Name: Microinyección insulina hipocampo y En vivo Microdiálisis durante la prueba de memoria espacial (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-11T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 32 s
Description: Aprende a medir el metabolismo hipocampal durante pruebas de memoria espacial mediante microdiálisis in vivo en animales conscientes. Este método permite analizar cambios neuroquímicos en tiempo real.

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<ol><li>McNay, E. C., Fries, T. M., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreases+in+rat+extracellular+hippocampal+glucose+concentration+associated+with+cognitive+demand+during+a+spatial+task%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Decreases in rat extracellular hippocampal glucose concentration associated with cognitive demand during a spatial task.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97 (6), 2881(2000).</li>
<li>McNay, E. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+differences+in+hippocampal+extracellular+fluid+glucose+concentration+during+behavioral+testing+and+following+systemic+glucose+administration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gerontol.+A.+Biol.+Sci.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Age-related differences in hippocampal extracellular fluid glucose concentration during behavioral testing and following systemic glucose administration.</a> J. Gerontol. A. Biol. Sci. Med. Sci. 56 (2), 66(2001).</li>
<li>McNay, E. C., McCarty, R. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluctuations+in+brain+glucose+concentration+during+behavioral+testing%3A+dissociations+between+brain+areas+and+between+brain+and+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Learn.+Mem%22%5BJournal%5D)">Fluctuations in brain glucose concentration during behavioral testing: dissociations between brain areas and between brain and blood.</a> Neurobiol. Learn. Mem. 75 (3), 325(2001).</li>
<li>McNay, E. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+glucose+concentrations+in+the+rat+hippocampus+measured+by+zero-net-flux%3A+effects+of+microdialysis+flow+rate%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Extracellular glucose concentrations in the rat hippocampus measured by zero-net-flux: effects of microdialysis flow rate.</a> 72 (2), 785(1999).</li>
<li>McNay, E. C., Sherwin, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+recurrent+hypoglycemia+on+spatial+cognition+and+cognitive+metabolism+in+normal+and+diabetic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Effect of recurrent hypoglycemia on spatial cognition and cognitive metabolism in normal and diabetic rats.</a> Diabetes. 53 (2), 418(2004).</li>
<li>McNay, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+memory+processes+are+modulated+by+insulin+and+high-fat-induced+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Learning+and+Memory%22%5BJournal%5D)">Hippocampal memory processes are modulated by insulin and high-fat-induced insulin resistance.</a> Neurobiology of Learning and Memory. 93 (4), 546(2010).</li>
<li>McNay, E. C., McCarty, R. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluctuations+in+brain+glucose+concentration+during+behavioral+testing%3A+dissociations+between+brain+areas+and+between+brain+and+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Learning+%26+Memory%22%5BJournal%5D)">Fluctuations in brain glucose concentration during behavioral testing: dissociations between brain areas and between brain and blood.</a> Neurobiology of Learning & Memory. 75 (3), 325(2001).</li>
<li>McNay, E. C., Williamson, A., McCrimmon, R. J., Sherwin, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+and+neural+hippocampal+effects+of+long-term+moderate+recurrent+hypoglycemia%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Cognitive and neural hippocampal effects of long-term moderate recurrent hypoglycemia.</a> Diabetes. 55 (4), 1088(2006).</li>
<li>McNay, E. C., Sherwin, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+artificial+cerebro-spinal+fluid+%28aCSF%29+to+artificial+extracellular+fluid+%28aECF%29%3A+microdialysis+perfusate+composition+effects+on+in+vivo+brain+ECF+glucose+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">From artificial cerebro-spinal fluid (aCSF) to artificial extracellular fluid (aECF): microdialysis perfusate composition effects on in vivo brain ECF glucose measurements.</a> Journal of Neuroscience Methods. 132 (1), 35(2004).</li>
<li>McNay, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+memory+processes+are+modulated+by+insulin+and+high-fat-induced+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Learning+and+Memory%22%5BJournal%5D)">Hippocampal memory processes are modulated by insulin and high-fat-induced insulin resistance.</a> Neurobiology of Learning and Memory. 93 (4), 546(2010).</li>
<li>Benveniste, H., Drejer, J., Schousboe, A., Diemer, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+cerebral+glucose+phosphorylation+and+blood+flow+after+insertion+of+a+microdialysis+fiber+through+the+dorsal+hippocampus+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Regional cerebral glucose phosphorylation and blood flow after insertion of a microdialysis fiber through the dorsal hippocampus in the rat.</a> Journal of Neurochemistry. 49 (3), 729(1987).</li>
<li>Benveniste, H., Diemer, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+reactions+to+implantation+of+a+microdialysis+tube+in+the+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Cellular reactions to implantation of a microdialysis tube in the rat hippocampus.</a> Acta Neuropathologica. 74 (3), 234(1987).</li>
<li>McNay, E. C., Fries, T. M., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreases+in+rat+extracellular+hippocampal+glucose+concentration+associated+with+cognitive+demand+during+a+spatial+task%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Decreases in rat extracellular hippocampal glucose concentration associated with cognitive demand during a spatial task.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (6), 2881(2000).</li>
<li>McNay, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+memory+processes+are+modulated+by+insulin+and+high-fat-induced+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">Hippocampal memory processes are modulated by insulin and high-fat-induced insulin resistance.</a> Neurobiol. Learn Mem. 93 (4), 546(2010).</li>
<li>Lonnroth, P., Jansson, P. -A., Smith, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microdialysis+method+allowing+characterization+of+intercellular+water+space+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">A microdialysis method allowing characterization of intercellular water space in humans.</a> American Journal of Physiology. 1987, E228(1987).</li>
<li>McNay, E. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+glucose+concentrations+in+the+rat+hippocampus+measured+by+zero-net-flux%3A+effects+of+microdialysis+flow+rate%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Extracellular glucose concentrations in the rat hippocampus measured by zero-net-flux: effects of microdialysis flow rate.</a> 72 (2), 785(1999).</li>
<li>Lalonde, R. obert <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurobiological+basis+of+spontaneous+alternation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+%26+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">The neurobiological basis of spontaneous alternation.</a> Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 26 (1), 91(2002).</li>
<li>Richman, C., Dember, W., Kim, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+alternation+behavior+in+animals%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Psychology%22%5BJournal%5D)">Spontaneous alternation behavior in animals: A review.</a> Current Psychology. 5 (4), 358(1986).</li>
<li>McNay, E. C., Canal, C. E., Sherwin, R. S., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+memory+with+septal+injections+of+morphine+and+glucose%3A+effects+on+extracellular+glucose+levels+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Modulation of memory with septal injections of morphine and glucose: effects on extracellular glucose levels in the hippocampus.</a> Physiol. Behav. 87 (2), 298(2006).</li>
<li>McNay, E. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+modulation+across+neural+systems%3A+intra-amygdala+glucose+reverses+deficits+caused+by+intraseptal+morphine+on+a+spatial+task+but+not+on+an+aversive+task%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Memory modulation across neural systems: intra-amygdala glucose reverses deficits caused by intraseptal morphine on a spatial task but not on an aversive task.</a> Journal of Neuroscience. 18 (10), 3853(1998).</li>
<li>Rex, A., Bert, B., Fink, H., Voigt, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimulus-dependent+changes+of+extracellular+glucose+in+the+rat+hippocampus+determined+by+in+vivo+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Stimulus-dependent changes of extracellular glucose in the rat hippocampus determined by in vivo microdialysis.</a> Physiol. Behav. 98 (4), 467(2009).</li>
</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

