Name: Preparación e inactivación de patógenos de Double Dose productos plaquetarios capa leucocitaria usando el sistema sanguíneo INTERCEPT (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-07T11:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 40 s
Description: Aprende a preparar concentrados plaquetarios de doble dosis a partir de capa leucocitaria usando el sistema INTERCEPT para inactivación de patógenos. Evalúa la calidad in vitro durante siete días de almacenamiento.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

La financiación de la publicación es proporcionada por Cerus Corp, fabricante del sistema sanguíneo INTERCEPT.

<ol><li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+to+the+preparation%2C+use+and+quality+assurance+of+blood+components%22">Guide to the preparation, use and quality assurance of blood components</a>. , 16th, Council of Europe. (2010).</li>
<li>Van Rhenen, D. J., Vermeij, J., Mayaudon, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+characteristics+of+S-59+photochemically+treated+platelet+concentrates+derived+from+buffy+coats%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Functional characteristics of S-59 photochemically treated platelet concentrates derived from buffy coats.</a> Vox Sang. 79, 206-214 (2000).</li>
<li>Wollowitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+DNA+and+RNA+in+pathogens%3A+mode+of+action+of+amotosalen+HCl%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Med.+Rev%22%5BJournal%5D)">Targeting DNA and RNA in pathogens: mode of action of amotosalen HCl.</a> Transfus. Med. Rev. 31, 11-16 (2004).</li>
<li>Irsch, J., Lin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogen+Inactivation+of+Platelet+and+Plasma+Blood+Components+for+Transfusion+Using+the+INTERCEPT+Blood+SystemTM%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Med.+Hemother%22%5BJournal%5D)">Pathogen Inactivation of Platelet and Plasma Blood Components for Transfusion Using the INTERCEPT Blood SystemTM.</a> Transfus. Med. Hemother. 38, (2011).</li>
<li>Lin, L., Dikeman, R., Molini, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemical+treatment+of+platelet+concentrates+with+amotosalen+and+long-wavelength+ultraviolet+light+inactivates+a+broad+spectrum+of+pathogenic+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Photochemical treatment of platelet concentrates with amotosalen and long-wavelength ultraviolet light inactivates a broad spectrum of pathogenic bacteria.</a> Transfusion. 44, 1496-1504 (2004).</li>
<li>Lin, L., Hanson, C., Alter, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+viruses+in+platelet+concentrates+by+photochemical+treatment+with+amotosalen+and+long-wavelength+ultraviolet+light%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Inactivation of viruses in platelet concentrates by photochemical treatment with amotosalen and long-wavelength ultraviolet light.</a> Transfusion. 45, 580-590 (2005).</li>
<li>Allain, J. P., Cianco, C., Blajchman, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protecting+the+blood+supply+from+emerging+pathogens%3A+the+role+of+pathogen+inactivation%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Med.+Rev%22%5BJournal%5D)">Protecting the blood supply from emerging pathogens: the role of pathogen inactivation.</a> Transfus. Med. Rev. 19, 110-126 (2005).</li>
<li>Stramer, S., Hollinger, F., Katz, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+infectious+disease+agents+and+their+potential+threat+to+transfusion+safety%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Emerging infectious disease agents and their potential threat to transfusion safety.</a> Transfusion. 49, 1S-29S (2009).</li>
<li>Nussbaumer, W., Allesdorfer, D., Grabmer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+transfusion+of+platelet+components+contaminated+with+low+levels+of+bacteria%3A+a+comparison+of+bacteria+culture+and+pathogen+inactivation+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Prevention of transfusion of platelet components contaminated with low levels of bacteria: a comparison of bacteria culture and pathogen inactivation methods.</a> Transfusion. 47, 1125-1133 (2007).</li>
<li>Schlenke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+against+Transfusion-Associated+Graft-versus-Host+Disease+in+Blood+transfusion%3A+Is+Gamma-Irradiation+the+Only+Answer%3F+Transfus%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Hemother%22%5BJournal%5D)">Protection against Transfusion-Associated Graft-versus-Host Disease in Blood transfusion: Is Gamma-Irradiation the Only Answer? Transfus.</a> Med. Hemother. 31, 24-31 (2004).</li>
<li>Lin, L., Corash, L., Osselear, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+Against+TA-GVHD+Due+to+Platelet+Transfusion+By+Using+Pathogen+Inactivation+with+the+INTERCEPT+Blood+SystemTM+-+Gamma+Irradiation+is+Not+the+Only+Answer%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Protection Against TA-GVHD Due to Platelet Transfusion By Using Pathogen Inactivation with the INTERCEPT Blood SystemTM - Gamma Irradiation is Not the Only Answer.</a> Haematologica. 95 (Extra 1), 230-237 (2010).</li>
<li>Corash, L., Lin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+processes+for+inactivation+of+leukocytes+to+prevent+transfusion-associated+graft-verus-host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Marrow+Transplant%22%5BJournal%5D)">Novel processes for inactivation of leukocytes to prevent transfusion-associated graft-verus-host disease.</a> Bone Marrow Transplant. 33, 1-7 (2004).</li>
</ol>

