Name: Intubación endotraqueal en ratones Vía La laringoscopia directa utilizando un otoscopio (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 58 s
Description: Aprende a realizar intubación endotraqueal en ratones mediante laringoscopia directa con otoscopio. Esta técnica atraumática permite mediciones repetidas en experimentos crónicos de fisiología respiratoria.

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Una Beca Mérito del Departamento de Asuntos de Veteranos y una subvención T32-HL098062 del NHLBI de los Institutos Nacionales de Salud apoya este trabajo. Queremos reconocer y agradecer el asesoramiento de Randolph H. Hasting, MD, Ph.D. y el asesoramiento y apoyo de la Unidad de Medicina Veterinaria de la VA Healthcare System San Diego.

1. Preparación de los animales <ol><li> Obtener los ratones que tienen más de 8 semanas y más de 20 g (ratones más pequeños pueden ser intubados por un experto). </li><li> Anestesia <ol><li> Inyectar ratones con 20 mg / kg, cada uno, de ketamina y xilazina por vía intraperitoneal como una preanestésica. (Esta dosis es insuficiente para anestesiar completamente el ratón, sino que facilita la transferencia, después de la intubación, la ventilación mecánica.) Sin embargo, el ajuste de las dosis puede ser necesario de acuerdo a la respuesta anestésica en consulta con el veterinario institucional.) </li><li> Inducir la anestesia en los ratones con 3,5% de isoflurano / oxígeno en una cámara de inducción de 90 a 120 seg. </li><li> Observe la frecuencia respiratoria con cuidado. Se debe reducir la velocidad progresivamente a no menos de 45 latidos por minuto. </li></ol></li></ol> 2. Preparación para la intubación <ol><li> Retire el ratón desde la cámara de inducción y pescuezo con fuerza. </li><li> Utilice unas pinzas finas acolchadas para gentLY extender la lengua de la boca. </li><li> Mantenga la extensión de la lengua mediante la celebración de la lengua entre los dos dedos y aplicando fuerza suave. </li><li> Tire del ratón hacia arriba sobre el espéculo del otoscopio con un movimiento vertical. </li><li> Mire a través del ocular del otoscopio mientras Scruffing firmemente y tire del ratón hacia arriba suavemente por la lengua y el pescuezo. </li><li> Busque cuidadosamente las cuerdas vocales. Ellos deben ser fácilmente visible en este momento. El aditus laryngis (la estructura de la abertura laríngea) debería ser relativamente blanco. No debe haber movimiento de las cuerdas con cada respiración. Si las cuerdas no se mueven o están mal visualizadas, gire ligeramente el animal y hiperextender suavemente el cuello. </li><li> Con la mano dominante, sostenga el 20 G, 1 en el catéter, con una longitud de 1 cm de la tubería PE10 se extiende a través de la punta del catéter, como un lápiz y la inserta en el lado del espéculo. La tubería de PE sirve como un estilete o candelilla. </li><li> Dirigir el tubi PE10ng (estilete) a través de las cuerdas vocales y avanzar el catéter de 20 G (sonda endotraqueal) en la tubería de PE hasta que el centro es a nivel del incisivo inferior. Eliminar