Name: El uso del Dispositivo de Evaluación Dolor Orofacial operante (OPAD) para medir los cambios en el comportamiento nociceptivo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-06-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 20 s
Description: Aprenda a medir comportamientos antinociceptivos en roedores con el dispositivo OPAD. Este sistema operante evalúa respuestas voluntarias al dolor orofacial mediante condicionamiento y análisis de frecuencia de lamidas.

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Instituto Nacional sobre el Abuso de Drogas, NIH 5R44DA026220-03

Aquí el uso de la OPAD (Stoelting Co., Wood Dale, IL) se describe en términos generales para un experimento de ejemplo usando la capsaicina. El operador tiene la libertad para programar numerosos experimentos con muchas opciones y modelos de dolor, sin embargo. Por ejemplo, la administración de analgésicos reducen medidas nociceptivo 6,3,4,5,7 y otros modelos de dolor como producto lesión por constricción crónica y la inflamación aumenta las conductas nociceptivas 3,9. Estos modelos se pueden adaptar fácilmente con el siguiente protocolo. Para todos los experimentos, se utilizaron ratas maleSprague-Dawley (250-300 g, Charles River, Raleigh, NC). Estos se encuentran en pares en 22 ° C de temperatura y 31% de humedad controlados habitaciones con un ciclo normal de luz / oscuridad de 12 h (06 a.m.-6 p.m. luces) y tuvieron libre acceso a los alimentos y el agua, excepto cuando ayunas. Sesiones de comportamiento se realizaron durante la fase de luz. Estas instalaciones fueron AAALAC acreditado y se aprobaron todos los procedimientos by la Universidad de Florida IACUC. 1.Formación y Base Sesiones <ol><li> Comida rápida roedores la noche antes de cada sesión OPAD (ej. 15 + / - 1 hora para este experimento). </li><li> Roedores primero deben ser entrenados hasta que se observa un comportamiento coherente a temperaturas no aversivos (por ejemplo 33-37 ° C). Por lo general, alrededor de seis sesiones (tres veces por semana durante dos semanas) es suficiente para capacitar a los ratones o ratas a lamer unos 600-1000 o 2000 veces por sesión, respectivamente. </li></ol> 2. Pretest Preparación y Tratamiento de capsaicina <ol><li> Roedores sin pelo son los mejores para todos los procedimientos operantes, si esto no es posible, deben roedores tienen su pelo facial (pelo bucal solamente y no almohadilla de vibrisas / bigotes ya que esto tiene un efecto en la navegación de un roedor) eliminó 1-2 días antes de la prueba para la precisa la grabación del comportamiento. </li><li> Actos pelo bucales como aislante de temperatura y hace calor y el frío menos nociceptivo. Para eliminar el vello, anestesiar ratas,añadir pomada para los ojos, afeitarse el vello la mejilla con tijeras, aplique crema de depilación, esperar 2-4 minutos, luego lavar con agua. Ver Neubert et al. 3 para la metodología completo. </li><li> En el día de la prueba, anestesiar al animal (por ejemplo, 1 a 2,5% por inhalación isoflurano) y colocar ungüento veterinario opthalamic en ambos ojos para evitar que se sequen y para mantener ningún tipo de tratamientos con fármacos tópicos entre en el ojo. </li><li> Aplicar crema de capsaicina (0,1%) bilateralmente en las mejillas expuestas con un hisopo de algodón estéril. Espere 5 min. Limpie la crema con gasas empapadas en agua tibia (aproximadamente a 40 ° C). Limpie las mejillas de descuento con un algodón empapado en alcohol y establecer un temporizador de 30 min. </li><li> Permita el tiempo suficiente roedores recuperarse de la anestesia antes de volver a la jaula. Esperar hasta que se pueda levantar la cabeza en una postura esternal con el fin de evitar la aspiración de ropa de cama de la jaula. </li></ol> 3. Programación del Sistema OPAD de Protocolos y Experimentos <ol><li> La clave de la innovación of el sistema OPAD a las pruebas de comportamiento es el software orofacial, un sistema impulsado por CUALQUIER-laberinto (Stoelting Co., Wood Dale, IL) que permite al usuario programar y crear nuevos experimentos. </li><li> Se proporciona un ejemplo general de cómo programar un sencillo experimento a continuación, pero muchas más opciones para los protocolos de ajuste de temperatura y modelos de dolor que la capsaicina disponibles. </li><li> Los experimentos pueden ser diseñados y guardar en cualquier punto. Encienda OPADs y el software libre. Encienda el ruido blanco para el control de ruido ambiental. En &quot;Archivo&quot;, seleccione nuevo experimento. Bajo el subtítulo &quot;Protocolo&quot; el nombre del protocolo y seleccionar si desea ser cegado. </li><li> En &quot;jaulas orelleno&quot;, seleccione &quot;New jaula OPAD&quot; y luego &quot;Añadir todas las jaulas orelleno conectados.&quot; En &quot;Salidas&quot; selectos &quot;Temperature Controllers&quot; y luego &quot;elemento térmico&quot;. Ajustar la temperatura de inicio (por ejemplo, un neutro 33-37 ° C). </li><li> Si es necesario, ajustar la temperatura de rampa en &quot;ciclo de temperatura OPAD.&quot; Con el fin de cambiar la temperatura de punto muertocaliente para ajustes hacen frío aquí. </li><li> Para el &quot;1&quot;, &quot;Ajuste de temperatura hasta (° C)&quot; = 45 &quot;, la duración de rampa&quot; = 30 seg, y &quot;Permanecer en valor para&quot; = 3 min. Para el &quot;2&quot;, 33, 30 seg, y 3 min. Para el &quot;3&quot;, 7, 60 segundos y 3 minutos. Para el &quot;4&quot;, 33, 60 segundos y 3 minutos. Marque la casilla &quot;Después del siguiente período de tiempo:&quot; y seleccione 3 min. </li><li> En &quot;Fields&quot; agregue cualquier nota adicional acerca de los temas. Por ejemplo, crea un área de identificación de los animales mediante la opción &quot;Nuevo Campo&quot; y cambie el nombre a &quot;Identificación Animal.&quot; A continuación, seleccione &quot;Animales&quot;, &quot;texto&quot;, y &quot;Use este campo como la identificación de los animales.&quot; </li><li> En &quot;Stage&quot;, la OPAD creará automáticamente una &quot;primera etapa.