La producción y el libre acceso a este artículo es patrocinado por Cerus.

Plaquetas de capa leucocitaria requerir varios pasos de procesamiento que dan como resultado costes posteriores a la recolección, incluyendo el tiempo del personal, consumibles, equipo, y de los residuos, que debe tenerse en cuenta en el costo total de producción de las unidades de plaquetas. Mejora de la producción de plaquetas de cada capa leucocitaria (a través de la optimización del volumen de la capa leucocitaria y hematocrito) permite la producción de una unidad de capa leucocitaria dosis doble de plaquetas de un grupo de siete capas leucocitarias. Cuando esta optimización se lleva a cabo, el número de capas leucocitarias requerida para producir un número fijo de dosis de plaquetas se puede reducir, mejorando así la utilización general de capas leucocitarias y permitiendo la producción de plaquetas adicional concentrados (PCs). Tiempo de personal, así como los costes de consumibles y equipos tales como juegos de puesta en común, solución aditiva de plaquetas, obleas estériles de conexión, equipos de filtrado y procedimientos de centrifugación se reducen hasta en un 50%. Además de optimizar la producción de plaquetas y reducir los costos asociados, this método de mezcla puede generar un concentrado de plaquetas (PC) que cumpla con el requisito de entrada para uso con el sistema de procesamiento INTERCEPT dual de almacenamiento de contenedores, lo que nos permite proporcionar una mayor protección a los receptores de transfusiones nuestros también. El sistema sanguíneo INTERCEPT para la inactivación de patógenos utiliza amotosaleno y luz ultravioleta A (UVA) para la reticulación covalente de ADN y ARN, evitando la replicación del ácido nucleico y patógenos de renderizado que no pueden causar la enfermedad. 3 Se inactiva eficazmente un amplio espectro de patógenos, incluyendo virus, bacterias , parásitos y contaminantes células blancas de la sangre de los donantes. 4-6 INTERCEPT proporciona una alternativa al paradigma actual de pruebas para patógenos emergentes, que históricamente implica un retraso sustancial, mientras que una nueva prueba se desarrolla y, finalmente, requiere una inversión financiera significativa para poner en práctica cuando una prueba esté disponible. 7,8 También puede proporcionar una alternativa a la seguridad redundante medires tales como la detección de bacterias y 9 irradiación gamma. 10-12 Además, INTERCEPT nos permite tratar a unidades de doble dosis de plaquetas que beneficia a nuestra eficiencia de producción y nos ayuda a cumplir nuestros presupuestos. INTERCEPT y la dosis doble capa leucocitaria método se puede adaptar a una variedad de flujos de trabajo del centro de la sangre. Como ejemplos, las colecciones de sangre entera puede ser aumentado a 500 ml; colecciones también pueden ser almacenados durante una noche a 22 ° C antes de la separación. Además, a un sustituto de capa leucocitaria método de mezcla es posible (por ejemplo, un método de pulpo en lugar de un método de tren) y / o un dispositivo automatizado (por ejemplo Tacsi) puede ser utilizado para la segunda centrifugación y separación de la suspensión de plaquetas de los glóbulos rojos restantes . Si el contenido de plaquetas se necesita mayor, se dispone de varias técnicas incluyendo la pre-selección de los donantes según el recuento de plaquetas, la incubación durante la noche de la sangre entera, adjustamento de ajustes de centrifugación, o la utilización de una piscina de 8 buffy abrigos en lugar de 7. Debido a la limitación de la agrupación establece actualmente disponible y la capacidad de los cubos de centrífuga, el volumen total de la capa leucocitaria de la piscina debe ser de aproximadamente 600 ml. El proceso de centrifugación y ajustes descritos en este protocolo ha sido optimizado para obtener un producto que cumpla con los parámetros de intercepción para un grupo de 7 buffy abrigos. Los ajustes de centrifugación debe ser modificado si el número de capas leucocitarias en la piscina se modifica. En algunos países, la dosis de plaquetas mínimo es más alto y los requisitos de control de calidad son más estrictos que en Suecia. Por lo tanto, nuestros resultados pueden no ser de aplicación universal. En estos países, el PC doble dosis antes del tratamiento INTERCEPT deberá contener un mayor número de plaquetas con el fin de satisfacer las necesidades locales después del tratamiento INTERCEPT y división. Debido