este estilete rápidamente. </li><li> Saque con cuidado el animal fuera del espéculo y verificar la ubicación del tubo colocando al animal en un ventilador mecánico con 2% de isoflurano continua para mantener la anestesia general en todo el experimento. Visualice el aire expirado (burbujas) de pasar por una trampa de PEEP para confirmar la intubación. Aunque la intubación esofágica puede dar lugar a algunas burbujas, no será tan pronunciada o como consistente con la intubación endotraqueal. También, observar un trazado de presión de las vías respiratorias en caso de desviaciones negativas (Figura 1). Estos confirmar la colocación correcta del tubo. Como alternativa, coloque una pequeña cantidad de agua en el tubo de intravenosa, y conéctelo al tubo endotraqueal. Verificación de circulación hacia y desde el ratón con la respiración 2. En el caso de intubación esofágica, la prastreo resión revelará presiones significativamente más altos y no hay desviaciones negativas. Aunque tidal final de CO2 sería de gran ayuda, técnicamente esto sería muy difícil dado el pequeño volumen corriente (~ 200 l) y el equipo para hacer esto sería muy caro. Las técnicas simples descritas son totalmente suficiente y mucho menos caro. Si la anestesia isoflurano no está disponible, todos los procedimientos pueden llevarse a cabo usando ketamina 80-120 mg / kg en combinación con xilazina 10-20 mg / kg para la anestesia general. </li></ol> 3. Técnica alternativa: Laringoscopia directa con la Técnica otoscopio es fácilmente utilizados para otros fines, principalmente para la instilación directa de Sustancias de estudio en el pulmón. <ol><li> Inducir la anestesia en los animales con isoflurano solo para este procedimiento en 3.5% durante 90-120 segundos en la cámara de inducción. </li><li> Scruff el animal fuertemente en la base del cráneo y extender la lengua suavementecon unas pinzas finas. </li><li> La celebración de la lengua suavemente, tire el animal hacia arriba en el espéculo (sin modificar), hasta que el animal no se puede elevar aún más. </li><li> Las cuerdas vocales se pueden visualizar más a menudo por esta técnica por sí sola, pero giran el animal y la hiper-extendido el cuello para ponerlas en vista completa. </li><li> Avanzar en una pipeta de carga de gel que contiene el instilado a la glotis e inculcar el fluido. Debido a que el espéculo hace un sello con la hipofaringe el ratón aspirar cualquier líquido residual que no pasa por las cuerdas. Esto se comprueba fácilmente por el rhonchorous suena el ratón ahora hace cuando la respiración hasta que el líquido se distribuye completamente en los pulmones. </li><li> Como alternativa, conecte la tubería PE10 a una jeringa de 0,5 ml que contiene 50 l de fluido con un bolo de aire detrás del líquido. Avanzar el tubo de PE con cuidado a través de las cuerdas vocales de 0,5 cm y descargar el contenido en las vías respiratorias lentamente. Sin embargo, el trauma de vez en cuando a las vías respiratorias inferiores se produce ucantar esta técnica sin una mejor entrega de la muestra. </li></ol>