&quot; Establecer la duración del período de prueba y el nombre de la etapa, si es necesario. Para esta sesión de rampa, ajuste esta a 18 min. </li><li> Una nota sobre las etapas: en la mayoría de los experimentos, las sesiones de comportamiento no deben durar más de 10 a 20 min. Después de eso, los roedores están saciados. Para los experimentos durante varios días, las etapas adicionales se pueden agregar para cada día para hacer el análisis de datos más simple. </li&gt; <li> En la sección &quot;Cálculos&quot; seleccionar &quot;Nuevo cálculo&quot; y el nombre &quot;L / F&quot; para lamer / cara ratio. En la sección titulada &quot;Entre el cálculo en el área por debajo de&quot; ajustar a decir &quot;Lick: número de activaciones / Contacto: número de activaciones&quot;. </li><li> Para crear períodos de tiempo para un análisis de datos más sencillo seleccionar &quot;Análisis&quot; y &quot;Nuevo período de tiempo&quot;. Nombre un &quot;33 ° C&quot; y seleccione la casilla &quot;Este período es el mismo en todas las etapas&quot; For &quot;Empieza en:&quot; escriba 0 y &quot;Termina en:&quot; poner 3 min. </li><li> Repita el paso anterior para cada período de tiempo. Nombre: &quot;Rampa 33-45 ° C.&quot; Empieza en: 3 min. Acaba en: 3.5 min. &quot;45 ° C&quot;, 3,5 min, 6,5 min. &quot;Rampa 45-33 ° C&quot;, 6,5 min, 7 min. &quot;33 ° C&quot;, 7 min, 10 min. &quot;Rampa 33-7 ° C&quot;, 10 min, 11 min. &quot;7 ° C&quot;, 11 min, 14 min. &quot;Rampa 7-33 ° C&quot;, 14 min, 15 min. &quot;33 ° C&quot;, 15 min, 18 min. </li><li> Guardar y el nombre del protocolo. Nota: Los protocolos guardados se pueden volver a utilizar en los nuevos experimentos. </li></ol> 4. Ejecución del ensayo <ol><li> Prepare una habitación temezcla recompensa mperature y colocar en botellas orelleno. Una relación de agua 02:01: leche condensada azucarada funciona bien a pesar de soluciones de sacarosa o sacarina también se pueden usar. </li><li> Coloque la bandeja líquida captura, jaula de plexiglás, y suelos de rejilla de metal en la máquina OPAD. Conecte el cableado a la jaula. </li><li> Coloque la botella recompensa en pie y ajustar lo que el pico se puede llegar por el roedor. Inicialmente, la botella se puede colocar más hacia atrás en la jaula a continuación retirado para producir contactos mejor faciales. </li><li> Cargue el experimento en el software OPAD. Sume el número de animales sometidos a prueba. Bajo el subtítulo &quot;Experimento&quot; añadir un &quot;Título&quot; y luego añadir los grupos de tratamiento (capsaicina y control). Añadir el número de animales en cada grupo. </li><li> Bajo el subtítulo &quot;Pruebas&quot;, seleccione &quot;Tratamientos de animales y datos&quot;. Añadir la carta del tratamiento (A, B, C, etc) y la identificación de los animales. Las cajas deben tener ahora la identificación de los animales designados en sus pantallas. </li><li> Pulse el botón en el cuadro de OPAD. Esta voluntadajustar los termodos a la temperatura adecuada. Cuando se apaga la luz naranja, colocar los roedores dentro y pulse el botón de nuevo. Para este experimento, las ratas se comenzaron 30 minutos después de la crema de capsaicina fue borrado. </li><li> La luz verde se encenderá. Ajustar la distancia de la botella es de la caja para que la rata debe hacer contacto con los termodos en su bucal, no Vibrisas, de región a ser capaz de lamer. El ajuste adecuado se traducirá en una caja roja sólida para lamer por encima de una caja de color naranja indica los contactos. </li><li> La colocación correcta de la botella recompensa es de vital importancia para el ensayo. Si la botella está demasiado cerca de la rata o bien se lame sin hacer un contacto o de tocar su nariz a la botella de recompensa por lo que muchos licks aparecerán como una sola (indicado por un cuadro rojo destaca por licks en lugar de una caja sólida). </li><li> Una vez que la sesión de evaluación es el OPAD alertará al experimentador con un tono. Volver al roedor a su jaula. Si otro roedor se va a probar después, el cuadro se indicaTE su ID de animal. Repetir los pasos 4.5 a 4.7, según sea necesario hasta que el experimento es completa. </li></ol> 5. Analizar, gráficos, y análisis estadístico de los datos con el software OPAD <ol><li> Bajo el subtítulo &quot;Resultados&quot;, seleccione si desea ver un texto, gráfico o informe de análisis estadístico. </li><li> En el cuadro de &quot;Graph informe de configuración&quot;, seleccione la variable a estudiar. Por ejemplo, en &quot;Los resultados de cálculo&quot;, marque la casilla de &quot;L / F&quot;. </li><li> Especifique &quot;En el show del eje x&quot; como &quot;período de tiempo&quot; y &quot;Mostrar diferentes series de&quot; como &quot;tratamiento&quot;. Seleccione &quot;Ver el informe&quot;. Guardar, imprimir, copiar o enviar por correo electrónico el informe se puede hacer en este momento. Ciertos puntos de datos pueden ser excluidos en la caja debajo de la agrupación paso si es necesario. </li><li> Bajo el subtítulo &quot;Datos&quot; es un listado ajustable de los datos en bruto de la experiencia en forma de hoja de cálculo, si es necesario. Nota: todos los datos se guarda y se puede manipular y analizar en un momento posterior. </li></ol> 6. Limpiar <ol><li> Apague la máquina y retire el cableado jaula. Lave y desinfecte la chimenea, caja, botella, y la bandeja de líquido. Estos componentes se pueden lavar a mano o en el lavaplatos. </li></ol>

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<li>Taha, S. A., Katsuura, Y., Noorvash, D., Seroussi, A., Fields, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convergent%2C+not+serial%2C+striatal+and+pallidal+circuits+regulate+opioid-induced+food+intake%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Convergent, not serial, striatal and pallidal circuits regulate opioid-induced food intake.</a> Neuroscience. 161, 718-733 (2009).</li>
</ol>

Richard Mills y Chris Lloyd son empleados de Stoelting Co. La producción y el libre acceso a este artículo es patrocinado por Stoelting Co.