a que el contenido máximo de plaquetas y el tratamiento volumen for INTERCEPT son 7x10 11 plaquetas y 420 ml, respectivamente, el porcentaje de unidades que excedan de los requisitos de procesamiento de interceptar o tener un contenido insuficiente de plaquetas a ser dividido en dos dosis terapéuticas, variará dependiendo de factores tales como los requisitos locales para la dosis de plaquetas, los criterios de control de calidad, buffy resultados capa de optimización, y la estabilidad de producción. Si un PC dosis doble supera los requisitos de procesamiento de interceptar, se puede ajustar manualmente para cumplir con los requisitos y tratado posteriormente. En las pocas ocasiones en que la piscina capa 7-buffy rendimientos suficientes plaquetas de un producto de doble dosis después de intercepción, se opta por no realizar el tratamiento INTERCEPT. Alternativamente, otros centros de sangre puede decidir tratar el PC con un sistema de procesamiento INTERCEPT dosis única (es decir, el conjunto de gran volumen) y almacenar el PC como una sola dosis grande terapéutica, realizando de esta manera la inactivación de patógenos en todas las unidades. Con el fin de garantizar la satisfacción de nuestrosRequisitos de control de calidad y para inactivar patógenos como muchas de nuestras unidades de plaquetas como sea posible, seleccionamos buffy abrigos basadas en los recuentos de plaquetas de donantes, los cuales, cuando se agruparon, se traducirá en un contenido mínimo de plaquetas de 5.6x10 11 plaquetas en la piscina. Esto asegura que el contenido de plaquetas suficientes para producir dos dosis terapéuticas después del tratamiento INTERCEPT. Nuestro validación demuestra que 7 unidades derivadas de sangre entera capa leucocitaria puede ser exitosamente agruparon y se trató con el proceso INTERCEPT para plaquetas, resultando en 2 productos plaquetarios patógenos inactivados que cumplen con los criterios de aceptación para la fabricación (requisitos suecas y las directrices europeas) y para el apoyo de los pacientes que requiere transfusiones de plaquetas de acuerdo con las guías de práctica clínica y los métodos estándar de infusión de plaquetas en Suecia.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Donación de sangre total, separación primaria y producción de plaquetas</td></tr><tr><td>Paquete para la recolección de sangre</td><td>Fenwal</td><td>R6485</td><td>Conjunto superior/inferior</td></tr><tr><td>Extractor automático de componentes</td><td>Fenwal</td><td>Optipress-II</td><td></td></tr><tr><td>Sistema mezclador de sangre y balanza</td><td>Baxter</td><td>Easymix V3</td><td></td></tr><tr><td>Juego de filtración de plaquetas y leucocitos</td><td>Fenwal</td><td>K4R7042</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugar</td><td>Hettich</td><td>Roto Silenta 63 RS</td><td>Versión 5.5</td></tr><tr><td>Solución aditiva para plaquetas - SSP+</td><td>MacoPharma</td><td>SSP2030U</td><td>300 ml</td></tr><tr><td>Soldador estéril de tubos</td><td>Terumo</td><td>T-SCD</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Tratamiento INTERCEPT &amp;amp; almacenamiento</td></tr><tr><td>conjunto de procesamiento INTERCEPT</td><td><a href="http://www.interceptbloodsystem.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Cerus</a></td><td>INT2503</td><td>Conjunto de almacenamiento dual (DS)</td></tr><tr><td>INTERCEPT Illuminator</td><td><a href="http://www.interceptbloodsystem.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Cerus</a></td><td>INT100</td><td></td></tr><tr><td>Paquete de muestra de PC</td><td>Fenwal</td><td>FTX 1122</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora</td><td>Helmer</td><td>PC2200/PC3200</td><td></td></tr><tr><td>Agitador</td><td>Helmer</td><td>PF48H/PF96H</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Evaluación de &lt;em&gt;in vitro&lt;/em&gt; Función plaquetaria</td></tr><tr><td>Analizador de gases sanguíneos</td><td>Radiómetro</td><td>ABL 735</td><td>Utilizado para la medición de pH, gases sanguíneos y lactato</td></tr><tr><td>Sistema de química</td><td>Ortho Clinical Diagnostics</td><td>Vitros 5.1</td><td>Utilizado para la medición de glucosa</td></tr><tr><td>Analizador hematológico</td><td>Boule Medical AB</td><td>Medonic CA620-Cellguard</td><td>Utilizado para la medición del recuento de plaquetas</td></tr><tr><td>Citómetro de flujo</td><td>BD</td><td>FACSCanto</td><td>Utilizado para la medición de glóbulos blancos</td></tr></tbody></table>