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</ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.

En este informe se describe una técnica sencilla y fiable para intubar ratones que es no traumática y puede ser utilizado en varias ocasiones en el mismo animal. Esta técnica se puede lograr con un simple laboratorio o equipos médicos que se pueden comprar por una suma modesta. La técnica de la laringoscopia directa, originalmente reportado por Hastings y colegas 4, también se puede utilizar para una variedad de propósitos, pero principalmente para entregar con precisión sustancias de ensayo en el tracto resp...

El ratón de laboratorio ha suplantado a prácticamente todas las especies de mamíferos como el modelo principal de la biología y la biopatología. El ratón de laboratorio es la especie de mamífero más pequeño que se ha demostrado de forma clara y extensamente para ser de valor como modelo de enfermedades humanas y ha demostrado ser invaluable en los avances de nuestra comprensión de la biología humana y las enfermedades. El tiempo de gestación corto y sustancialmente menor costo ha permitido el desarrollo y estudio de ratones nulos y transgénicos como una herramienta común en la investigación biomédica. Sin embargo, el tamaño del ratón de laboratorio media (20-25 g) ha limitado su estudio en los estudios basados ​​fisiológicamente o quirúrgicamente y, en consecuencia, algunos investigadores estudian las especies de mamíferos más grandes. Un impedimento para el uso de ratones en estos estudios es la dificultad encontrada con técnicas de intubación que permitan mediciones fisiológicas o procedimientos quirúrgicos extensos bajo anestesia profunda. Traqueotomía 1 se ha utilizado como un estándar TEchnique lugar de intubación debido a la mayor facilidad de realización de esta técnica y habilidad modesta requerido. Sin embargo, la traqueostomía no es propicio para los estudios de cirugía crónicas o de recuperación; Por lo tanto, se limita a experimentos agudos. Traqueotomía también puede ser una variable de confusión en la investigación en las que la inflamación o los reflejos fisiológicos sensibles son importantes. Nuestro laboratorio ha probado la mayoría de las técnicas descritas por otros investigadores y los encontró inadecuada para una variedad de razones. La traqueotomía es demasiado traumático y provoca sangrado y la inflamación de las vías respiratorias. Mucho más problemático es que no se puede repetir factible. Muchas técnicas relativamente no invasivas que requieren una modesta inversión en equipos no son suficientemente fiables. Otras técnicas requieren equipos costosos que es difícil de justificar, sin saber si el equipo va a trabajar en una aplicación específica. Por lo tanto, tratamos de desarrollar una técnica no traumática que requiere no más tHan una modesta inversión en equipos especializados, podría llevarse a cabo de forma rápida y fiable, se podría repetir en modelos crónicos, y podría ser utilizado en un gran número de animales. Aquí mostramos una técnica de este tipo.

<table><tbody><tr><td>Cabezal de otoscopio de operación</td><td>Welch Allyn</td><td>21700</td><td>$188.98</td></tr><tr><td>Mango de otoscopio</td><td>Welch Allyn</td><td>71000</td><td>$112.20</td></tr><tr><td>Espéculo Reutilizable</td><td>Welch Allyn</td><td>22002</td><td>$3.98</td></tr><tr><td>Pinza Fina</td><td>Miltex</td><td>18-779</td><td>$107.18</td></tr><tr><td>Soporte de abrazadera pequeño para sujetar el otoscopio</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vaporizador de isoflurano (circuito múltiple con manejo de gases residuales al vacío)</td><td>Summit Medical</td><td></td><td>$3,000</td></tr><tr><td>Flexivent (Ventilador para animales)</td><td>SCIREQ</td><td></td><td>$35,000</td></tr><tr><td>Catéter intravenoso (20 G, 1 pulgada)</td><td>BD</td><td>381233</td><td>$9.62</td></tr><tr><td>Tubo de polietileno (PE10) (0.011 en diámetro interior, 0.024 pulgadas en diámetro exterior) 100 pies</td><td>Intramedic, Clay-Adams</td><td>427401</td><td>$115.70</td></tr><tr><td>Ketamina 100 mg/ml (10 botella de ml)</td><td>Butler</td><td>23061</td><td>$10.00</td></tr><tr><td>Xilacina (botella de 100 ml)</td><td>Vedco</td><td>24105</td><td>$20.00</td></tr><tr><td>Isoflurano (botella de 250 ml)</td><td></td><td></td><td>$15.00</td></tr><tr><td>Bromuro de vecuronio 10 mg/10 ml</td><td>Pfizer</td><td>NDC 0069-0094-01</td><td>$15.00</td></tr></tbody></table>

intubación endotraqueal en ratones<em&gt; vía</em&gt; la laringoscopia directa utilizando un otoscopio

Endotracheal Intubation in Mice via Direct Laryngoscopy Using an Otoscope

Los ratones, tanto de tipo salvaje y transgénicos, son el modelo de mamíferos principal en la investigación biomédica en la actualidad. La intubación y la ventilación mecánica son necesarios para los experimentos con animales enteros que requieren cirugía bajo anestesia profunda o mediciones de la función pulmonar. La traqueotomía ha sido el estándar para la intubación de la vía aérea en estos ratones para permitir la ventilación mecánica. Intubación orotraqueal se ha informado, pero no ha sido utilizado con éxito en muchos estudios debido a la dificultad técnica sustancial o un requisito para un equipo altamente especializado y caro. Aquí mostramos una técnica de laringoscopia directa utilizando un otoscopio equipado con un espéculo 2,0 mm y el uso de un catéter intravenoso 20 G como un tubo endotraqueal. Hemos utilizado esta técnica extensamente y fiable que intubar y llevar a cabo una evaluación precisa de la función pulmonar en los ratones. Esta técnica ha demostrado ser seguro, esencialmente sin pérdida de animales en manos experimentadas. Por otra parte, esta técnicapuede ser utilizado para estudios repetidos de ratones en modelos crónicos.