El sistema OPAD es una herramienta fácil de usar, ensayo de alto rendimiento capaz de detectar cambios en la percepción del dolor en roedores. La naturaleza de alto rendimiento de este sistema significa que numerosos animales pueden ser probados en un solo día por una sola persona. Esto se debe a que el sistema de software OPAD ya que permite un máximo de 16 cajas que se ejecutan simultáneamente en un solo equipo. Esto significa que después de que el tiempo de configuración inicial, aproximadamente 48 carreras operantes (en 18 min por ciclo) pueden llevarse a cabo de una hora, aún más si el tiempo de la sesión se establece en menos tiempo por etapa. Esto permite que para las pruebas de dolor en cientos de animales un día. Esta cantidad de pruebas no sería práctico con los ensayos de dolor más tradicionales. De acuerdo con nuestro trabajo anterior, el comportamiento de roedores se altera en condiciones dolorosas. Durante los períodos no nocivos roedores suelen tener largos períodos de consumo en el que mantener el contacto con los termodos. Durante aversivo 45 ° C o 7 ° C condiciones, laroedores tienen episodios mucho más cortos, ya que no pueden mantener contacto durante largos períodos de tiempo. Por lo tanto el lamer / relación de cara (número de lame dividido por el número de contactos faciales dentro de una sesión) altera con el dolor. La capsaicina aumenta la sensibilidad para calentar el dolor como lo demuestra una relación L / F más baja en los roedores tratados frente a no tratados en la 45 ° C de temperatura. Los analgésicos pueden regresar esta relación lamer / frente a niveles similares a condiciones no dolorosas 3. A pesar de las condiciones de dolor que se producen fácilmente en la piel (como la aplicación de la crema de capsaicina) son los métodos más sencillos de detectar el dolor en este ensayo, los modelos animales de dolor profundo tejido neural más clínicamente relevante, como la neuralgia del trigémino también pueden alterar el comportamiento en ensayos orofaciales operantes 9 . En conjunto, estos datos apoyan la evidencia de que OPAD es sensible a las alteraciones en calor y dolor frío, los umbrales de dolor, y los agentes químicos nocivos como la capsaicina, además de la operantecapacidad dolor orofacial de ensayo para detectar numerosas otras condiciones de dolor y analgesia 6,3,8,17,10,5,12,18,11,9. El sistema del OPAD del dolor de medida es un método clínicamente más relevante, significativa y humana de detectar el dolor de las medidas de reflejo de base. Estas medidas tradicionales de la nocicepción, como la retirada de la pata con los filamentos de von Frey 19 y el ensayo de retirada de la cola 20 se han utilizado durante más de un siglo, pero sólo medir la respuesta a un estímulo experimentador-infligida. El animal tiene poco control y la &quot;nocicepción&quot; se localiza principalmente a la médula espinal. Para los seres humanos, la experiencia subjetiva del dolor también es importante ya que las personas se les pide simplemente para informar de sus niveles subjetivas de dolor. La capacidad de los animales a la libre reportar su dolor en los procedimientos basados ​​en operante sería un gran avance para la investigación del dolor básica 1. Con el OPAD, los animales se les da la opción de si para responder durante apainful estímulo o no. Si es demasiado doloroso, animales simplemente reducir sus intentos de llegar a la recompensa y así limitar su exposición al dolor. Se trata de un ensayo mucho más humano y menos estresante en comparación con muchas de las medidas reflejo de base en el que los animales suelen restringir sus movimientos y no tienen ningún control sobre la cantidad de estímulos dolorosos a los que están expuestos. La necesidad de escapar del dolor es una unidad inherente a todos los animales y la OPAD incorpora este comportamiento en lugar de compensar por ella como otros ensayos nociceptivo. El movimiento de alejamiento de las medidas de reflejo sobre el dolor en tareas operantes se está volviendo más común en el campo. Otros grupos han utilizado medidas no-reflex de base como el examen de duración comida 21,22,23 y térmicas dolor calor paradigmas de escape 24 (Para una revisión de otras medidas de dolor le sugerimos nuestra primera referencia 1). La OPAD es capaz de combinar elementos de estos en una medida unificada, la relación Lick / cara, quich examina la ingesta de alimentos y la necesidad de escapar de los estímulos dolorosos. Otra ventaja es que este ensayo es capaz de medir el dolor durante largos períodos de tiempo (1-2 meses) sin perder sensibilidad 7,9. Debido a sus ventajas con respecto a las pruebas de reflejos basado en este ensayo sea menos estresante y más humano se adapta bien a la medición de los cambios a largo plazo en el comportamiento nociceptivo en roedores. Mide el dolor operante a menudo dan resultados diferentes en comparación con las medidas de reflejo de base en materia de efectos de las dosis de opioides y los umbrales de dolor. Mientras que las altas dosis de opioides se utilizan típicamente para medidas reflejo basadas en 25 varios estudios indican que se necesitan dosis más bajas para las respuestas en ensayos operantes 26,27,28. Las dosis altas de drogas también podrían interferir con las medidas operantes pero son detectables con la OPAD 6. Otros estudios también han demostrado que los umbrales para escapar de un estímulo doloroso son diferentes para operante versus medidas reflex basados ​​29,2,30 sugieren una gran diferencia entre la percepción de un animal de dolor en comparación con la velocidad de sus reflejos espinales. A beneficio de la OPAD es que el roedor puede elegir si desea o no realizar la tarea, esto permite que el roedor para expresar escape o comportamiento de evitación. Este comportamiento complejo requiere hacer para controlar la cantidad de la nocicepción el roedor se siente 14,29,15,30 decisión cortical. Mientras que las conductas de escape y evitación pueden interferir con las medidas basadas en reflejos estas conductas de dolor son un componente integral de la OPAD. Las diferencias en los umbrales de dolor y las dosis más bajas de opioides necesarios para los ensayos de operantes sugieren una mayor sensibilidad al dolor y analgesia que refleja las medidas tradicionales basados ​​en. Aunque el OPAD puede medir el dolor más directamente que los ensayos tradicionales, varias condiciones experimentales y medicamentos podría tener un efecto adverso en este ensayo y debe ser controlada para. Modificacións en la motivación apetitiva pueden alterar el comportamiento de este ensayo. Esto podría ser reflejada por una diferencia en la propia 31 recompensa o por la motivación para la recompensa 6. Se debe tener cuidado para asegurar que la motivación de los animales para la recompensa es constante como muchos fármacos pueden interferir con la motivación. Por ejemplo, altas dosis de morfina y otros opioides pueden causar hiperfagia para sustancias grasas, dulces 32 que alterarán de responder en el ensayo operante orofacial 6. Si bien esto sugiere que este operante paradigma basado en la recompensa de un conflicto tiene implicaciones más amplias en las que figure el campo de la ansiedad y la adicción (es decir, cambiar los aspectos gratificantes de la presencia de un estímulo doloroso dado) es importante para el control de las alteraciones apetito durante el dolor sesiones de prueba. Estas alteraciones en la motivación no aparecen en estas dosis más bajas clínicamente relevantes pero los efectos analgésicos se mantienen intactos 3. Una forma de control para este posible confundir es para asegurar la dosis de la droga dada no aumenta el comportamiento a una temperatura neutra (33-37 ° C). Prueba de un fármaco frente a un grupo sin fines de drogas a una temperatura de punto muerto debe ser el primer paso antes de agregar un componente de dolor. Además, dado que varias sesiones de línea de base son posibles dentro de una sesión de prueba utilizando el OPAD estas cuestiones pueden ser detectados y se pueden controlar por dentro de una única sesión de comportamiento. A medida que el programa de ayuno puede alterar la motivación en este ensayo es importante para mantener esta constante. Por lo general hacemos una noche de ayuno, pero otros horarios son posibles. Por ejemplo, se ha experimentado con un corto ayuno diario de 6 horas antes (resultados no publicados). Esto permite probar al día en lugar de cada dos días. Además, las ratas unfasted también han respondido bien en el ensayo 9. Lo técnicas de ayuno se utiliza es principalmente importante mantenerlo constante a través de las pruebas para el control de los factores de motivación. <p class=&gt; &quot;Jove_content&quot; En conclusión, la OPAD es una herramienta fácil de usar ensayo operante que mide el dolor a un nivel mucho más similar a la condición humana que los ensayos de dolor tradicionales. La característica clave de este sistema es la integración de los parámetros experimentales y protocolos, adquisición de datos y análisis / medidas de resultado utilizando un sistema controlado por software. Esto proporcionará una gran cantidad de opciones controladas por el usuario y los parámetros para recopilar y analizar numerosas medidas de resultado en una forma de alto rendimiento. Esto contrasta con los sistemas de pruebas de dolor comúnmente utilizados (por ejemplo, retirada de la cola, filamentos de von Frey) que no son ni por software ni de alto rendimiento. El sistema basado en software proporciona un avance significativo de cómo están diseñados los estudios de comportamiento y la forma en que se recogen los datos y se analizaron y un aumento en el uso de este ensayo permitirá la investigación básica dolor para ser más clínicamente traducible en el futuro. Se espera que este sistema tenga un impacto significativo en Advancing futuras investigaciones relacionadas con el dolor, porque estos estudios conductuales operantes pueden proporcionar el vínculo necesario para la comprensión de la influencia de las estructuras de orden superior en el comportamiento global del dolor.