preparación e inactivación de patógenos de double dose productos plaquetarios capa leucocitaria usando el sistema sanguíneo intercept

Preparation and Pathogen Inactivation of Double Dose Buffy Coat Platelet Products using the INTERCEPT Blood System

Los centros de sangre se enfrentan a muchos desafíos, incluyendo el rendimiento al máximo la producción de las donaciones de sangre de productos que reciben, así como garantizar el mayor nivel posible de seguridad para los pacientes de transfusión, incluyendo protección contra las enfermedades de transmisión transfusión. Esto debe llevarse a cabo de una manera fiscalmente responsable que reduce al mínimo los gastos de funcionamiento, incluidos los consumibles, equipos, residuos y costes de personal, entre otros. Varios métodos están disponibles para producir concentrados de plaquetas para transfusión. Uno de los más comunes es el método de capa leucocitaria en el que se prepara una única unidad terapéutica de plaquetas (≥ 2,0 x10 11 plaquetas por unidad o por las normas locales) mediante la agrupación de la capa de leucocitos de hasta seis donaciones de sangre completa. Un procedimiento para la producción de &quot;doble dosis&quot; plaquetas de sangre entera derivados sólo recientemente ha sido desarrollado. Se presenta aquí un nuevo método para preparardoble dosis de plaquetas en sangre total concentrados derivados de las piscinas de 7 buffy abrigos y posteriormente tratar las unidades de dosis dobles con el sistema sanguíneo INTERCEPT para la inactivación de patógenos. INTERCEPT fue desarrollado para inactivar virus, bacterias, parásitos y contaminación de las células donantes blancos que pueden estar presentes en la sangre donada. Vinculación intersección con el método de capa doble dosis buffy utilizando el procesamiento INTERCEPT Set con contenedores de almacenamiento dual (el &quot;set DS&quot;), permite a los bancos de sangre para el tratamiento de cada una de sus unidades de dosis dobles en un solo conjunto de procesamiento de inactivación de patógenos, lo que maximiza la seguridad del paciente minimizando los costos. La dosis doble capa leucocitaria método requiere menos capas leucocitarias y reduce el uso de consumibles hasta en un 50% (por ejemplo, conjuntos de puesta en común, sistema de filtros de solución aditiva de plaquetas, y obleas estériles de conexión) en comparación con la preparación y el tratamiento de unidades de dosis única capa leucocitaria de plaquetas . Otros ahorros de costos incluyen menos residuos, menos equipo mantenice, menores requisitos de energía, la reducción de tiempo de personal y un menor costo de recaudación en comparación con la técnica de aféresis.