La intubación con la técnica anterior es fiable y rápido. La colocación apropiada del tubo endotraqueal es más fácilmente verificado por la observación de burbujeo del gas espirado desde la rama de expiración sumergida de la del circuito del ventilador (por lo general en una trampa de PEEP) y desviaciones negativos en una presión de la vía aérea rastreo (Figura 1). Las desviaciones negativas en el seguimiento de la presión de las vías respiratorias son las más fiables. Otros han utilizado el movimiento ...

Hemos desarrollado un método simple, fiable, y relativamente barato para la intubación endotraqueal en ratones a través de la laringoscopia directa utilizando un otoscopio con un espéculo 2,0 mm. Esta técnica es atraumática y se puede utilizar para mediciones repetidas en experimentos crónicos. Nos resulta superior a la traqueotomía o previamente informó técnicas no quirúrgicas.

Intubación endotraqueal en ratones<em&gt; Vía</em&gt; La laringoscopia directa utilizando un otoscopio

Mice, both wildtype and transgenic, are the principal mammalian model in biomedical research currently. Intubation and mechanical ventilation are ...

El objetivo general de este procedimiento es intubar de forma confiable a los ratones por vía oral. Esto se logra primero posicionando cuidadosamente al animal anestesiado en la orientación adecuada. Luego, con el espéculo del otoscopio, se visualizan las cuerdas vocales y se introduce el tubo endotraqueal en la garganta utilizando un estilete.A continuación, se coloca al ratón intubado en un ventilador para verificar la colocación adecuada del tubo. Alternativamente, se puede utilizar el otoscopio para administrar sustancias de prueba al pulmón. Finalmente, se pueden medir relaciones precisas de presión y volumen en el pulmón.Las principales ventajas de esta técnica frente a métodos existentes como la traqueostomía son que es rápida, no causa sangrado, no provoca trauma y puede repetirse. La demostración visual de esta técnica es fundamental, ya que los pasos de la intubación son difíciles de aprender y las instrucciones escritas tienen poca utilidad sin la visualización simultánea de la anatomía y la mecánica de la intubación. Para realizar una intubación endotraqueal utilizando un otoscopio, primero sujete por la nuca a un ratón anestesiado de ocho semanas de edad y luego use pinzas finas acolchadas para extender suavemente la lengua fuera de la boca.Mantenga la extensión sosteniendo la lengua entre las pinzas y aplicando una fuerza suave, luego levante al ratón hacia el espéculo del otoscopio con un movimiento vertical. Mire a través del ocular del otoscopio mientras continúa sujetando firmemente la nuca del animal y tire suavemente del ratón hacia la longitud completa del espéculo del otoscopio mediante la lengua y la nuca. Observe cuidadosamente las cuerdas vocales, que deberían ser fácilmente visibles y moverse con cada respiración, así como la estructura de la abertura laríngea.Las UTA laríngeas deben presentar un aspecto relativamente blanco. Si las cuerdas no se mueven o se visualizan deficientemente, gire ligeramente al animal e hiperextienda suavemente el cuello. Luego, con la mano dominante, tome un catéter de calibre 20 y una pulgada de longitud, equipado con un tramo de un centímetro de tubo PE 10 que sobresale por la punta del catéter, y sosténgalo como si fuera un lápiz.Luego inserte el catéter en el lateral del espéculo. Dirija el tubo de PE 10 a través de las cuerdas vocales y avance el catéter sobre el tubo hasta que el conector esté al nivel del incisivo inferior. A continuación, retire el tubo rápidamente.A continuación, transfiera suavemente al animal del espéculo a un ventilador mecánico y verifique la ubicación del tubo visualizando las burbujas de aire espirado que pasan a través de la trampa de PEEP. Observe un trazado de la presión de la vía aérea en busca de deflexiones negativas para confirmar la colocación adecuada del tubo. En