Crónica, el dolor no controlado sigue siendo un importante problema de salud pública y la novela tratamientos analgésicos no suelen traducir del laboratorio al paciente. Esta falta de éxito se debe en parte a la utilización de ensayos de comportamiento ineficientes en medidas basadas en reflejos de dolor que no necesariamente o completamente modelar la condición de dolor humano 1,2, y específicamente, la falta de un sistema fiable, de alto rendimiento, comercialmente disponibles , ensayo de evaluación del dolor in vivo, tanto para ratas y ratones, en. Presentamos aquí un alto rendimiento, fácil de usar la versión de nuestro ensayo basado en la nocicepción operante. Este nuevo sistema se basa en nuestra anterior operante ensayo de dolor orofacial que se ha demostrado ser sensible a la detección de diferentes modalidades de dolor, como el calor, el frío, y mecánica 3,4,5. A partir de estas medidas, se ha estudiado una amplia variedad de campos, incluyendo analgésicos 6,3,4,5,7, condiciones de dolor como la inflamación, hiperalgesia y alodinia <shasta&gt; 3,8, la neuralgia del trigémino 9, y periférico nociceptivo modulación a través de los canales TRP con la capsaicina, resiniferatoxina, mentol, y icillin 8,10,5,11. Los efectos psicológicos como modulación del dolor 12 y el efecto placebo 13 ansiedad inducida también se han demostrado con pruebas operante orofacial lo que sugiere que puede ser apropiado para la medición de la experiencia completa de dolor y no simplemente la nocicepción. El dispositivo Evaluación del dolor orofacial (EAOP) utiliza un ensayo de recompensa / conflicto que permite un roedor para elegir entre la recepción de una recompensa de refuerzo o escapar de un estímulo aversivo controlando de este modo la cantidad de dolor que se siente durante una sesión de 14,15. Los roedores son entrenados primero para presionar por sus rostros en termodos temperatura controlada con el fin de tener acceso a una botella de alimentos que contienen una recompensa líquido. Después de la formación, la temperatura de estímulo puede ser calentado o enfriado y diferencias en recorrespondiente puede indicar el nivel de la nocicepción o analgesia percibe el animal. La OPAD también es capaz de cambios bruscos de temperatura que permite pruebas de referencia y la evaluación del dolor a temperaturas frías y calientes en una sola sesión de evaluación. Aquí se presenta un protocolo simple que destaca la capacidad de la OPAD para detectar cambios en el dolor causado por el calor, el frío y el TRPV1 agonista capsaicina 16. La capsaicina se utiliza a continuación como agente sensibilizante térmica, ya que tiene varios beneficios para este ensayo, ya que es perjudicial no-tejido y se ha demostrado previamente para inducir la alodinia facial y la hiperalgesia en modelos de roedores 8. Vamos a demostrar cómo el software OPAD puede obtener rápidamente, analizar, graficar y realizar análisis estadísticos sobre los datos de comportamiento de roedores.

