Teléfono directo Análisis de Ciclo de Drosophila Los tejidos que usan la acústica Attune Centrándose citómetro y Vybrant DyeCycle ADN Violet Stain

El objetivo general de este procedimiento es medir la fase relativa del ciclo celular y el tamaño celular de los tejidos con poblaciones celulares manipuladas genéticamente y marcadas con GFP o RFP en Drosophila. En primer lugar, establecer cruces genéticos para generar células que contengan progenie marcadas con las proteínas fluorescentes deseadas y con las manipulaciones genéticas deseadas en un tejido o población específica de células. Bajo estudio, aísle limpiamente el tejido deseado de la progenie de la etapa de desarrollo adecuada, luego disocie el tejido a una suspensión de una sola célula y tiña con un tinte de ADN viable para medir el contenido de ADN.

Analice las muestras disociadas teñidas mediante citometría de flujo. En última instancia, los resultados in vivo miden los cambios en el tamaño de las células y la fase del ciclo celular causados por las manipulaciones genéticas en estudio. La principal ventaja de esta técnica sobre el método existente de citometría de flujo en tejidos vivos de Drosophila que utiliza colorantes ultravioleta es que el ciclo de tinte violeta es compatible con citómetros de sobremesa menos costosos que contienen un láser violeta 4 0 5, que se puede comprar con un presupuesto pequeño y mantener en una sola escala de laboratorio.