En este artículo se describe el proceso utilizado por el Hospital Universitario de Örebro para producir dosis doble capa leucocitaria concentrados de plaquetas preparado a partir de donaciones de sangre entera y tratados con el sistema sanguíneo INTERCEPT para la inactivación de patógenos. La<em&gt; In vitro</emCalidad&gt; de las unidades de plaquetas finales se evaluó a lo largo de 7 días de almacenamiento.

Preparación e inactivación de patógenos de Double Dose productos plaquetarios capa leucocitaria usando el sistema sanguíneo INTERCEPT

Los centros de transfusión sanguínea se enfrentan a numerosos retos, entre los que se incluyen la maximización del rendimiento de la producción a partir de las donaciones de productos sanguíneos que reciben, así como la garantía de la...

En este video, se preparará un concentrado de plaquetas de doble dosis a partir de un grupo de siete capas leucocitarias y posteriormente se tratará con Intercept. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo producir un concentrado de plaquetas de doble dosis inactivado para patógenos. Primero, presentamos una visión general esquemática seguida de una demostración.Las primeras siete unidades de sangre entera donada se centrifugan y separan para obtener siete unidades de capa leucocitaria que cumplan con los volúmenes y valores de hematocrito deseados. Las capas leucocitarias se conectan, se agrupan y se centrifugan. Luego, la suspensión de plaquetas se separa de los glóbulos rojos residuales para producir un concentrado de plaquetas de dosis doble destinado a la inactivación de patógenos y leucocitos.El concentrado de plaquetas de doble dosis se trata mediante el sistema de intercepción, que crea enlaces cruzados en los ácidos nucleicos. En última instancia, este procedimiento produce dos dosis terapéuticas de plaquetas con una calidad aceptable in vitro durante siete días de almacenamiento, según lo determinado por la evaluación de pH, glucosa, lactato, PO₂ y PCO₂, y shallot doru. Un técnico de mi centro de sangre demostrará el procedimiento, así como los requisitos de procesamiento que describiremos.Primero, asegúrese de que el concentrado de plaquetas de doble dosis cumpla con las especificaciones de procesamiento de intercepción de 300 a 420 mililitros. Volumen de 2,5 a siete veces 10 a la 11 la dosis de plaquetas, y menos de cuatro veces 10 a la 6 por mililitro. Células rojas Comience este procedimiento con siete unidades de sangre total recolectadas en juegos de recolección superior-inferior de 450 mililitros.Coloque las unidades de sangre en los recipientes del centrífugo y realice una centrifugación fuerte a 4.880 RCF durante 11 minutos a temperatura ambiente con el ajuste de frenado B cinco, según las instrucciones del fabricante. Tras la centrifugación, la sangre se separará en tres capas: glóbulos rojos, capa leucocitaria (buffy coat) y plasma. Exprese el plasma hacia la bolsa satélite superior y los glóbulos rojos hacia la bolsa satélite inferior, dejando la capa leucocitaria de aproximadamente 48 mililitros y un hematocrito del 37 % en el recipiente de recolección.Coloque los buffy coats sobre un agitador de plaquetas a temperatura ambiente durante la noche. Conecte de forma estéril siete buffy coats y 300 mililitros de solución aditiva para plaquetas SSP Plus. Disponga el montaje en configuración de tren, con la solución aditiva en la parte superior. Abra las soldaduras entre las unidades de buffy coat y permita que se drenen en el recipiente del último buffy coat. Sujete la línea entre la solución aditiva y el primer buffy coat, como se muestra aquí.A continuación, abra la pinza y la soldadura entre la solución aditiva y el primer hematocrito leucocitario, y permita que aproximadamente