Todas las soluciones utilizadas en la microdiálisis se filtró inmediatamente antes de su uso, usando un filtro de 0,2 micras. Después de la inserción de la sonda dentro de la cánula guía, observar para confirmar que el flujo no está obstruido y recogida de muestras está ocurriendo. Si el flujo se detiene después de la inserción, la causa más probable es el daño a la membrana de la sonda causado por la insuficiente atención en la inserción, y una sonda fresco debe ser sustituido. Como se seña...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> La mayoría de los reactivos son de grado de laboratorio estándar y se pueden obtener de un proveedor de elección. Del mismo modo, el equipo tal como bombas de jeringa y los tubos se puede utilizar desde cualquiera de varios fabricantes. Los temas específicos utilizados aquí para que los detalles son importantes incluyen: </td></tr><tr><td> CMA 12 sondas de microdiálisis </td><td> CMA / microdiálisis </td><td> CMA-12-XXX </td><td> Estos están disponibles en longitudes de membrana diferentes y cortes, indicados por códigos específicos en el &#39;XXX&#39;. </td></tr><tr><td> La insulina humana (Humulina) </td><td> Eli Lilly </td><td> N / a </td><td></td></tr><tr><td> Giratorio líquido </td><td> Instech </td><td> 375/D/22QM </td><td> Este giro específico tiene un par muy bajo y volumen interno, así como un nonrearevestimiento de cuarzo ctive. </td></tr></tbody></table>

microinyección insulina hipocampo y<em&gt; en vivo</em&gt; microdiálisis durante la prueba de memoria espacial