<table><tbody><tr><td>Leche condensada azucarada</td><td>Borden</td><td>5272910108</td><td></td></tr><tr><td>Capzasin-HP 0,1 %</td><td>Chattem, Inc.</td><td>0032648-02</td><td></td></tr><tr><td>Alcohol isopropílico</td><td>CVS</td><td>5042826245</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Piramal Healthcare</td><td>66794-013-25</td><td></td></tr><tr><td>Ungüento oftálmico veterinario</td><td>Dechra</td><td>17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>Loción depilatoria</td><td>Church and Dwight Co., Inc</td><td>NRLBB-22339-04</td><td></td></tr><tr><td>Sistema OPAD</td><td><a href="https://www.stoeltingco.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Stoelting</a></td><td>67500</td><td></td></tr><tr><td>Jaulas OPAD adicionales</td><td><a href="https://www.stoeltingco.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Stoelting</a></td><td>67501</td><td></td></tr><tr><td>Cilindro granulado</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-34512-11</td><td></td></tr><tr><td>Toallas de papel</td><td>ANY</td><td>ANY</td><td></td></tr><tr><td>Aplicadores con punta de algodón</td><td>Fisher</td><td>23-400-101</td><td></td></tr><tr><td>Vaporizador Fluotec 4</td><td>Ohmeda</td><td>39711</td><td></td></tr><tr><td>Afeitadora para pelo</td><td>Oster</td><td>78005-010</td><td></td></tr></tbody></table>

el uso del dispositivo de evaluación dolor orofacial operante (opad) para medir los cambios en el comportamiento nociceptivo

Use of the Operant Orofacial Pain Assessment Device (OPAD) to Measure Changes in Nociceptive Behavior

Se presenta un sistema operante para la detección de dolor en despiertos, roedores conscientes. El dispositivo Evaluación del dolor orofacial (EAOP) evalúa los comportamientos de dolor de una manera más clínicamente relevante al no depender de las medidas de reflejo de base de la nocicepción. Comida ayunó, roedores sin pelo (o rebajado) se colocan en una cámara de plexiglás que tiene dos termodos Peltier basados ​​en que pueden ser programadas a cualquier temperatura entre 7 ° C y 60 ° C. El roedor está capacitado para hacer contacto con estos con el fin de acceder a una botella de recompensa. Durante una sesión, una serie de resultados de dolor de comportamiento se graba y se guarda automáticamente. Estas medidas incluyen el número de activaciones de botellas de recompensa (lame) y los estímulos faciales de contacto (contactos cara), pero las medidas de encargo como el lamer / relación de la cara (número total de lame por sesión / número total de contactos), también se puede crear. La temperatura estímulo puede ser ajustado a una temperatura única o múltiples temperaturas dentro de una sesión. La OPADes un alto rendimiento, fácil de usar ensayo operante lo que conducirá a una mejor traducción de la investigación del dolor en el futuro, ya que incluye la entrada cortical en lugar de confiar en la columna vertebral ensayos nociceptivo reflejo de base.

