cuidadosamente la sutura de seda cinco-oh alrededor de la ICA proximal, luego vuelva a ajustar cuidadosamente la sutura cinco-oh para prevenir hemorragias. Esta figura muestra el curso de los valores medios de CVF medidos mediante LDF durante la reapertura B-C-C-A-O.Aquí se muestra el perfil temporal de los volúmenes de infarto en diferentes intervalos de tiempo de la oclusión de la arteria cerebral media (MCAO) tras la B-C-C-A-O. Hubo una reducción significativa de los volúmenes de infarto en comparación con el grupo control cuando la B-C-C-A-O se realizó 30 minutos antes de la MCAO. Además, los volúmenes de infarto se redujeron cuando la MCAO se realizó dos horas y 24 horas después de la B-C-C-A-O.Un retraso de 24 horas entre la B-C-C-A-O y la MCAO constituye la ventana temporal óptima para la tolerancia isquémica retardada. Por lo tanto, puede concluirse que la ventana temporal óptima para la tolerancia isquémica temprana mediante el uso de la B-C-C-A-O como estímulo de condicionamiento previo es de 30 minutos antes de la inducción de isquemia cerebral focal transitoria. En general, este método es adecuado para proporcionar datos confiables en el campo de la tolerancia isquémica.Al realizar este procedimiento, es importante utilizar monofilamentos con una longitud estandarizada del oído, o emplear filamentos disponibles comercialmente con un tamaño predeterminado.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este video muestra el procedimiento de realizar una oclusión permanente de la arteria cerebral media distal, o MCAO, con la arteria carótida común, o ligadura de CCA, en ratas envejecidas para modelar un accidente cerebrovascular isquémico. Esto bloquea el flujo sanguíneo al cerebro, lo que conduce a la muerte neuronal y genera un modelo para estudiar los mecanismos del accidente cerebrovascular y los posibles tratamientos.

Inducción de isquemia a través de la oclusión de la arteria carótida común y cerebral media en un modelo de rata

Fuente: Zheng, Y., et al. Modelos experimentales para estudiar la neuroprotección del postcondicionamiento ácido contra la isquemia cerebral. J. Vis. Exp. (2017)Este video demuestra la aplicación del postacondicionamiento ácido (APC) para evaluar sus efectos neuroprotectores contra la lesión isquémica en un modelo de ratón de oclusión de la arteria cerebral media (MCAO). Describe los pasos involucrados en la reperfusión en el modelo MCAO y la aplicación de APC durante la reperfusión para...

 Evaluación de los efectos neuroprotectores del postacondicionamiento ácido en un modelo de ratón de isquemia cerebral

Este protocolo describe el precondicionamiento hipóxico repetitivo, o exposiciones breves a la hipoxia sistémica que reducen los volúmenes de infarto y la interrupción de la barrera hematoencefálica después de una oclusión transitoria de la arteria cerebral media en ratones. También detalla la cuantificación dual del volumen del infarto y la alteración de la barrera hematoencefálica después de un accidente cerebrovascular para evaluar la eficacia de la protección neurovascular.

Cuantificación de Protección neurovascular Siguiendo repetitivo hipóxico Precondicionamiento y transitoria cerebral media oclusión de la arteria en ratones

Aquí se presenta un protocolo para producir una oclusión distal medio permanente de la arteria cerebral en ratas hembras de edad avanzada con la oclusión simultánea de las arterias carótidas para generar grandes infartos corticales y los déficits sostenidos. Mostramos la confirmación del tamaño de la lesión mediante resonancia magnética estructural a las 24 horas y 8 semanas después del accidente cerebrovascular.

Realización Permanente distal cerebral media carótida común con oclusión de la arteria en ratas de edad avanzada para el Estudio de la isquemia cortical con sostenida de la discapacidad

Obstrucción de filamento intraluminal de la arteria cerebral media es el modelo más frecuentemente utilizado en vivo del movimiento experimental en roedores. Una alternativa quirúrgica para permitir la reparación de la arteria carótida común se realiza aquí, lo que permite la reperfusión de la arteria carótida común y una reperfusión completa para el territorio de la arteria cerebral media.

Oclusión de la arteria Cerebral Media permitiendo la reperfusión mediante la reparación de la arteria carótida común en ratones

Un modelo murino de isquemia-reperfusión cerebral es establecido para investigar la patofisiología del accidente cerebrovascular. Distal, ligar la arteria cerebral media derecha y la arteria carótida común derecha y restablecer el flujo sanguíneo después de 10 o 40 min de isquemia.

Oclusión de los vasos dos ratón modelo de isquemia-reperfusión Cerebral

Este protocolo presenta una guía paso a paso para que los investigadores realicen el procedimiento de oclusión de la arteria cerebral media en ratones utilizando el método modificado de la arteria carótida externa de Longa. Las modificaciones presentadas en este artículo tienen como objetivo aumentar la precisión de la oclusión de la arteria cerebral media y asegurar una reperfusión completa.

Optimización del método de oclusión de la arteria cerebral media de Longa para la reperfusión completa

Este protocolo describe el proceso de preparación para la reperfusión de la oclusión de la arteria cerebral media a través de la arteria carótida común.

Un modelo modificado de preparación para la reperfusión de oclusión de la arteria cerebral media

Se propone el método de aguja para la estenosis bilateral asimétrica de la arteria carótida común para crear un modelo de ratón para el deterioro cognitivo vascular y la demencia. Da lugar a resultados a largo plazo en comparación con los modelos establecidos anteriormente y es compatible con la resonancia magnética en vivo. La representación visual que demuestra el procedimiento proporciona orientación para dominar la cirugía.

Un modelo murino para el deterioro cognitivo vascular y la demencia basado en la estenosis bilateral asimétrica de la arteria carótida común guiada por aguja

Este protocolo describe el proceso para inducir un modelo de coma isquémico cerebral utilizando un método de oclusión modificado de cuatro vasos.

Modelo de coma isquémico cerebral inducido por oclusión modificada de cuatro vasos

Aprende a inducir tolerancia isquémica temprana mediante oclusión bilateral de la arteria carótida común en ratones. Este método permite estudiar mecanismos de preacondicionamiento isquémico cerebral con aplicaciones terapéuticas potenciales para el tratamiento del ictus.

Bilateral Común oclusión de la arteria carótida como un estímulo de preacondicionamiento adecuado para inducir la tolerancia isquémica precoz de isquemia cerebral focal (Video) | JoVE Journal

Bilateral Común oclusión de la arteria carótida como un estímulo de preacondicionamiento adecuado para inducir la tolerancia isquémica precoz de isquemia cerebral focal

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