Name: Un modelo Contusión de la lesión de la médula espinal severa en ratas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: Aprenda a establecer un modelo de contusión severa de la médula espinal en ratas mediante técnicas quirúrgicas estandarizadas. Este protocolo detallado incluye preparación estéril, procedimiento operatorio y cuidados postoperatorios esenciales.

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Los autores agradecen al Dr. N. Banik y el Dr. D. Mitchell por su orientación en el desarrollo de este modelo.

1. Preparación Antes de una Lesión de la Médula Espinal Los instrumentos quirúrgicos necesarios para este procedimiento son bisturí, pastillas con o sin dientes, hemostáticos, retractores de auto contención, gubias punta fina, conductor de agujas, suturas absorbibles y aplicadores del clip de piel. Otros suministros quirúrgicos requeridos son paños quirúrgicos, sábanas estériles para campo quirúrgico, esponjas de gasa, aplicadores con punta de algodón, y papel metálico. Esterilizar en autoclave los instrumentos quirúrgicos y suministros antes de la cirugía. Utilice el conjunto individual de instrumentos y suministros para un animal. Limpie el área de la cirugía y aparatos (impactador, fuente de luz, marco estereotáctico, grano de cristal esterilizadores y almohadillas térmicas) con toallitas con alcohol. Abra las cortinas quirúrgicas y el uso de guantes estériles para cubrir el campo quirúrgico evitando cuidadosamente contaminación. Abra los instrumentos individuales estéril y colocar cuidadosamente los del campo quirúrgico. Cubra los pomos y tiradores de thaparato de correo probable necesario durante el procedimiento con la lámina metálica estéril. Encender la perla esterilizador de vidrio para estar listo para su uso durante el procedimiento. 2. Preparación de los animales Llevar las ratas a la zona de laboratorio pocas horas antes de que el procedimiento real. Administrar medicamentos para el dolor, al menos, una hora antes del procedimiento previsto (normalmente buprinorphine 1,5 ml de 0,006 mg / ml por vía subcutánea). Administrar antibióticos preoperatorios (típicamente Baytril 4 mg / kg por vía subcutánea). Anestesie las ratas con 90 mg / kg de ketamina y esperar hasta que no haya respuesta toe-pinch. Se palpa la apófisis espinosa más prominente en la columna torácica. Este nivel se corresponde normalmente con T10 apófisis espinosa. Marque la ubicación del nivel previsto en relación con T10. En nuestro laboratorio realizamos una lesión en T10. El siguiente relato describe la técnica de T10 SCI. Afeitado a 3 cm x 6 cm rectángulo longitudinal y centrada a nivel de T10. Limpie la piel tres veces wisolución de Betadine th. Aplicar lubricante oftálmica en cada ojo. Transferir la rata en una posición cómoda para el campo quirúrgico evitando cuidadosamente la contaminación. Inserte una sonda de temperatura rectal para monitorear la temperatura del núcleo y ajustar en consecuencia el calentamiento para mantener la temperatura animales como cerca de lo normal (~ 37,5 ° C) como sea posible. Cubrir la rata con un paño quirúrgico con una ventana por encima de la zona quirúrgica. 