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Metabolismo de la glucosa es un marcador útil para la actividad neuronal local, formando la base de métodos tales como la resonancia de 2-desoxiglucosa y magnética funcional. Sin embargo, el uso de tales métodos en modelos animales y por lo tanto requiere anestesia tanto altera el estado del cerebro y previene medidas de comportamiento. Un método alternativo es el uso de la microdiálisis in vivo para tomar la medición continua de las concentraciones cerebrales de fluidos extracelulares de los metabolitos de la glucosa, lactato, y similares en animales despiertos, sin restricciones. Esta técnica es especialmente útil cuando se combina con las tareas diseñadas para confiar en regiones específicas del cerebro y / o la manipulación farmacológica aguda, por ejemplo, las mediciones del hipocampo durante una tarea de memoria de trabajo espacial (alternancia espontánea) muestran un descenso de la glucosa extracelular y aumento del lactato que son sugerente de 1,2 glucólisis mejorada, y la administración de insulina intrahipocampal tanto mejora la memoria y aumenta glicol hipocampolisis 3. Sustancias tales como la insulina puede ser entregado a la hipocampo a través de la sonda de microdiálisis mismo que se utiliza para medir metabolitos. El uso de alternancia espontánea como una medida de la función del hipocampo está diseñado para evitar cualquier confundir motivadores de estrés (por ejemplo choque eléctrico), restricción, o recompensas (por ejemplo, alimentos), todos los cuales pueden alterar tanto la ejecución de tareas y el metabolismo; esta tarea también proporciona un medir la actividad motora que permite el control de los efectos no específicos del tratamiento. Combinados, estos métodos permiten la medición directa de las variables neuroquímicos y metabólicos que regulan el comportamiento.

Las ratas se recuperará rápidamente de la cirugía y estar alerta, móvil y activo dentro de los 30 min tras el cese de la anestesia. El impacto de la tapa de la cánula debe ser mínimo si la cirugía se lleva a cabo de manera limpia y cemento dental mínimo se utiliza. Si cualquier signo de infección se nota durante el seguimiento post-operatorio, o la rata es de ninguna manera mostrar signos de malestar o incomodidad, inmediatamente terminado el experimento, lo que debe ser extremadamente rara. Durante la tramitación antes...

La modulación de hippocampally dependiente de memoria de trabajo espacial mediante microinyección intrahipocampal directo, acompañado y seguido de<em&gt; In vivo</em&gt; Microdiálisis para metabolitos en animales conscientes y se comportan.

Microinyección insulina hipocampo y<em&gt; En vivo</em&gt; Microdiálisis durante la prueba de memoria espacial

El metabolismo de la glucosa es un marcador útil de la actividad neuronal local, que constituye la base de métodos como la 2-desoxiglucosa y la resonancia magnética funcional...

El objetivo general de este procedimiento es medir el metabolismo del hipocampo durante las pruebas conductuales. Esto se logra mediante la preparación quirúrgica de un animal bien manipulado con una cánula guía para microdiálisis. El día de la prueba, se inserta una sonda de microdiálisis en la cánula y se confirma el flujo PERFUSE ocho.A continuación, se permite que la sonda alcance el equilibrio mientras el animal permanece en una cámara de control. En última instancia, se requieren métodos analíticos adecuados, por ejemplo, una reacción de glucosa oxidasa, NADP, N-A-D-P-H y análisis fluorométrico. Si se mide la glucosa para mostrar el nivel de metabolismo y/o liberación neuroquímica durante el período de prueba, uno de los aspectos más difíciles de esta técnica es el cuidado necesario al manipular el tubo de microdiálisis y también el hecho de que con frecuencia los animales lo mastican o enredan los conductos si no se toman las precauciones debidas.Así que la primera vez que utilicé la microdiálisis del hipocampo durante pruebas conductuales fue durante mi trabajo de posgrado, y queríamos comprobar si los modelos existentes sobre el suministro de glucosa eran, de hecho, compat

hippocampal-insulin-microinjection-vivo-microdialysis-during-spatial

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Neurociencia

Fuente: Provenzano, G., et al. Visualización inmunohistoquímica de la actividad de las neuronas del hipocampo después del aprendizaje espacial en un modelo de ratón de trastornos del neurodesarrollo. J. Vis. Exp. (2015)Este video muestra imágenes inmunohistoquímicas para visualizar la activación neuronal del hipocampo. Las secciones cerebrales teñidas revelan regiones más oscuras bajo un microscopio de campo claro, lo que indica neuronas activadas.

Imágenes de la activación neuronal del hipocampo en secciones del cerebro de ratón

Los microARNs tienen funciones importantes en la estructura y función del cerebro. Aquí se describe un método para hacer cumplir miRNA hipocampo sobreexpresión mediante inyección estereotáxica de un lentivirus que expresan los genes miARN ingeniería. Este enfoque puede servir como una manera relativamente rápida para evaluar...

Inyección estereotáctica de microARN que expresan lentivirus al ratón hipocampo CA1 Región y evaluación de los resultados del comportamiento

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Visualización inmunohistoquímico de hipocampo Neurona Actividad Después espacial aprendizaje en un modelo de ratón de los trastornos del desarrollo neurológico

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