un tercio de la solución aditiva, unos 100 mililitros, pase para enjuagar cada uno de los recipientes de hematocrito leucocitario de forma secuencial antes de cerrar la pinza. Repita el lavado otras dos veces, utilizando cada vez aproximadamente 100 mililitros de la solución aditiva. Desconecte el recipiente del hematocrito leucocitario agrupado de los recipientes vacíos. El volumen total del hematocrito leucocitario agrupado, incluida la solución aditiva, debe ser de aproximadamente 600 mililitros.Coloque los capuchones de Buffy mezclados en un agitador durante una hora a temperatura ambiente. Luego, conecte un recipiente de almacenamiento de plaquetas con un filtro integrado de reducción de leucocitos a la bolsa que contiene la mezcla de capuchones de Buffy. Coloque los capuchones de Buffy mezclados y el recipiente de almacenamiento de plaquetas en una centrífuga y centrifugue a 462 RCF durante nueve minutos y 20 segundos.Tras la centrifugación, pase la suspensión de plaquetas a través del filtro reductor Luca hacia el recipiente de almacenamiento de plaquetas. El resultado es un concentrado de plaquetas de dosis doble que contiene aproximadamente siete veces 10 a la 11 plaquetas en 420 mililitros, el cual puede someterse a inactivación de patógenos con Intercept. El concentrado de plaquetas de dosis doble se trata utilizando un conjunto de procesamiento Intercept, que consta de un recipiente de antoína, un recipiente de iluminación y dos recipientes de almacenamiento.Conecte el recipiente de suspensión de plaquetas al recipiente Amin en el conjunto de procesamiento Intercept. Luego, cuelgue las plaquetas. Rompa la cánula inferior del recipiente Amin para permitir que la solución fluya hacia el recipiente de iluminación.Luego rompa la cánula superior del recipiente de Amin para permitir que las plaquetas fluyan a través del recipiente de Amin hacia el recipiente de iluminación. Mezcle suavemente la mezcla de plaquetas y amotosina. Presione ligeramente el recipiente de iluminación para expulsar el aire del mismo.Cierre el tubo entre la iluminación y el amato y el recipiente de modo que no más de cuatro centímetros de tubo sobresalgan del recipiente de iluminación. Retire y deseche los recipientes vacíos. Coloque el conjunto de procesamiento en el iluminador con el recipiente de iluminación en el compartimento grande de la izquierda y el organizador en el compartimento más pequeño del lado derecho.Escanee el id de donación. Código del producto y procesamiento. Establezca el número de lote en el iluminador.Cierre la tapa metálica y el cajón. Presione inicio para comenzar la iluminación. El iluminador proporciona una dosis controlada de luz UVA a la mezcla de aminas plaquetarias en el recipiente de iluminación.La amina se une entre los pares de bases del ácido nucleico de los patógenos, que podrían estar presentes en la unidad de plaquetas. Tras la iluminación, se forman enlaces cruzados permanentes que bloquean el ADN o ARN, impidiendo que los patógenos se repliquen y causen enfermedad en el receptor del producto sanguíneo. Después de la iluminación, retire el conjunto de procesamiento.A continuación, retire los contenedores del organizador, cuelgue las plaquetas y el conjunto de procesamiento. Rompa la cánula en la salida del contenedor de iluminación y permita que las plaquetas fluyan hacia el contenedor CAD. Dentro del contenedor CAD hay una oblea con perlas macroporosas de poliestireno inmovilizadas que reducen los niveles de amin residual en el producto sanguíneo.Teniendo cuidado de no doblar la oblea de CAD. Exprese el aire del recipiente de CAD al recipiente de iluminación. Selle el tubo cerca del puerto de entrada del recipiente de CAD.Retire y deseche el contenedor de