Trasplante en la cámara anterior del ojo para Longitudinal, no invasiva En vivo Imagen con una sola célula de resolución en tiempo real

Hola, soy Doretta, del Instituto de Investigación de la Diabetes de la Facultad de Medicina Miller de la Universidad de Miami. En este video demostraré cómo trasplantar ojales pancreáticos en la cámara interior del ojo del ratón. El procedimiento consta de dos pasos.

El primer paso es cargar los ojales pancreáticos aislados en la cánula, y el segundo paso es el procedimiento de trasplante propiamente dicho. Para obtener más información sobre la instrumentación y los reactivos, consulte el texto adjunto. Destacamos aquí, el atornillador de jeringas motorizado con la jeringa montada y los accesorios de depósito y cánula, en los que nos centraremos en el siguiente vídeo.

Comenzamos cargando los ojales en la cánula. Todos los procedimientos se realizan bajo el estereoscopio. Comience centrando los ojales girando o girando el plato en círculos.

Cuando esté centrado, desconecte la cánula del depósito y elimine las burbujas de aire impulsando el controlador de jeringa motorizado hacia adelante. Y eso se hace pisando el pedal delantero. Cuando esté listo, comience a aspirar los ojales en el depósito conduciendo el controlador de jeringa motorizado en la dirección hacia atrás.

Y de nuevo, eso se hace pisando el pedal hacia atrás. Observa cómo los ojales tienden a acumularse en el fondo del depósito. A continuación, vuelva a conectar la cánula al depósito y expulse los ojales fuera del depósito.

A continuación, introduzca el tubo en la cánula para desalojar los ojales del depósito y animarlos a permanecer empaquetados en el tubo. Golpee el depósito mientras conduce el controlador de jeringa motorizado hacia adelante. Observe qué tan apretados están los ojales en el tubo cuando comienzan a ingresar por la parte posterior de la cánula.

A estas alturas, deberías estar listo para trasplantar los ojales. Coloque el ratón del tamaño NS en una almohadilla y exponga o reviente el ojo que se va a trasplantar tirando de la piel de la cabeza con el dedo índice y el pulgar. Usando una aguja nueva como bisturí.

Acérquese al ojo con el extremo biselado hacia abajo para evitar el contacto y las lesiones del iris. Penetre la punta de la aguja en la córnea y haga una incisión lateral. A continuación, introduzca la cánula, precargada con párpados, en la cámara interior a través de la incisión, y comience a infundir los ojales en la cámara nuevamente impulsando el controlador de jeringa motorizado hacia adelante.

No se preocupe por las burbujas de aire que puedan quedar atrapadas dentro de la cánula, ya que se disiparán más tarde. Y actuarán como una barrera natural para minimizar o prevenir el reflujo de los párpados fuera de la cámara. Retire lenta y cuidadosamente la cánula fuera de la cámara interior.

Ahora lave el ojo con PBS estéril. Inyecte su analgésico preferido y, finalmente, aplique una pomada antibiótica oftálmica. El trasplante ha finalizado.

Ahora mostramos resultados representativos de párpados pancreáticos trasplantados a la cámara interior del ojo. Para estudios de imagen longitudinales de los ojales individuales en el séptimo día. Después del trasplante, los ojales están claramente injertados en la parte superior del iris a los 28 días.

Los ojales están en los mismos lugares que se vieron anteriormente 42 días después del trasplante. Los ojales son claramente visibles en las mismas ubicaciones. También observe qué tan bien cicatrizó la incisión, lo que excluye cualquier posibilidad de interferir con las imágenes de los ojales individuales.