Los resultados típicos se ilustran por el comportamiento de un solo roedor en la OPAD en las figuras 1A-D. El número de lame es alto para todos los segmentos de la sesión en el neutro 33 ° C de temperatura, pero baja para los aversivos (45 ° C y 7 ° C) como se ilustra en la Figura 1A. Como muestra la Figura 1B demuestra, largos períodos de contacto se realizan a 33 ° C, como es típico de temperaturas estímulos no nociceptivos. La duración disminuye y aumenta el número de contactos durante períodos en los que las temperaturas son dolorosas. Figura 1C es un diagrama del protocolo de la rampa, el OPAD fue programado para usar para todas las sesiones de prueba. Figura 1D muestra la cantidad total de recompensa ingerido a través del tiempo en gramos . Del mismo modo que el número de lame, los animales prefieren las temperaturas neutras más de los dolorosos. El lama / relación nominal (L / F) para la sesión de línea de base se calculó mediante la OPAD y se ilustra enFigura 1E. Esta proporción es mucho más alta durante los tres no dolorosa 33 ° C sesiones (20-46 lame por contacto facial) que en las sesiones dolorosas de 45 ° C (3 lame por contacto facial) y 7 ° C (1 lamida por contacto facial ). A Medidas repetidas ANOVA One-Way fue significativa (F (4,52) = 6,2182, p &lt;0,001) para un efecto de la temperatura sobre la relación L / F. Prueba de Bonferroni fueron significativas cuando se comparan 33 ° C vs 7 ° C (p &lt;0,05), 45 ° C vs 33 ° C (2) (p &lt;0,01), y 33 ° C (2) frente a 7 ° C ( p &lt;0,01). N = 16 para todas las temperaturas. En la Figura 1F los roedores tratados con capsaicina (N = 8) no fueron significativamente diferentes de las ratas ingenuas (N = 8) en cualquiera de los neutro 33 ° C de temperatura. La capsaicina roedores tratados tenía una relación L / F significativamente inferior a 45 º C (prueba de la t, t (13) = 2,9350, p = 0,012). El grupo de la capsaicina tenía mayor L / F ratios a 7 ° C, pero esto no fue significativo. <p class="jove_content" fo:keep-together.within-page = &quot;always&quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/50336/50336fig1.jpg" alt="Figura 1" fo:content-width="3.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50336/50336fig1highres.jpg"/> Figura 1. Nocicepción medición con la OPAD. El comportamiento de una sola de roedores en la OPAD se representa por A) número de lame, B) Contactos, C) de temperatura del thermode durante la sesión, y D) la ingesta de recompensa en gramos. E) El lamen / la cara proporción es alta durante los tres no dolorosa 33 ° C sesiones y es significativamente menor en las sesiones dolorosas de 45 ° C y 7 ° C (medidas repetidas ANOVA de una vía, F (4,52) = 6,2182, p &lt;0,001, prueba de Bonferroni 33 ° C vs 7 ° C (p &lt;0,05, #), 45 ° C vs 33 ° C (2) (p &lt;0.01, **), y 33 ° C (2) vs 7 ° C (p &lt;0,01, # #). F) capsaicina roedores tratados tenían una relación L / F significativamente inferior a 45 º C (prueba de la t, t (13) = 2,9350, p = 0,012, *), pero enninguna de las temperaturas neutras. N = 16 para 1E y N = 8 de capsaicina y N = 8 para ingenuos para 1F. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50336/50336fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver más grande la figura</a> .

Se presenta un sistema operante fácil de usar y de alto rendimiento para la evaluación de los comportamientos de dolor en roedores despierto, consciente. El Dispositivo de Evaluación del Dolor Orofacial (OPAD) puede evaluar el dolor a través de un paradigma de recompensa / conflicto proporcionando así una forma más humana de las pruebas. Este protocolo dará más datos clínicos relevantes y de la traducción de los roedores.

El uso del Dispositivo de Evaluación Dolor Orofacial operante (OPAD) para medir los cambios en el comportamiento nociceptivo

We present an operant  system for the detection of pain in awake, conscious rodents. The Orofacial  Pain Assessment Device (OPAD) assesses pain behaviors ...

