Name: Recoger y medir los mediadores bioquímicos exudado de la herida en heridas quirúrgicas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 58 s
Description: Aprenda a recolectar exudado de herida quirúrgica usando el sistema On-Q modificado para analizar mediadores bioquímicos inflamatorios y nociceptivos. Este método permite estudiar la respuesta inmunológica local en humanos.

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El trabajo del Dr. Carvalho fue apoyado por una beca de investigación de la Oficina de Investigación en Salud de la Mujer y el Instituto Nacional de Salud Infantil y Desarrollo Humano de los Institutos Nacionales de Salud (5K12 HD043452). Angst Dr recibido suministros (On-Q PainBuster Post-Op Sistema de alivio del dolor) y fondos (para los ensayos bioquímicos) de I-Flow (Lake Forest, California).

1. Protocolo de estudio <ul><li> Obtener la aprobación del Comité de Revisión Institucional y el consentimiento informado por escrito. </li><li> Seleccione una población apropiada para la conducta quirúrgica estudio. Esta metodología sólo se ha aplicado a las heridas de parto por cesárea, pero las heridas quirúrgicas más sería apropiado. </li><li> Considerar los criterios de inclusión y exclusión para su participación en el estudio. Los pacientes y los procedimientos con altas tasas de infección de la herida quirúrgica no puede ser apropiado. </li><li> Estandarizar anestesia y postoperatorio de los pacientes para evitar posibles factores de confusión. </li></ul> 2. Colección Bioquímica mediador inflamatorio y nociceptivo <ul><li> Inserte el PainBuster ON-Q con ON-Q SilverSoaker (I-Flow, Lake Forest, CA) en la capa subcutánea justo antes de cierre de la herida (las otras capas de tejido puede ser considerado). El ON-Q Pain PainBuster de alivio del sistema suministra continuamente solución salina normal a una velocidad de 2 ml / h. El vehículo puede ser peineINED o con respecto a los medicamentos de interés, tales como un anestésico local y no esteroides antiinflamatorios. </li><li> Incorporar un estándar de llave de tres vías en este sistema para permitir la aspiración de exudado de la herida en puntos de tiempo especificados. La infusión continua impide que el catéter se coagule y se mejora la fiabilidad del sistema para producir muestras de exudado. Si la aspiración de exudado es difícil (aproximadamente 5% de los casos), considere empujando suavemente encima de la herida, el cambio de la posición del sujeto (por ejemplo, el paciente sentado o acostado ellos plana), utilizando un 0.5-1 ml de solución salina al ras normal o la retirada de la catéter 1-2 cm. </li><li> En los puntos de tiempo especificados por el protocolo (por ejemplo, 1, 4, 6, 24, y 48 horas después del parto por cesárea), aspirar y retirar 1 ml de exudado de la herida. Transferir el exudado en un vaso de polietileno que contiene 30 l de inhibidor de la proteinasa. Hemos utilizado inhibidor de proteinasa Complete (Roche Bioscience, Palo Alto, CA) para nuestros propósitos. </li><li&gt; En los mismos intervalos de tiempo especificados por el protocolo de estudio, recoger 10 ml de sangre. Hemos utilizado un tubo de recogida de sangre que contiene heparina de litio, en nuestra institución se trata de un tubo de vidrio con tapa de color verde. Añadir un adicional de 300 l de inhibidor de proteinasa en las muestras de sangre. </li><li> Dentro de 1 hora de la recogida, poner las muestras en hielo y centrifugar a 3.000 rpm durante 10 min. </li><li> Retire el suero y sobrenadante herida y colocar en un tubo de microcentrífuga estándar y almacenar a -20 ° C. </li></ul> 3. Ensayo de análisis <ul><li> Una vez que todo el exudado estudio y las muestras de suero se recogen y almacenan, descongelar y analizar las muestras al mismo tiempo. </li><li> Hemos medido las citocinas y quimiocinas usando un inmunoensayo múltiplex. El múltiplex inmunoensayo técnica nos permite ensayo de analitos numerosas pequeñas muestras de volumen (50 l). El múltiplex producir resultados comparables con los obtenidos con ELISA. Hemos utilizado el 17-plex Bio-PlexTM sistema (BioRad, Hercdulos, CA) para nuestro análisis. Este ensayo es capaz de medir el factor de necrosis tumoral α (TNF), interferón α (INFα), interleucina 1β (IL-1β), interleucina 2 (IL-2), interleucina 4 (IL-4), interleucina 5 (IL-5 ), interleucina 6 (IL-6), interleucina 7 (IL-7), interleucina 8 (IL-8), interleucina (IL-10), interleucina 12 (IL-12), interleucina 13 (IL-13), interleucina 17 (IL-17), factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), granulocitos y macrófagos, factor estimulante de colonias (GM-CSF), proteína quimiotáctica de monocitos 1 (MCP-1) y la proteína inflamatoria de macrófagos 1 (MIP-1β). Factor de crecimiento nervioso se midió con NGF DY256 anticuerpo mediante la adición a la placa de 17-plex con el kit de amina Bio-Plex acoplamiento. </li><li> Para garantizar el análisis de buena calidad, cada medición debe hacerse por duplicado. Las curvas de calibración para cada analito se generan mediante el uso de analitos de referencia suministrados por el fabricante (en concentraciones de 0,20, 0,78, 3,13, 12,5, 50, 200, 800, 3.200 pg / ml, másun nivel cero para la solución salina normal). Las curvas de calibración se incluyen en cada ejecución y concentraciones de la muestra se calculó con el software de Administrador de Bio-Plex. </li><li> La sustancia P y la prostaglandina E2 se midieron usando kits de ELISA altamente sensibilidad. Hemos utilizado Ensayo Designs, Inc. (Ann Arbor, Michigan) para este análisis. Realizar el análisis por duplicado de acuerdo con las especificaciones del fabricante. </li></ul>

