Preparación e inactivación de patógenos de Double Dose productos plaquetarios capa leucocitaria usando el sistema sanguíneo INTERCEPT

En este video, se preparará un concentrado de plaquetas de doble dosis a partir de un grupo de siete capas leucocitarias y posteriormente se tratará con Intercept. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo producir un concentrado de plaquetas de doble dosis inactivado para patógenos. Primero, presentamos una descripción general esquemática seguida de una demostración.

Las primeras siete unidades de sangre entera donada se centrifugan y separan para obtener siete unidades de capa leucocitaria que cumplan con los volúmenes y hematocritos deseados. Las capas leucocitarias se conectan, se agrupan y se centrifugan. Luego, la suspensión de plaquetas se separa de los glóbulos rojos residuales para producir un concentrado de plaquetas de dosis doble destinado a la inactivación de patógenos y leucocitos.

El concentrado de plaquetas de doble dosis se trata mediante el sistema de intercepción, que crea enlaces cruzados en los ácidos nucleicos. En última instancia, este procedimiento produce dos dosis terapéuticas de plaquetas con una calidad aceptable in vitro durante siete días de almacenamiento, según la evaluación de pH, glucosa, lactato, PO₂ y PCO₂, y shallot doru. Un técnico de mi centro de sangre demostrará el procedimiento, así como los requisitos de procesamiento que describiremos.

Primero, asegúrese de que el concentrado de plaquetas de doble dosis cumpla con las especificaciones de procesamiento de intercepción de 300 a 420 mililitros. Volumen de 2,5 a siete veces 10 a la 11 la dosis de plaquetas, y menos de cuatro veces 10 a la 6 por mililitro. Células rojas Inicie este procedimiento con siete unidades de sangre total recolectadas en juegos de recolección superior-inferior de 450 mililitros.

Coloque las unidades de sangre en los vasos del centrífugo y realice una centrifugación rápida a 4.880 RCF durante 11 minutos a temperatura ambiente con el ajuste de frenado B cinco, según las instrucciones del fabricante. Tras la centrifugación, la sangre se separará en tres capas: glóbulos rojos, capa leucocitaria (buffy coat) y plasma. Exprese el plasma hacia la bolsa satélite superior y los glóbulos rojos hacia la bolsa satélite inferior, dejando la capa leucocitaria de aproximadamente 48 mililitros y un hematocrito del 37 % en el recipiente de recolección.

Coloque los capos de Buffy en un agitador de plaquetas a temperatura ambiente durante la noche. Conecte en condiciones estériles siete capos de Buffy y 300 mililitros de solución aditiva para plaquetas SSP más, en una configuración en serie con la solución aditiva en la parte superior. Sujete la línea entre la solución aditiva y el primer capo de Buffy como se muestra aquí. Abra las soldaduras entre las unidades de capo de Buffy y permita que se drenen en el recipiente del último capo de Buffy.

A continuación, abra la pinza y la soldadura entre la solución aditiva y el primer hematocrito leucocitario, y permita que aproximadamente un tercio de la solución aditiva, unos 100 mililitros, pase para enjuagar cada uno de los recipientes de hematocrito leucocitario de forma secuencial antes de cerrar la pinza. Repita el lavado otras dos veces, utilizando cada vez aproximadamente 100 mililitros de la solución aditiva. Desconecte el recipiente del hematocrito leucocitario agrupado de los recipientes vacíos. El volumen total del hematocrito leucocitario agrupado, incluida la solución aditiva, debe ser de aproximadamente 600 mililitros.

Coloque los concentrados de capa leucocitaria mezclados en un agitador durante una hora a temperatura ambiente. A continuación, conecte un recipiente de almacenamiento de plaquetas con un filtro integrado de reducción de leucocitos a la bolsa que contiene la mezcla de capas leucocitarias. Coloque los concentrados de capa leucocitaria mezclados y el recipiente de almacenamiento de plaquetas en una centrífuga y centrifugue a 462 RCF durante nueve minutos y 20 segundos.

Tras la centrifugación, pase la suspensión de plaquetas a través del filtro reductor Luca hacia el recipiente de almacenamiento de plaquetas. El resultado es un concentrado de plaquetas de dosis doble que contiene aproximadamente siete veces 10 a la 11ª plaquetas en 420 mililitros, el cual puede someterse a inactivación de patógenos con el sistema Intercept. El concentrado de plaquetas de dosis doble se trata utilizando un conjunto de procesamiento Intercept, que consta de un recipiente para antoína, un recipiente para iluminación y dos recipientes de almacenamiento.

Conecte el recipiente de suspensión de plaquetas al recipiente Amin del conjunto de procesamiento Intercept. Luego, cuelgue las plaquetas. Rompa la cánula inferior del recipiente Amin para permitir que la solución fluya hacia el recipiente de iluminación.

Luego rompa la cánula superior del recipiente de Amin para permitir que las plaquetas fluyan a través del recipiente de Amin hacia el recipiente de iluminación. Mezcle suavemente la mezcla de plaquetas y amotosina. Presione ligeramente el recipiente de iluminación para expulsar el aire del mismo.