3. Procedimiento quirúrgico Comience con un aproximado de 4 cm incisión utilizando una cuchilla # 10 centrado en la marca de T10. Proceda a diseccionar pacientemente fascia y capas musculares lejos de las T9-T11 apófisis espinosas y las láminas. Coloque retractores para retraer el músculo y la fascia lejos del hueso. Mientras que la estabilización de la apófisis espinosa de T9 fuertemente dividir el ligamento interespinoso entre T9 y T10 con unas tijeras finas. Del mismo modo estabilizar la apófisis espinosa T10 y dividir el ligamento interespinoso entre T10-T11. Utilice ampliación bucle para complementarte la división de los ligamentos de todo el camino a través del ligamento amarillo (Figura 1). El saco tecal es fácilmente evidente una vez que el ligamento amarillo se desconecta. Utilice gubia de punta fina para realizar cuidadosamente laminectomía fragmentario bilateral en T10. Se toma el máximo cuidado para evitar una presión a la baja sobre el saco tecal y lesión inadvertida de las puntas gubia. La lámina y apófisis espinosa de T10 se elimina por completo. Mueva el animal en su posición en la plataforma de estabilización. Use abrazaderas estabilizadores para inmovilizar la columna vertebral de sujeción por los aspectos laterales del cuerpo vertebral T11 seguido por los aspectos laterales del cuerpo vertebral T9. Tenga cuidado de no comprimir la rata en la plataforma con las abrazaderas estabilizadoras ya que esto limitaría el espacio para los movimientos respiratorios y añadir estrés no deseado del animal. Después de asegurar se comprueban la configuración de columna vertebral en el impactador controlado por ordenador. Normalmente usamos punta impactador de 3,0 mm a una speed de 4 cm / s, con una profundidad de 2 mm y un tiempo de permanencia de 0,3 segundos. Extienda la punta del péndulo y bajarlo hasta que toque la superficie dorsal. Retirar la punta y bajar el dispositivo de 2 mm hacia la superficie de la médula espinal. Suelte pistón en 4 cm / s para causar contusión lesión medular grave. Lograr la hemostasia utilizando sólo la presión suficiente para mantener el aplicador de punta de algodón en el lugar, teniendo cuidado de no crear una presión innecesaria sobre el cable. Sutura del músculo y las capas de la fascia con una sutura en forma de 8 con cuidado de no tirar de la muy apretada con suturas absorbibles. Cierre la piel con un mínimo de 2 pequeñas grapas, puede tener hasta 4 o 5 grapas pueden usarse si las partes de la incisión permanecen abiertos después de las primeras 2 o 3 grapas. 3. Cuidados después del procedimiento Ratas en un ambiente cálido de unos 33 a 35 ° C durante 24 horas después de la cirugía. Esto implica una incubadora (mientras están inconscientes) y un espacio de jaula climatizada, una vez que comienzan a moverse. Una vez que las ratas son completamente awome, administrar 5 ml de solución salina, 1,5 ml (0,006 mg / ml) de buprinorphine, y 0,1 ml de Baytril todo por vía subcutánea. Continúe con buprinorphine subcutánea dos veces al día para el primer 24-48 hy Baytril una vez al día durante 7 días. Las vejigas deben expresarse manualmente tres veces al día hasta el regreso de la función de la vejiga (&lt;2 ml de orina en la expresión temprano por la mañana durante 3 días consecutivos). Los animales también deben ser revisados ​​durante este tiempo de infección (sangre en la orina, color blanquecino o mal olor), disminución de la actividad física o los problemas con la cicatrización de la herida. La presencia de la infección debe ser contrarrestado con un aumento de la dosis (o reinicio) de antibióticos en consulta con los veterinarios locales. Pesar ratas comienzan diario el día después de la cirugía para evaluar su recuperación.

