Administración intranasal de la terapéutica del SNC para Ratones Awake

El objetivo general de este procedimiento es dirigir los fármacos al sistema nervioso central mediante la administración intranasal en ratones sin anestesia. Esto se logra aclimatando primero el mouse a la manipulación. El segundo paso es utilizar un agarre de pescuezo modificado para inmovilizar la cabeza del animal.

A continuación, las gotas del fármaco se administran por vía intranasal con una pipeta. En el paso final, el ratón es devuelto a su jaula con una recompensa. Las principales ventajas de esta técnica son que la administración intranasal dirige los fármacos al sistema nervioso central sin exposición sistémica, y que la administración intranasal de fármacos con el paciente despierto permite el tratamiento crónico en ratones sin anestesia.

Este método se puede utilizar para ayudar a responder preguntas clave en el desarrollo de medicamentos para el tratamiento de enfermedades neurológicas. Por lo general, las personas nuevas en este método tendrán dificultades porque es difícil sujetar la boca de forma segura para evitar el movimiento de la cabeza. La demostración visual de este método es fundamental, ya que la ubicación de los dedos para el agarre adecuado es clave y difícil de explicar a través de texto y fotografías. Dos a cuatro semanas antes de la administración intranasal, aclimate a los ratones a la manipulación realizando los siguientes pasos durante dos o tres días cada uno, confirmando que el ratón no muestra signos de estrés antes de pasar al siguiente paso.

Para el primer paso de aclamación, coloque el mouse en la palma de la mano durante un período de dos a tres minutos. No más de un pie por encima de la jaula. A continuación, coloque el ratón en la palma de la mano durante tres minutos y acaricie al animal suavemente desde la cabeza hasta la cola, permitiendo que el animal se mueva libremente.

Una vez que el animal tolere las caricias, coloque el ratón en la palma de la mano durante tres minutos y luego use el pulgar y el dedo índice para pellizcar ligeramente la piel en la parte posterior del cuello del animal. Para el siguiente paso de aclimatación, levante el ratón por el pescuezo durante 30 segundos. A continuación, deje que el animal descanse en la parte superior de la jaula durante otros 30 segundos antes de repetir la sujeción de nuevo.

Ahora practique el agarre intranasal usando primero el pulgar y el índice de la mano dominante para sujetar el mouse por la cola. A continuación, utiliza los dedos anular y meñique del medio para sujetar ligeramente la parte inferior del cuerpo del animal a la jaula. Deje que el ratón se agarre a las barras, estirando ligeramente al animal para agarrar mejor el pescuezo.

Con el pulgar y el dedo medio de la mano no dominante, proceda a pellizcar firmemente el ratón en el pescuezo detrás del cuello y los hombros, tirando hacia arriba de la piel suelta de la parte superior de la espalda para hacer una tienda a través de los omóplatos. Luego, coloque rápidamente el dedo índice de la mano no dominante en la cabeza del mouse lo más cerca posible de la nariz y tire hacia atrás de la piel. Al mismo tiempo, deslice los dedos pulgar y medio hacia la cabeza para una posición óptima.

Lo ideal es que el ratón no pueda mover la cabeza vertical u horizontalmente. Durante la siguiente sesión, realice el agarre intranasal como se acaba de demostrar. Esta vez invirtiendo el animal para que su lado ventral mire hacia el techo y su cuello quede paralelo al suelo.

Una vez que el ratón se sienta cómodo con el agarre intranasal invertido, practique brevemente colocar una micropipeta con la punta vacía cerca de cada fosa nasal. Finalmente, administre seis microlitros de solución salina, primero a un solo nare, y luego en la siguiente sesión a ambos utilizando el procedimiento de administración intranasal del fármaco que se muestra más detalladamente en la siguiente sección antes de comenzar la administración intranasal del fármaco. Primero, coloque las jaulas y los instrumentos de dosificación para que sean de fácil acceso.

A continuación, saca el primer ratón de su jaula y utiliza el agarre intranasal que acabas de demostrar para recoger al animal. A continuación, con la mano dominante, cargue la micropipeta con seis microlitros de fármaco. Coloque la punta de la pipeta llena cerca de la fosa nasal izquierda del ratón en un ángulo de 45 grados.

Luego, expulse lentamente el medicamento para formar una pequeña gota con aproximadamente la mitad del volumen en la punta, coloque la gota lo suficientemente cerca de la fosa nasal del ratón para que el ratón pueda inhalarla inmediatamente después de que el ratón inhale la gota, expulse el resto del medicamento en la punta de la pipeta para formar otra gota pequeña para que el ratón la inhale a través de la misma fosa nasal unos dos o tres segundos después, Mantenga el ratón en esta posición durante 15 segundos y, a continuación, administre el fármaco en la fosa nasal derecha de la misma manera. Ahora, vuelva a colocar el ratón en la parte superior de la jaula durante dos minutos, y luego vuelva a administrar el medicamento en ambas fosas nasales como se acaba de demostrar exactamente dos minutos después de la administración en la primera fosa nasal para administrar uno o dos ratones a la vez. Este programa de muestra se puede seguir después de que el ratón haya recibido la dosis completa del fármaco.

Regrese al animal a su jaula. Después de cada sesión de aclimatación o dosificación intranasal, los ratones deben recibir una golosina como un cheerio como refuerzo positivo para reducir el estrés, siempre restaurar los nidos a sus estados originales antes de devolver a los animales a sus jaulas, cambiar los guantes entre jaulas cuando dosifique a los animales alojados en grupo para no transferir el olor de una colonia de jaula a otra, lo que induciría un comportamiento agresivo de los compañeros de jaula. Una vez dominado, una persona puede administrar el fármaco por vía intranasal a 15 a 20 ratones en una hora mientras intenta este procedimiento con más de un ratón a la vez.

Es importante tomar precauciones para evitar que los ratones cambien de jaula accidentalmente. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo usar la administración intranasal en ratones sin anestesia. Para dirigir los fármacos al sistema nervioso central.

Recuerde siempre tomar precauciones cuando trabaje con ratones, como usar una mascarilla N95 y guantes para evitar la exposición a alérgenos.