Selle el tubo entre la iluminación y el amato y el recipiente de modo que no más de cuatro centímetros de tubo sobresalgan del recipiente de iluminación. Retire y deseche los recipientes vacíos. Coloque el conjunto de procesamiento en el iluminador con el recipiente de iluminación en el compartimento grande de la izquierda y el organizador en el compartimento más pequeño del lado derecho.

Escanee el identificador de donación. Código del producto y procesamiento. Establezca el número de lote en el iluminador.

Cierre la tapa metálica y el cajón. Presione inicio para comenzar la iluminación. El iluminador proporciona una dosis controlada de luz UVA a la mezcla de aminas plaquetarias en el recipiente de iluminación.

El amin se une entre los pares de bases del ácido nucleico de los patógenos, que podrían estar presentes en la unidad de plaquetas. Tras la iluminación, se forman enlaces cruzados permanentes que bloquean el ADN o ARN, impidiendo que los patógenos se repliquen y causen enfermedad en el receptor del producto sanguíneo. Después de la iluminación, retire el conjunto de procesamiento.

A continuación, retire los contenedores del organizador, cuelgue las plaquetas y el conjunto de procesamiento. Rompa la cánula en la salida del contenedor de iluminación y permita que las plaquetas fluyan hacia el contenedor CAD. Dentro del contenedor CAD hay una oblea con perlas macroporosas de poliestireno inmovilizadas que reducen los niveles de amina residual en el producto sanguíneo.

Teniendo cuidado de no doblar la oblea de CAD. Exprese el aire del recipiente de CAD al recipiente de iluminación. Selle el tubo cerca del puerto de entrada del recipiente de CAD.

Retire y deseche el recipiente de iluminación vacío. Coloque el recipiente CAD con los recipientes de almacenamiento adjuntos sobre un agitador de plaquetas durante seis a 16 horas. Esto provocará una reducción de la amlin residual a una concentración menor o igual a dos micromoles por litro.

Tras el tratamiento con CAD, retire las unidades de plaquetas del agitador, cuelgue las plaquetas, rompa la cánula en la salida del recipiente de CAD y permita que las plaquetas fluyan hacia los dos recipientes de almacenamiento. A continuación, expulse el aire de los recipientes de almacenamiento. Selle el tubo por encima de la bifurcación en Y y retire el recipiente de CAD.

El resultado son dos concentrados de plaquetas inactivados para patógenos para evaluar la función plaquetaria in vitro. La dosis de plaquetas, pH, PO₂, producción de lactato y consumo de glucosa del intercepto se determinaron en los concentrados de plaquetas hasta el día siete de almacenamiento.

Esta figura muestra la dosis media inicial de plaquetas del concentrado de plaquetas de doble dosis antes del tratamiento con intercepto, y la dosis media de plaquetas en cada uno de los productos fraccionados tratados hasta el día siete de almacenamiento. Como puede observarse aquí, la pérdida de plaquetas durante el almacenamiento fue aproximadamente del 9 %. Esta reducción no difiere de la pérdida esperada de plaquetas durante el almacenamiento de plaquetas convencionales. Según los requisitos europeos, el pH de las plaquetas debe mantenerse por encima de 6,4 hasta el final de su vida útil.

Durante el procesamiento, el pH de los concentrados de plaquetas disminuye ligeramente según el volumen de concentración de plaquetas y la permeabilidad al gas del recipiente de almacenamiento de plaquetas. Esta figura muestra el pH de los productos plaquetarios fraccionados durante siete días de almacenamiento; el pH se mantiene estable y adecuadamente dentro de los requisitos de procesamiento. El metabolismo aeróbico debe continuar ocurriendo en las plaquetas almacenadas y es un indicador de la capacidad de las plaquetas para funcionar in vivo después de la transfusión a un paciente.

El consumo de O₂ y la producción de CO₂ indican la respiración continua de las plaquetas interceptadas en el recipiente PL 24 10 durante siete días de almacenamiento. Asimismo, el metabolismo anaeróbico debería continuar en las plaquetas almacenadas. Por lo tanto, el consumo de glucosa y la producción de lactato también son indicadores de la capacidad de las plaquetas para funcionar tras la transfusión.

Estas dos figuras muestran los niveles de lactato y glucosa durante siete días de almacenamiento. El consumo de glucosa plaquetaria y la producción de lactato son consistentes entre sí. Durante los siete días de almacenamiento, cinco unidades tuvieron niveles de glucosa inferiores a 1,11 milimoles por litro, que es el límite inferior para el ensayo de glucosa.

La preparación del código Buffy y la validación del agrupamiento produjeron concentrados de plaquetas que cumplen con los criterios de entrada para el tratamiento con sistema Intercept, específicamente volumen, recuento de plaquetas, proporción de plasma y contaminación por glóbulos rojos. Las unidades finales cumplen con los criterios de validación durante siete días de almacenamiento, incluyendo dosis de plaquetas y pH. La principal ventaja de esta técnica frente al método convencional de preparación del código Buffy, que produce un concentrado de plaquetas de dosis única, es que maximiza el rendimiento de componentes a partir de las recolecciones de sangre, reduce los gastos operativos mediante el uso de una técnica de dosis doble y mejora la seguridad del paciente al inactivar patógenos transmitidos por transfusión.