El objetivo general de este procedimiento es medir los comportamientos antinociceptivos en roedores mediante el uso del dispositivo operante o de evaluación facial del dolor. Esto se logra primero entrenando a los roedores en el OAD durante varias sesiones hasta obtener líneas de base estables. La siguiente etapa del procedimiento consiste en eliminar el vello dorsal del roedor y someterlo a ayuno el día anterior al experimento.A continuación, se realizan mediciones basales a temperaturas normales y dolorosas en las barras variables de temperatura abiertas que estimulan la dermis facial. Si el roedor desea obtener la recompensa. La etapa final consiste en introducir un estímulo doloroso o analgésico en las mismas condiciones y medir las frecuencias de contacto lamido.Por ejemplo, la capsaicina reduce la frecuencia de lamidos en condiciones de dolor. En última instancia, los resultados pueden mostrar alteraciones en los comportamientos relacionados con el dolor mediante el análisis de la frecuencia de lamidos dentro del total de contactos. La principal ventaja de esta técnica frente a métodos existentes como el ensayo de retirada de la pata, el test de von Frey o el ensayo de sacudida de la cola, es que, en lugar de utilizar medidas reflejas de la nocicepción, el dispositivo de evaluación del dolor orofacial, u oped, emplea un ensayo operante de conflicto con recompensa. La noche anterior a una sesión de entrenamiento con el oped.Los roedores no deben tener ningún alimento para comer durante esta demostración. El tiempo de ayuno es de 15 horas, más o menos una hora. Primero, los roedores deben entrenarse para exhibir un comportamiento constante a temperaturas no aversivas.Esto lleva aproximadamente seis sesiones, a un ritmo de tres sesiones por semana. Los ratones pueden lamer entre 600 y mil veces por sesión, mientras que las ratas pueden lamer hasta 2000 veces por sesión.Esta demostración muestra cómo programar un experimento sencillo utilizando el software Orofacial. Ofrece muchos otros protocolos de aumento de temperatura y modelos de dolor disponibles. Además, el diseño se puede guardar en cualquier estado de finalización.Después de encender los pads op y abrir el software, active el ruido blanco para controlar el ruido ambiental. A continuación, en Archivo, seleccione un nuevo experimento. Luego, en el subapartado protocolo, elija un nombre para el protocolo y seleccione si debe ser ciego o no.Bajo el menú de jaulas OPED, seleccione nueva jaula OPED y luego agregue todas las jaulas OPED conectadas. En salidas, seleccione controladores de temperatura. Luego, el elemento térmico, ajuste la temperatura inicial a una temperatura neutra si es necesario, y ajuste las temperaturas de rampa en la pestaña ciclo de temperatura OPED para cambiar la temperatura de neutra a caliente y luego a fría.Realice simplemente los ajustes aquí. Para el paso uno, establezca la temperatura en 45 grados Celsius. Establezca la duración de la rampa en 30 segundos y mantenga esa temperatura durante tres minutos.Para el paso dos, configure los ajustes en 33 grados, 30 segundos y tres minutos. Para el paso tres, establezca la temperatura en siete grados, la rampa, 60 segundos y el tiempo de permanencia. Tres minutos.Realice el paso cuatro, de forma similar al paso dos, pero con una rampa 62. Luego, marque la casilla para después del siguiente período de tiempo y establezca ese valor en tres minutos. Ahora, en la pestaña de campos, agregue cualquier nota adicional necesaria sobre los sujetos.Por ejemplo, cree un área para el ID del animal seleccionando un nuevo campo y cambiando el nombre a identificación del animal. Luego, elija la pestaña animales, después texto, y utilice este campo como la identificación del animal en la sección de la pestaña de etapa. El OPPA establece automáticamente una primera etapa; asígnele un nombre y defina la duración del período de prueba.La sesión conductual no debería durar más de 10 a 20 minutos, ya que después de ese tiempo, las filas se sienten saciadas. Además, cuando se realizan experimentos durante varios días, se pueden añadir etapas adicionales para facilitar el análisis de los datos.A continuación, en la sección de cálculos, seleccione un nuevo cálculo y asígnele el nombre L sobre F para representar la relación entre L y el contacto. En la sección etiquetada, ingrese el cálculo en el área inferior. Ajústelo para que muestre Número de activaciones de L sobre contacto.Número de activaciones para crear períodos de tiempo para un análisis de datos más sencillo, seleccione análisis y nuevo período de tiempo. Asigne el nombre 1 a 33 grados C y seleccione la casilla para que este período sea igual en todas las etapas. En el campo comienza en, ingrese cero.Y para el campo NZ, ponga tres minutos. Repita ahora este proceso de etiquetado para cada período de tiempo. Finalmente, guarde y asigne un nombre al protocolo.Ahora puede utilizarse para nuevos experimentos porque el cabello es un aislante, y los roedores sin pelo son los mejores para todos los procedimientos operantes. De lo contrario, uno o dos días antes de que se prueben los animales, retire únicamente el vello facial bucal, dejando los bigotes para hacer esto. Primero anestesie el roedor.A continuación, afeite el vello de la mejilla con una máquina cortapelos. Una vez recortado el vello, aplique una pomada ocular seguida de una crema depilatoria y espere unos minutos. Luego, lave con agua la crema depilatoria y el vello.En el día de la prueba, anestesie al animal con, por ejemplo, inhalación de isoflurano al 3%. A continuación, aplique una pomada oftálmica grasa en ambos ojos. Posteriormente, evite que los tratamientos tópicos con fármacos entren en contacto con los ojos.Ahora aplique una crema de capsaicina al 0,1 % bilateralmente sobre las mejillas expuestas con un hisopo estéril y espere cinco minutos. Mientras tanto, empape algunas compresas de gasa en agua tibia a 40 grados Celsius. Después de cinco minutos, retire la crema con las compresas húmedas, seguido de un hisopo con alcohol.Ahora devuelva el roedor a su jaula y configure un temporizador durante 30 minutos. Primero, prepare una mezcla de recompensa a temperatura ambiente compuesta por una parte de leche condensada azucarada y dos partes de agua. Cargue la mezcla en las botellas oped.En segundo lugar, coloque la bandeja recolectora de líquidos, la jaula de plexiglás y la rejilla metálica del piso sobre la máquina oped. Una vez que se haya montado esto, conecte los cables para unir la jaula al resto del sistema oped. Coloque una botella de recompensa sobre el soporte, con su boquilla al alcance del roedor.Inicialmente, coloque la botella un poco más adentro para que pueda retirarse si se necesitan mejores contactos. Ahora, cargue el experimento en el software. Ingrese los animales que se están probando bajo el subtítulo.Experimento con un título, y luego agregue los grupos de tratamiento, como capsaicina y control. A continuación, ingrese el número de animales en cada grupo. Bajo el subtítulo pruebas, seleccione tratamientos a los animales y datos.Agregue la letra del tratamiento y el id del animal. Ahora, las cajas deben tener el ID de animal designado en sus pantallas. A continuación, presione el botón de la caja para ajustar el termotermo a la temperatura adecuada.Cuando la luz se vuelva verde, coloque un roedor en el interior. Para este experimento, se inicia con las ratas 30 minutos después de que se retiró la crema de capsaicina. Ahora presione el botón nuevamente y la luz naranja se encenderá.Ajuste la distancia. La botella debe estar a una distancia del cajón que permita lamerla. La rata debe hacer contacto con el termo en su región bucal, no en la región vibrisal.Un ajuste adecuado dará como resultado un cuadro rojo sólido para lamido por encima de un cuadro naranja con contorno para contactos. Un cuadro rojo con contorno indica un problema. Una vez finalizada la sesión de prueba, el oped alertará al experimentador con un tono.Ahora devuelva el roedor a su jaula. Si se va a probar otro roedor, el cuadro indicará su ID de animal y repetirá el procedimiento. Muchas ratas pueden evaluarse simultáneamente en la plataforma de op. En un protocolo, se pueden ejecutar simultáneamente hasta 16 cajas. Por lo tanto, se pueden probar entre 40 y 80 ratas por hora. Cuando el experimento haya finalizado, apague la máquina y retire los cables de la jaula manualmente o lave y sane la botella grande y la bandeja de líquido en lavadora.En el software oped, hay herramientas disponibles para el análisis de datos. Bajo el subtítulo Resultados, seleccione si desea ver un gráfico de texto o un informe de análisis estadístico.En el cuadro de configuración del informe gráfico, seleccione una variable para examinar. Por ejemplo, bajo los resultados del cálculo, marque la casilla L sobre F. Ahora especifique en el campo Mostrar en el eje X el período de tiempo y en el campo Mostrar series diferentes el tratamiento.Luego, seleccione ver el informe. En este momento, se puede guardar, imprimir, copiar o enviar por correo electrónico el informe. Algunos puntos de datos pueden excluirse en el cuadro debajo del paso de agrupación si es necesario.Si es necesario. Los datos brutos en forma de hoja de cálculo están disponibles en el subapartado de datos. El OPED fue programado para un protocolo de incremento progresivo para las sesiones de prueba.El análisis de una única sesión de prueba en roedores muestra que el número de lamidos es alto en cada segmento de la sesión a la temperatura neutra, pero bajo a las temperaturas aversivas. Como era de esperar, se producen largos periodos de contacto a las temperaturas neutras. Esas duraciones disminuyen y el número de contactos aumenta durante los periodos en los que las temperaturas son dolorosas.La cantidad total de recompensa ingerida es similar al número de lamidos. Los animales prefieren alimentarse a temperaturas neutras en lugar de a temperaturas dolorosas. La relación lamidos a cara durante la sesión basal se calculó mediante el OPPA para todos los animales sin tapones; como aplicación, esta relación es mucho más alta durante las tres sesiones no dolorosas que en las sesiones dolorosas.Las pruebas unidireccionales, Inova y Bonferroni respaldan la significancia. En un día posterior, el grupo se dividió entonces en roedores tratados con capsaicina y roedores ingenuos.Ocho en cada grupo a temperaturas neutras. Los grupos no presentaron un comportamiento significativamente diferente. Los roedores con capase y tratados tuvieron una proporción LTA F significativamente menor a 45 grados Celsius y una proporción LTA F ligeramente mayor, aunque no significativa, a siete.Una vez dominada, esta técnica puede realizarse en cientos de animales en un solo día utilizando varias cajas ePad. Esto permite pruebas de dolor de alto rendimiento para condiciones nociceptivas o analgésicas si se realiza adecuadamente.