<ol><li>Carvalho, B., Clark, D. J., Angst, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+and+Systemic+Release+of+Cytokines%2C+Nerve+Growth+Factor%2C+Prostaglandin+E2%2C+and+Substance+P+in+Incisional+Wounds+and+Serum+Following+Cesarean+Delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pain%22%5BJournal%5D)">Local and Systemic Release of Cytokines, Nerve Growth Factor, Prostaglandin E2, and Substance P in Incisional Wounds and Serum Following Cesarean Delivery.</a> J. Pain. 9, 650-657 (2008).</li>
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</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

Esta metodología esbozada se ha encontrado para ser lo suficientemente sensible como para detectar bioquímicas mediadores inflamatorios y nociceptivos en el exudado de la herida. El muestreo en diferentes puntos de tiempo también nos ha permitido observar los cambios de estos mediadores en el tiempo. 1,2 No tenemos conocimiento de ningún otro ensayo humano herida quirúrgica que en serie puede medir el perfil de liberación de mediadores inflamatorios y nociceptivos en exudado de la herida quirúrgica. Los resul...

Después de una incisión quirúrgica, residente y migración de las células inflamatorias liberan citoquinas pro-y anti-inflamatoria, prostanoides, neuropéptidos y quimiocinas que son importantes para iniciar y mantener el dolor. 3,4 La posibilidad de recopilar específicas del sitio marcadores bioquímicos es crítico para determinar la relación entre los niveles en suero de la herida quirúrgica y, comprender la compleja relación entre la liberación de mediadores y dolor quirúrgico, y para ser capaz de evaluar el efecto de tanto sistémica como la administración del fármaco periférico en la bioquímica de la herida quirúrgica. Los estudios se han centrado en las mediciones sistémicos de mediadores bioquímicos y no han considerado específica del sitio de liberación. 5,6 mediciones séricos de citocinas y quimiocinas no puede ser el reflejo de los eventos locales de heridas quirúrgicas y bioquímicos sólo indican una respuesta sistémica global a la lesión quirúrgica. Este artículo proporciona una descripción visual detallada y única de esta metodología que fue first referencia en 2008 en el Journal of Pain. 1 El objetivo de este artículo JoVE es proporcionar una descripción única y mejorada visualmente de los métodos.

recoger y medir los mediadores bioquímicos exudado de la herida en heridas quirúrgicas

Collecting And Measuring Wound Exudate Biochemical Mediators In Surgical Wounds

Se describe un método por el que somos capaces de recoger y medir bioquímicos mediadores inflamatorios y nociceptivos en el sitio de la herida quirúrgica. Recopilación de sitios específicos marcadores bioquímicos es importante entender la relación entre los niveles en suero y herida quirúrgica, determinar las posibles asociaciones entre la liberación de mediadores, dolor, uso de analgésicos y otros resultados de interés, y evaluar el efecto de la administración sistémica de fármacos y periférico en la herida quirúrgica bioquímica. Esta metodología se ha aplicado a las mujeres sanas sometidas a cesárea electiva con anestesia espinal. Hemos medido exudado de la herida y mediadores de suero en los intervalos de tiempo que las puntuaciones de dolor del paciente y el consumo de analgésicos por hasta 48 horas post-parto por cesárea. Usando esta metodología hemos sido capaces de detectar diferentes mediadores bioquímicos, incluyendo el factor de crecimiento nervioso (NGF), la prostaglandina E2 (PG-E2) sustancia P, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-8,IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, TNFa, INFγ, G-CSF, GM-CSF, MCP-1 y MIP-1β. Los estudios que aplican este bioensayo humana herida quirúrgica no han encontrado correlaciones entre la herida y las concentraciones séricas de citoquinas o su perfil de tiempo de liberación (J Pain 2008;. 9 (7) :650-7) 1 También documentado la utilidad de la técnica de identificar. mediadas por la droga cambios en el contenido herida citoquinas (Anesth Analg 2010; 111:1452-9). 2

Usando esta metodología hemos sido capaces de detectar todos los mediadores bioquímicos descritos anteriormente con la excepción de IL-5 en el exudado de la herida y plasma. 1,2 Algunos citoquinas adicionales no se detectaron en plasma (IL-4, IL-17, TNFa, INFγ , GM-CSF). 1 El curso temporal de citocinas y quimiocinas medidos en los estudios informados fueron consistente, alcanzando una meseta dentro de las primeras horas que se mantuvo durante el período de observación de 24 horas .. 1,2 Sin</...