caso de intubación esofágica, el trazado de presión mostrará presiones significativamente más altas y ausencia de deflexiones negativas.Alternativamente, coloque una pequeña cantidad de agua en un trozo de tubo IV y conecte el tubo al tubo de intubación, verificando el movimiento hacia dentro y hacia fuera del ratón con la respiración. Un uso alternativo del método del otoscopio consiste en administrar sustancias de prueba al ratón. Utilice el espéculo para insertar una pipeta de carga de gel hasta las cuerdas vocales e instile hasta 50 microlitros del tratamiento de interés.El ratón aspirará el líquido a través de los cordones, verificado por el oído. Se escucharán sonidos respiratorios hasta que el líquido se distribuya completamente en los pulmones. Después de administrar el tratamiento, retire suavemente la pipeta y coloque al ratón sobre una almohadilla calefactora.Alternativamente, coloque al animal dentro de una jaula que esté sobre una mesa calefactora con control de temperatura. Cuando el animal se haya recuperado completamente, devuélvalo a su jaula. La intubación mediante el otoscopio es confiable y rápida.En este trazado representativo de la presión de la vía aérea, la línea azul refleja la presión de la vía aérea y la línea roja refleja el trazado del volumen corriente en el ratón inmediatamente después de la intubación. Las desviaciones negativas hacia abajo en la curva de presión indican la generación de presión intratorácica negativa en el ratón mediante esfuerzo respiratorio espontáneo y una colocación adecuada del tubo endotraqueal. Para esta curva representativa de presión-volumen, el ratón fue intubado con un catéter intravenoso de calibre 20, como se acaba de demostrar, paralizado con pancuronio y ventilado mecánicamente.Las curvas ilustran que el catéter no presenta fugas hasta una presión de 30 centímetros de agua y, por lo tanto, puede utilizarse para realizar mediciones precisas de las relaciones presión-volumen en el ratón. En esta figura, se muestra una curva representativa de respuesta a la dosis. En este experimento, el animal control presentó una respuesta mínima a la metacolina hasta 25 miligramos por mililitro, mientras que el ratón inmunizado y desafiado con albúmina mostró hiperrreactividad al tratamiento.Las mediciones se realizaron con ratones intubados con un catéter de calibre 20, como se acaba de demostrar, y fueron indistinguibles de las realizadas en ratones con traqueostomía mediante laringoscopia directa. La administración cuantitativa al pulmón es tanto más confiable como más uniforme. Por ejemplo, como se ilustra en esta imagen, la técnica de instalación directa puede utilizarse para administrar con precisión antígeno al tracto respiratorio inferior en un modelo de inflamación alérgica.Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo usar un otoscopio para realizar una intubación laringoscópica directa en un ratón.

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Investigación

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Medicina

Mediciones repetidas de la fisiología respiratoria y el muestreo de roedores de las células de las vías respiratorias inflamatorias son deseables, pero en general no es factible. A continuación se describe un método reproducible para la intubación por vía oral ratones que permite mediciones repetidas de la hiperreactividad de las vías respiratorias y el muestreo de las células de las vías respiratorias inflamatorias.

A reversible, método no invasivo para las mediciones de resistencia de las vías y Toma de Muestras Líquido del Lavado broncoalveolar en ratones

Este artículo describe un método striaghforward y eficiente de intubación de ratones para las mediciones de la función pulmonar o la instilación pulmonar, que permite a los ratones para recuperar y se estudió en tiempos posteriores. El procedimiento consiste en una fuente de luz de fibra óptica de bajo costo que ilumina directamente la tráquea.