iluminación vacío. Coloque el contenedor CAD con los contenedores de almacenamiento adjuntos sobre un agitador de plaquetas durante seis a 16 horas. Esto provocará una reducción de la amilina residual a una concentración menor o igual a dos micromoles.Tras el tratamiento con CAD, retire las unidades de plaquetas del agitador, cuelgue las plaquetas, rompa la cánula en la salida del recipiente de CAD y permita que las plaquetas fluyan hacia los dos recipientes de almacenamiento. A continuación, expulse el aire de los recipientes de almacenamiento. Selle el tubo por encima de la conexión en Y y retire el recipiente de CAD.El resultado son dos concentrados de plaquetas inactivados para patógenos para evaluar la función plaquetaria in vitro. La dosis de plaquetas, pH, PO₂, producción de lactato y consumo de glucosa del intercepto se determinaron. Los concentrados de plaquetas se evaluaron hasta el día siete de almacenamiento.Esta figura muestra la dosis media inicial de plaquetas del concentrado de plaquetas de doble dosis antes del tratamiento con el sistema de interceptación, y la dosis media de plaquetas en cada uno de los productos fraccionados tratados durante los siete días de almacenamiento. Como se puede observar aquí, la pérdida de plaquetas durante el almacenamiento fue aproximadamente del 9 %. Esta reducción no difiere de la pérdida esperada de plaquetas durante el almacenamiento de plaquetas convencionales. Según los requisitos europeos, el pH de las plaquetas debe mantenerse por encima de 6,4 hasta el final de su vida útil.Durante el procesamiento, el pH de los concentrados de plaquetas disminuye ligeramente según el volumen de concentración de plaquetas y la permeabilidad al gas del recipiente de almacenamiento de plaquetas. Esta figura muestra el pH de los productos plaquetarios fraccionados durante siete días de almacenamiento; el pH se mantiene estable y adecuadamente dentro de los requisitos de procesamiento. El metabolismo aeróbico debe continuar ocurriendo en las plaquetas almacenadas y es un indicador de la capacidad de las plaquetas para funcionar in vivo tras la transfusión a un paciente.El consumo de O₂ plaquetario y la producción de CO₂ indican la respiración continua de las plaquetas en el recipiente PL 24 10 durante siete días de almacenamiento. Asimismo, el metabolismo anaeróbico debería continuar en las plaquetas almacenadas. Por lo tanto, el consumo de glucosa y la producción de lactato también son indicadores de la capacidad de las plaquetas para funcionar tras la transfusión.Estas dos figuras muestran los niveles de lactato y glucosa durante siete días de almacenamiento. El consumo de glucosa por los plaquetas y la producción de lactato son consistentes entre sí. Durante los siete días de almacenamiento, cinco unidades tuvieron niveles de glucosa inferiores a 1,11 milimoles por litro, que es el límite inferior para el ensayo de glucosa.La preparación del código Buffy y la validación del agrupamiento produjeron concentrados de plaquetas que cumplen con los criterios de entrada para el tratamiento con intercept, específicamente volumen, recuento de plaquetas, proporción de plasma y contaminación por glóbulos rojos. Las unidades finales cumplen con los criterios de validación durante siete días de almacenamiento, incluyendo la dosis de plaquetas y el pH. La principal ventaja de esta técnica frente al método convencional de preparación del código Buffy, que produce un concentrado de plaquetas de dosis única, es que maximiza el rendimiento de componentes a partir de las recolecciones de sangre, reduce los gastos operativos mediante el uso de una técnica de dosis doble y mejora la seguridad del paciente al inactivar patógenos transmitidos por transfusión.