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Varios nuevos tratamientos han demostrado recientemente promesa temprana en el campo de la investigación SCI. 3 La evaluación cuidadosa de estos tratamientos es esencial en el modelo clínicamente relevante de SCI para seleccionar estrategias con potencial de traslación máxima. Un esquema de clasificación fue desarrollado recientemente para evaluar la fuerza de los estudios preclínicos. 9 Este esquema hizo hincapié en la importancia de utilizar modelos contusión severa SCI. Aquí se describe un model...

Elección del modelo de lesión adecuada es fundamental para la evaluación preclínica de nuevos tratamientos para lesiones de la médula espinal (SCI). 1,2,13 En una reciente encuesta de los médicos y científicos en el campo de la modelo contusión neurotrauma, a diferencia de los modelos de transección completa hemisección o , fue universalmente aceptado para ser clínicamente relevante. 8 Esta opinión se basa en la observación de que la mayoría de las lesiones de la médula espinal en los seres humanos es contusa en la naturaleza. 10 La biología de contusión también parece ser diferente de los modelos de hemisección o transección. 11 Iseda, et al. comparó el efecto de la inyección intraespinal condroitinasa ABC en neuroregeneración por separado en los modelos de contusión y hemisección. 4 regeneración axonal se observó en el puente neuronal en hemisección pero no el grupo SCI contusión. Los modelos transección completa hemisección o también crean las condiciones conocidas en sólo un pequeño subconjunto de clcircunstancias inical. Por ejemplo, varios investigadores han empleado intervenciones andamio basados ​​para la implantación en la cavidad de la lesión después de la hemisección o transección completa para promover la regeneración. 6 Este enfoque se vuelve clínicamente irrelevantes porque la creación de una cavidad dentro de la médula espinal lesionada es poco práctico y probablemente no ética. La variabilidad en la recuperación funcional sigue siendo un desafío importante para los modelos de contusión. 5,12 Esta variabilidad puede ser minimizado mediante el uso de impactador controlado por ordenador y la estabilización de la columna vertebral antes del impacto para la entrega de fuerza uniforme en todo el volumen de la médula espinal en especial las vías motoras situadas ventralmente . Debe tenerse en cuenta que la plasticidad y la contribución garantía de axones supervivientes es el mecanismo predominante de la recuperación después de lesión de la médula espinal. 1 Por lo tanto, incluso variaciones menores en la técnica de contusión pueden producir resultados significativamente diferentes. Con este fin hemos desarrolladoun modelo de lesión medular severa que produce contusión volumen constante y la recuperación funcional comparable con los modelos de transección. Este modelo puede ser utilizado tanto para la investigación de la neuroprotección y estrategias Neuroregeneración como una prueba de concepto para la eficacia del tratamiento.

<table><tbody><tr><td>Impactador controlado desde computador (PC</td><td>) Leica o Infinite Horizons (antes OSU) impactador</td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Instrumentos quirúrgicos </td></tr><tr><td>Tijeras</td><td>Fine Science Tools Inc</td><td>14094-11 o 14060-09</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas</td><td>Fine Science Tools Inc</td><td>11006-12 y 11027-12 o 11506-12</td><td></td></tr><tr><td>Hemostáticos</td><td>Fine Science Tools Inc</td><td>13009-12</td><td></td></tr><tr><td>Retractores</td><td>Fine Science Tools Inc</td><td>17011-10</td><td></td></tr><tr><td>Rongeurs</td><td>Fine Science Tools Inc</td><td>16020-14</td><td></td></tr><tr><td>Destornillador de agujas</td><td>Fine Science Tools Inc</td><td>12001-13</td><td></td></tr><tr><td>Marco estereotáctico</td><td>Leica o RWD Life Science Co. o sistemas TSE</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprinorfina</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Baytril</td><td>Bayer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamina</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

un modelo contusión de la lesión de la médula espinal severa en ratas

A Contusion Model of Severe Spinal Cord Injury in Rats

El potencial de la traducción de nuevos tratamientos debe ser investigado en lesiones graves de la médula espinal (SCI) modelos contusión. Una metodología detallada se describe para obtener un modelo consistente de severa SCI. El uso de un marco estereotáctico y impactador controlado por ordenador permite la creación de lesión reproducible. La hipotermia y las infecciones del tracto urinario representan retos significativos en el período post-operatorio. Monitoreo cuidadoso de los animales con la grabación diaria de peso y la expresión de vejiga permite la detección precoz de las complicaciones post-operatorias. Los resultados funcionales de este modelo contusión son equivalentes a los modelos de transección. El modelo de contusión se puede utilizar para evaluar la eficacia de ambos enfoques neuroprotectores y neuroregenerativos.

Volumen de la lesión Hemos obtenido grandes volúmenes de la lesión y coherente siguiendo la técnica descrita anteriormente. El uso de un Luxol rápido tinción con azul de un volumen de la lesión media de 2,04 mm 3 (IC del 95% 01.09 hasta 02.18) (n = 5 animales) se obtuvo. Figura 2 muestra significa volumen de la lesión con una tinción representativa utilizando azul rápido Luxol a través de la lesión epicentro. Las puntuaciones funcionales </p...