En este artículo se ofrece una descripción detallada y visual de una metodología para la recogida y medición de mediadores bioquímicos inflamatorios y nociceptivos en el sitio de la herida quirúrgica después de un parto por cesárea. Este bioensayo humano se ha utilizado para determinar las correlaciones entre la herida y las concentraciones séricas de citoquinas y fármaco mediada por los cambios en la herida citoquinas, quimioquinas y neuropetides.

Recoger y medir los mediadores bioquímicos exudado de la herida en heridas quirúrgicas

We describe a methodology by which we are able to collect and measure biochemical inflammatory and nociceptive mediators at the surgical wound site. ...

El sistema antidolor On-Q ha sido desarrollado para la administración precisa de anestésico en el sitio quirúrgico. Pero los investigadores pueden modificar este dispositivo para analizar la secreción de una herida. Para comenzar este análisis, el cirujano inserta el sistema On-Q en la capa subcutánea justo antes del cierre de la herida.Después de asegurar el On-Q a la piel con una tira quirúrgica y cinta adhesiva transparente, el dispositivo se llena con solución salina normal, anestésico local o medicamento de estudio. A continuación, se incorpora a este sistema una llave de paso de tres vías para permitir la aspiración del exudado de la herida en puntos de tiempo específicos en un momento dado. El mililitro de exudado puede aspirarse mediante un proceso de jeringa y almacenarse para su uso futuro o analizarse.Hola, mi nombre es Brendan Cavallo del Departamento de Anestesiología del Centro Médico de la Universidad de Stanford. Hoy te mostraremos un procedimiento para recolectar y medir el exudado de la herida y los mediadores bioquímicos de la herida quirúrgica. Utilizaremos este procedimiento para estudiar los mediadores nociceptivos e inflamatorios específicos del sitio de las heridas quirúrgicas a intervalos de tiempo regulares, según lo especificado por el protocolo del estudio para después del parto por cesárea.Bien, ahora comencemos. El equipo quirúrgico comienza el procedimiento insertando el sistema de alivio del dolor On-Q en la capa subcutánea justo antes del cierre de la herida. A continuación, el on Q se fija a la piel con una tira quirúrgica y un apósito de cinta transparente.El on Q se llena con hasta 100 mililitros de solución salina normal, anestésico local o medicamento de estudio. El sistema administra continuamente solución salina normal o anestésico local por vía subcutánea en la herida a una velocidad de dos mililitros por hora. Este suministro continuo evita que el catéter se coagule y mejora la fiabilidad del sistema para producir muestras de exudado.A continuación, se incorpora a este sistema una llave de paso de tres vías para permitir la aspiración del exudado de la herida en puntos de tiempo especificados en puntos de tiempo especificados por el protocolo. Extraemos un mililitro de exudado de la herida en un recipiente de polietileno que contiene 30 microlitros de inhibidor de la proteinasa. En este caso, recoja el exudado a la una, seis y 24 horas después del parto por cesárea.Al mismo tiempo, los intervalos recogen 10 mililitros de sangre en un tubo de extracción de sangre superior verde que contiene heparina de litio. A continuación, la muestra de sangre se centrifuga a 3000 rpm durante 10 minutos. A continuación, el supinato sérico se añade a 300 microlitros de inhibidor de la proteinasa.El exudado de la herida también se centrifuga y se retira el supinato, la herida y las muestras de suero se colocan en un tubo de microcentrífuga estándar y se almacenan a 20 grados centígrados negativos. Cuando se procesan todas las colecciones, se miden los niveles de mediadores bioquímicos tanto en el suero como en el exudado de la herida. Así que le acabamos de mostrar cómo medir y recopilar mediadores bioquímicos de una herida por cesárea.Pero para el caso, puede aplicar esto a cualquier otra herida quirúrgica. Aunque encontramos esta técnica muy fiable para producir exudado de la herida en aproximadamente el 5% de los pacientes, puede haber cierta dificultad para aspirar el exudado de la herida. Las técnicas que utilizamos para mejorar la situación consisten en cambiar la posición del paciente de sentado a acostado o viceversa.También empujamos suavemente el abdomen y la herida. Se puede utilizar un lavado con suero fisiológico normal de un cc, y en ocasiones tenemos que retirar el catéter de uno a dos centímetros para que podamos producir el exudado de la herida. Así que eso es todo.Gracias por mirar y buena suerte con tus estudios.

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Una técnica para recoger y medir los mediadores bioquímicos de la herida quirúrgica en momentos específicos.

La recogida y medición de mediadores inflamatorios y nociceptivos en las heridas quirúrgicas

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