Un sencillo método de intubación ratón de pulmón

El uso de un modelo que imita el estado de las enfermedades pulmonares en los seres humanos es crítico para el estudio de la fisiopatología y / o la etiología de una enfermedad en particular y para el desarrollo de la intervención terapéutica. Aquí un método intubación endotraqueal no invasivo que puede entregar directamente materiales exógenos a los pulmones del ratón se presenta.

No Invasiva Intratraqueal Intubación para Estudiar la Patología y Fisiología de pulmón de ratón

En este artículo se presenta un método rápido y sencillo para la administración de bleomicina directamente en la tráquea ratón a través de la intubación. Las principales ventajas de este método son que es altamente reproducible, fácil de dominar, y no requiere equipo especializado ni largos tiempos de recuperación.

Un método mejorado para la rápida intubación de la tráquea en ratones

Intubación endotraqueal en los conejos es desafiante debido a su inusual anatomía. Aquí presentamos una técnica para la intubación de la tráquea con un catéter de polipropileno como guía directa. Este método utiliza materiales relativamente baratos, requiere una formación mínima y puede realizarse fácilmente en cualquier entorno clínico.

Intubación endotraqueal de conejos usando un catéter guía polipropileno

El objetivo de este artículo es describir un método refinado de intubación del ratón de laboratorio. El método no es invasivo y, por lo tanto, ideal para estudios que requieren monitorización en serie de la función respiratoria y/o inscripción de tratamientos en el pulmón.

Intubación orotraqueal repetida en ratones

Un modelo quirúrgico de ratón para crear una lesión por isquemia de reperfusión (RI) del pulmón izquierdo mientras se mantiene la ventilación y se evita la hipoxia.

Un modelo de ratón de intubación orotraqueal y cirugía de reperfusión de isquemia pulmonar ventilada

Aquí, proponemos un protocolo para la administración de lipopolisacáridos intratraqueales (LPS) a través de la intubación endotraqueal orofaríngea no invasiva. Este método minimiza el trauma del procedimiento quirúrgico para el animal y administra LPS con precisión a la tráquea y luego a los pulmones.

Instilación intratraqueal no invasiva de lipopolisacáridos en ratones

Este protocolo describe un enfoque de laringoscopia transoral seriada para ratones y ratas que permite obtener imágenes de video de cerca y sin obstrucciones de la laringe durante la respiración y la deglución utilizando un régimen anestésico optimizado y técnicas de manipulación endoscópica finamente ajustadas.

Laringoscopia murina mínimamente invasiva para obtener imágenes de cerca del movimiento laríngeo durante la respiración y la deglución

Aquí presentamos un procedimiento estandarizado para la intubación endotraqueal a través de traqueotomía seguida de toracotomía en ratas, destinado a mejorar la precisión y la reproducibilidad de las aplicaciones de no supervivencia que requieren ventilación invasiva y exposición de órganos torácicos en modelos de ratas in vivo .

Intubación endotraqueal mediante traqueotomía y posterior toracotomía en ratas para aplicaciones no relacionadas con la supervivencia

Este protocolo presenta cómo la posición óptima de un ratón y la inserción de un otoscopio basado en una cámara por vía transoral permite la visualización de la glotis, una intubación rápida con un traumatismo tisular mínimo y un suministro constante de líquido a los pulmones.

Metodología mejorada para la administración de líquido al pulmón de ratón: intubación mediante un otoscopio de consumo

Aprende a realizar intubación endotraqueal en ratones mediante laringoscopia directa con otoscopio. Esta técnica atraumática permite mediciones repetidas en experimentos crónicos de fisiología respiratoria.

Intubación endotraqueal en ratones

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