use-operant-orofacial-pain-assessment-device-opad-to-measure-changes

Research

Investigación

JoVE Journal

Behavior

Comportamiento

Difuso de control inhibitorio nocivos, sumación temporal y prueba de hiperalgesia herida se demuestra en la paciente obstétrica. Estas pruebas evalúan los mecanismos inhibitorios y excitatorios de procesamiento del dolor y aquí utilizados para evaluar la analgesia endógena en diferentes puntos de tiempo durante el embarazo y el período periparto para ayudar a revelar el riesgo individual s para el dolor persistente.

Un paradigma experimental para la predicción del dolor post-operatorio (PPOP)

Este video muestra la inducción de dolor neuropático orofacial en un modelo de rata mediante la ligadura del nervio infraorbitario. Esto da como resultado daño a los nervios e inflamación, causando una señalización de dolor anormal e imitando las condiciones de dolor crónico, que se pueden usar para estudiar el ensayo de dolor orofacial.

Inducción de dolor neuropático orofacial en un modelo de rata a través de ligaduras de nervios infraorbitarios

Un alargamiento en duración de la comida representa comportamiento nociceptivo orofacial en roedores similares al comportamiento de guarda de seres humanos con dolor orofacial. Comer es un comportamiento que no requiere entrenamiento ni manipulación animal, requiere participación cortical y no compite con otros comportamientos inducidos experimentalmente, distinguiendo este ensayo de mediciones alternativas de reflejos u operandos.

Duración de la comida como medida de las respuestas nociceptivas orofaciales en roedores

Se describe un protocolo para examinar el desarrollo de la hiperalgesia y la tolerancia en ratones inducida por opioides. Sobre la base de la medición de las respuestas nociceptivas térmicas y mecánicas de los animales no tratados previamente y tratados con morfina, que permite cuantificar el aumento en la sensibilidad al dolor (hiperalgesia) y disminuir en la analgesia (tolerancia) asociada con la administración de opiáceos crónica.

Evaluación de la hiperalgesia inducida por la morfina y analgésicos Tolerancia en ratones utilizando térmicas y mecánicas Modalidades nociceptivos

Este manuscrito describe un modelo de roedor para estudiar el dolor neuropático del trigémino. Los métodos descritos incluyen procedimientos quirúrgicos para realizar una lesión crónica por constricción del nervio infraorbitario de la rata y las pruebas conductuales postquirúrgicas para medir los cambios en el comportamiento espontáneo y evocado que son indicativos de dolor persistente y alodinia.

Lesión crónica constricción del nervio infraorbitario de la Rata (Ion-CCI) para el Estudio del trigémino Dolor Neuropático

Evaluación del dolor en pacientes anestesiados, que no se puede comunicar con el mundo exterior en alguna forma sigue siendo desafiante a pesar del desarrollo de instrumentos de evaluación de dolor objetivo innovador. En este proyecto, el reflejo de dilatación pupilar y el reflejo de flexión de la nocicepción se evalúan en pacientes adultos críticamente enfermos, ventilación mecánica.

Evaluación objetiva nociceptiva en pacientes de la UCI ventilados: un estudio de viabilidad usando pupilometría y el reflejo de flexión nociceptiva

El ensayo mecánico de evitación de conflictos se utiliza como una lectura no reflexiva de la sensibilidad al dolor en ratones que se puede utilizar para comprender mejor las respuestas afectivo-motivacionales en una variedad de modelos de dolor de ratón.

Ensayo mecánico de evitación de conflictos para medir el comportamiento del dolor en ratones

Este protocolo describe la evaluación de la hipersensibilidad mecánica en un modelo de rata de dolor orofacial neuropático utilizando un dispositivo de evaluación del dolor orofacial basado en operantes.

Evaluación de la hipersensibilidad mecánica inducida por lesión nerviosa en ratas mediante un ensayo de dolor operante orofacial

Este protocolo describe cómo la medición de la fuerza de mordida y el umbral de retirada de la cabeza puede capturar el comportamiento del dolor en el dolor de la articulación temporomandibular (ATM) inflamatorio inducido por el adyuvante completo de Freund (CFA).

Medición del dolor en la articulación temporomandibular mediante ensayos de fuerza de mordida y filamentos de von Frey en ratones

El protocolo describe cómo medir la hiperalgesia de rodilla en ratones. Mostramos ejemplos en modelos murinos de dolor agudo de rodilla, así como en modelos de osteoartritis (OA).

Evaluación de la hiperalgesia de rodilla en ratones mediante la medición de la aplicación de presión

Aprenda a medir comportamientos antinociceptivos en roedores con el dispositivo OPAD. Este sistema operante evalúa respuestas voluntarias al dolor orofacial mediante condicionamiento y análisis de frecuencia de lamidas.

El uso del Dispositivo de Evaluación Dolor Orofacial operante (OPAD) para medir los cambios en el comportamiento nociceptivo

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