Se describe un modelo de contusión de la lesión medular grave. Medidas pre-operatorio, operatorio y post-operatorio detalladas se describen para obtener un modelo coherente.

Un modelo Contusión de la lesión de la médula espinal severa en ratas

The translational potential of novel treatments should be investigated in severe spinal cord injury (SCI) contusion models. A detailed methodology is ...

Los autores colaboradores de este video son el Dr. VOR Krishna, médico residente jefe del Departamento de Neurociencia, división de Neurocirugía de la Universidad Médica de Carolina del Sur; el Dr. Mark Kendi, profesor de neurociencia en la Universidad Médica de Carolina del Sur y científico en carrera en el Centro Médico de Asuntos de Veteranos de Carolina del Sur; y Hampton Andrews, estudiante de segundo año de la Facultad de Medicina de la Universidad Médica de Carolina del Sur. Este video demostrará la preparación de un animal en campo estéril para cirugía, el procedimiento quirúrgico en sí mismo y los métodos de cuidados posquirúrgicos. Primero, todos los instrumentos y materiales quirúrgicos deben ser autoclavados antes de preparar el campo quirúrgico.Si va a realizar más de un procedimiento, asegúrese de autoclavar juegos adicionales de instrumentos para cada animal. A continuación, limpie el área quirúrgica y todos los componentes con toallitas de alcohol. Una vez preparado el campo quirúrgico, coloque todos sus instrumentos quirúrgicos sobre un campo estéril.Demostraremos el procedimiento de hoy utilizando una rata hembra adulta de la cepa Spray-Dolly. Lleve sus ratas al l

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Un modelo de la contundente unilateral Lesión Medular Cervical Uso del Impactador Infinite Horizon

Estabilización vertebral es necesaria para minimizar la variabilidad, y para la producción de lesiones de médula espinal experimentales consistentes. Utilizando un aparato de estabilización personalizado en combinación con el dispositivo impactador NYU / Mascis, hemos demostrado aquí el equipo y el procedimiento adecuado para la generación de cervicales (C5) de lesiones de la médula reproducibles-hemi contusa espinal en ratas adultas.

Una novela Vertebral Método de Estabilización para Producir contuso Lesiones de la Médula Espinal

Lesión de la médula espinal es una condición traumática que causa morbilidad severa y alta mortalidad. En este trabajo se describe en detalle un modelo contusión de lesión de la médula espinal en ratones seguido de un trasplante de células madre neurales.

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Este artículo describe un método para generar una lesión por compresión de la médula espinal (LME) reproducible en el ratón neonatal. El modelo proporciona una plataforma ventajosa para estudiar los mecanismos de plasticidad adaptativa que subyacen a la recuperación funcional espontánea.

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Aquí, describimos una nueva técnica rápida que modela la lesión abierta de la médula espinal en ratas que elimina la laminectomía. La hemisección lateral se realiza mientras se observa a través de un microscopio. La técnica es versátil y también se puede utilizar en las regiones cervical, torácica y lumbar de la médula espinal de otros animales.

Una técnica de hemisección lateral de la médula espinal rápida y mínimamente invasiva para modelar lesiones abiertas de la médula espinal en ratas

Las técnicas mínimamente invasivas y un dispositivo de laboratorio simple mejoran la reproducibilidad del modelo de lesión de la médula espinal al reducir el daño operatorio a los animales de experimentación y permitir el mantenimiento de la morfología anatómica. El método vale la pena porque los resultados confiables y el procedimiento reproducible facilitan las investigaciones de los mecanismos de reparación de enfermedades.

Establecimiento de un modelo de lesión de la médula espinal por contusión en ratones basado en una técnica mínimamente invasiva

Aquí se presenta un novedoso dispositivo automatizado de contusión por lesión de la médula espinal para ratones, que puede producir con precisión modelos de contusión por lesión de la médula espinal con diversos grados.

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Aprenda a establecer un modelo de contusión severa de la médula espinal en ratas mediante técnicas quirúrgicas estandarizadas. Este protocolo detallado incluye preparación estéril, procedimiento operatorio y cuidados postoperatorios esenciales.

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