preparation-pathogen-inactivation-double-dose-buffy-coat-platelet

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

En este video, demostramos el aislamiento de células mononucleares de sangre periférica, PBMCs, que contienen monocitos y linfocitos de una capa de leucocitología humana mediante centrifugación en gradiente de densidad. Los PBMC aislados se pueden utilizar para un análisis posterior.

Aislamiento de células mononucleares de sangre periférica de pelajes leucocitarios humanos

En este vídeo, describimos un protocolo para purificar plaquetas de sangre total murina y su posterior activación con el agonista plaquetario trombina. Cuando se analizan con citometría de flujo, las plaquetas en reposo purificadas se caracterizan en función de la expresión de su marcador de superficie celular CD41, mientras que las plaquetas activadas purificadas coexpresan los marcadores de superficie CD41 y CD62P.

Purificación y Activación de Plaquetas a partir de Sangre Entera Murina

Este video muestra el proceso de reducción de patógenos basado en riboflavina y luz ultravioleta contra la contaminación bacteriana de alto título en productos de plaquetas humanas. Este proceso podría ayudar a reducir el riesgo de eventos adversos graves de transfusión asociados con la contaminación bacteriana.

Un tratamiento de riboflavina y luz ultravioleta de productos plaquetarios para eliminar bacterias

Las condiciones de almacenamiento de los productos de plaquetas crean un entorno ideal para que los contaminantes bacterianos se multipliquen a niveles peligrosos.  El objetivo de este estudio fue utilizar un ensayo formador de colonias para evaluar un proceso de reducción de patógenos basado en riboflavina contra la contaminación bacteriana de alto título en productos plaquetarios humanos.

El tratamiento de los productos de plaquetas con riboflavina y luz UV: Eficacia contra el alto título contaminación bacteriana

La transfusión y hemostasia de plaquetas se modeló utilizando cámaras de reconstitución de sangre y flujo microfluídico para investigar la función de las plaquetas de los bancos de sangre. Los datos demuestran las consecuencias de la lesión por almacenamiento de plaquetas sobre la hemostasia, in vitro.

Flujo de microfluidos Cámaras utilizando sangre reconstituida a Modelo Hemostasia y Transfusión de Plaquetas<em&gt; In Vitro</em

En este artículo se describe un método para evaluar endotelial von Willebrand factor liberación y la plaqueta posterior capturan bajo tensión de esquileo líquido en respuesta a estímulos inflamatorios mediante un sistema de cámara en vitro flujo.

Investigación de von Willebrand Factor Fisiopatología utilizando un modelo de cámara de flujo de von Willebrand de la plaqueta Factor cadena de formación

Gestión de inventario de plaquetas basado en evaluación el contenido de micropartículas en concentrados de plaquetas es una nueva iniciativa de mejora de calidad en bancos de sangre del hospital. El objetivo es distinguir activados de plaquetas no activadas para optimizar el uso de plaquetas. Proporcionando las plaquetas no activadas a pacientes hemato-oncología podría reducir su alto riesgo a ser refractarios.

Rutina de detección del método de micropartículas en las transfusiones de plaquetas

Este protocolo presenta una guía accesible para recolectar, almacenar y descongelar células mononucleares de sangre periférica adecuada para análisis posteriores y flujos de trabajo como la citometría de flujo y la secuenciación de ARN. También se muestran las colecciones de pelajes de plasma y buffy.

Aislamiento y criopreservación de células mononucleares de sangre periférica humana altamente viables a partir de sangre total: una guía para principiantes

Este protocolo detalla un método compatible con la automatización de alto rendimiento para aislar células mononucleares de sangre periférica humana para biobancos y otros fines.

Aislamiento de células mononucleares de sangre periférica humana de Buffy Coats a través de la separación inmunomagnética de perlas de alto rendimiento

Se puede evaluar la función plaquetaria bajo flujo y se puede modelar la reanimación hemostática simulada utilizando un dispositivo microfluídico, que tiene aplicaciones en medicina traumatológica y transfusional.

Microfluídica en la evaluación de la función plaquetaria

El metabolismo de las plaquetas es de interés, particularmente en lo que se refiere al papel de la hiperactividad e hipoactividad plaquetaria en el sangrado y los trastornos trombóticos. El aislamiento de las plaquetas del plasma es necesario para algunos ensayos metabólicos; Aquí se presenta un método para aislar metabolitos intracelulares de plaquetas lavadas.

Preparación de plaquetas humanas lavadas para estudios cuantitativos de flujo metabólico

Aprende a preparar concentrados plaquetarios de doble dosis a partir de capa leucocitaria usando el sistema INTERCEPT para inactivación de patógenos. Evalúa la calidad in vitro durante siete días de almacenamiento.

Preparación e inactivación de patógenos de Double Dose productos plaquetarios capa leucocitaria usando el sistema sanguíneo INTERCEPT (Video) | JoVE Journal

Preparación e inactivación de patógenos de Double Dose productos plaquetarios capa leucocitaria usando el sistema sanguíneo INTERCEPT

Explorar más videos