La angiogénesis en el pulmón de rata isquémico

El objetivo general de este procedimiento es ligar la arteria pulmonar izquierda. Esto se logra primero intubando y ventilando una rata anestesiada. A continuación, se realiza una toracotomía y se liga la arteria pulmonar izquierda.

Después de la ligadura, se cierra el tórax y se permite que la rata se recupere. En última instancia, el grado de neovascularización en el pulmón izquierdo se puede evaluar midiendo el nivel de fluorescencia en el tejido o mediante otros métodos histológicos. La principal ventaja de esta técnica es que brinda la oportunidad de estudiar el desarrollo in vivo y la neovascularización de la circulación bronquial en el pulmón.

Esto proporciona una oportunidad para estudiar la compleja estructura 3D de esta nueva vasculatura en un pulmón ventilado. Ahora bien, esto es muy diferente de lo que hacen actualmente la mayoría de los investigadores que forman la OMS, que realizan estudios in vitro que estudian la proliferación de células endoteliales y la quimiotaxis o formación de tubos. Por lo general, las personas nuevas en este procedimiento tendrán dificultades para tratar de hacer la disección entre la arteria pulmonar izquierda y el bronquio izquierdo.

El único consejo que puedo ofrecer es que practiquen, sean pacientes y vean este video con frecuencia para ver si hay pequeños ajustes en el enfoque quirúrgico. Quien demuestra este procedimiento es John Jenkins, un técnico de mi laboratorio. Para comenzar, coloque una rata anestesiada en una tabla de cirugía y coloque un cono en la nariz para la continuación de la anestesia, intuble al animal con un catéter de plástico y conecte la rata a un ventilador.

Después de aplicar el ungüento en los ojos, coloque la rata en su lado derecho y pegue los apéndices con cinta adhesiva. Retire el vello sobre el área quirúrgica y prepare la piel con exfoliantes repetidos de Betadine y alcohol. Cuando esté listo, haga una incisión transversal a través de la piel.

A continuación, disecciona las capas de grasa y tejido para revelar la caja torácica. Una vez expuesto, identifique el tercer espacio intercostal y use fórceps para hacer una incisión roma entre la tercera y la cuarta costilla. Inserte los separadores de costillas en la abertura y tire de las costillas para abrirlas suavemente hasta que el pulmón sea visible.

Asegure la abertura. Primero, mueva el pulmón izquierdo hacia atrás con la mano derecha. Luego, con pinzas rectas, agarre la arteria pulmonar izquierda y las vías respiratorias con la izquierda.

La arteria pulmonar izquierda debe estar encima de la vía aérea y los fórceps deben estar perpendiculares a la mesa. Una vez alineado, use correctamente pinzas talladas para separar la arteria del bronquio del tronco principal izquierdo en sus bordes naturales. Esta línea de separación parece delgada y blanca entre las dos estructuras individuales.

Teniendo cuidado de no pasar por la embarcación. Deslice las puntas de las pinzas a lo largo de la separación. Continúe de esta manera hasta que la arteria pulmonar izquierda quede en la curva de los fórceps.

Con la mano izquierda, suelte suavemente las pinzas rectas y agarre un trozo de sutura precortada. Abra las pinzas curvas, acunando la arteria lo suficiente como para agarrar la sutura. Tire suavemente de la sutura con un movimiento ascendente en relación con la curva de las pinzas.

Una vez dentro, apriete la sutura para ocluir la arteria pulmonar izquierda y corte cualquier sutura restante mientras las mantiene unidas con fórceps. Sutura las costillas. Teniendo cuidado de no suturar la piel sin apretar.

Haz un nudo cuadrado que luego cerrará las costillas. Hiperinflar el pulmón ocluyendo brevemente la línea espiratoria del ventilador y luego apretar la sutura. Asegure la sutura haciendo otro nudo completo antes de cortar los extremos.

Retire la presión del espirador final y observe durante 30 segundos para asegurarse de que los pulmones no colapsen. Por último, aplica cinco gotas. Bupivacaína, cierre la piel con pegamento para tejidos.

Apague el gas flúor, pero continúe ventilando la rata durante uno o dos minutos al aire libre hasta que la respiración espontánea vuelva a un estado estable. A continuación, desconecte el tubo traqueal del ventilador y asegúrese de que la rata respire espontáneamente antes de retirarlo. Administrar un analgésico local periódicamente durante las próximas 24 horas.

Por último, limpie el ungüento de los ojos y controle al animal hasta que se recupere en el momento deseado. Se pueden inyectar microesferas marcadas en puntos después de la isquemia. Para evaluar la magnitud de la perfusión bronquial, se utiliza una bomba de infusión de pequeño volumen para administrar microesferas marcadas en la arteria carótida izquierda a una velocidad constante.

Conecte el catéter a una aguja roma de calibre 25 y a una llave de paso de cuatro vías. Para comenzar, siga los preparativos quirúrgicos demostrados anteriormente. Cuando esté listo, haga una incisión sobre la línea media a lo largo del cuello romo.

Diseccionar el tejido para revelar la tráquea y la arteria carótida izquierda. Una vez aisladas las dos suturas debajo de la arteria carótida, ate firmemente la sutura proximal. A continuación, haga una pequeña incisión en la arteria e inserte un catéter lleno de solución salina.

Asegúrelo en su lugar con la sutura aguas arriba. Este molde vascular proporciona una visualización notable de la angiogénesis bronquial en el pulmón. 28 días después de la ligadura de la arteria pary izquierda, se muestra una sección de la vía aérea del pulmón izquierdo tres días después de la activación.

Observe los dos vasos bronquiales prominentes llenos de glóbulos rojos ubicados dentro de la pared de las vías respiratorias. El recuadro se tiñe para mostrar la proliferación de células endoteliales de la arteria bronquial. Este ejemplo muestra una sección del pulmón izquierdo tomada 14 días después de la ligadura.

Obsérvese el aumento del tamaño de los vasos bronquiales en este momento y la fluorescencia de la arteria pulmonar marchita utilizada para evaluar la magnitud de la perfusión sistémica prácticamente no se detectó en el pulmón izquierdo de las ratas naïve. Sin embargo, se midió un nivel sustancial, significativo y consistente en el pulmón izquierdo de ratas. Se estudia 14 días después de la ligadura una vez dominada.

Esta técnica se puede realizar en menos de una hora si se realiza correctamente. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo intubar la rata, realizar la toracotomía y ligar con éxito la arteria pulmonar. Dependiendo de la variable de resultado, debería poder canular la arteria carótida izquierda e infundir microesferas marcadas para el análisis de perfusión.