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DOI: 10.3791/50471-v
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Análisis de la función de las células ciliadas vestibulares se complica por su ubicación en lo profundo de la parte más dura del cráneo, hueso temporal pétreo. La mayoría de los estudios de células pilosas funcionales han utilizado intensamente células ciliadas aislados. A continuación se describe una preparación semi-intacta de ratón epitelio vestibular para estudios electrofisiológicos y de microscopía de dos fotones.
El objetivo general de este procedimiento es obtener una preparación casi normal del epitelio sensorial vestibular del ratón que pueda utilizarse para estudiar los procesos celulares y subcelulares fundamentales de las células ciliadas vestibulares. Esto se logra aislando primero el laberinto vestibular óseo de la bóveda craneal. El segundo paso es rascar cuidadosamente el laberinto óseo con pinzas finas para exponer el laberinto membranoso subyacente antes de sacarlo por completo de su cubierta ósea.
A continuación, se expone el epitelio sensorial vestibular cortando la membrana suprayacente con unas finas tijeras de iris. El paso final es montar la preparación de epitelio sensorial semiintacto en una cámara con fondo de vidrio y estabilizarla con una red de nailon ponderada. En última instancia, la electrofisiología de pinza de parche y la microscopía de dos fotones se utilizan para caracterizar las propiedades intrínsecas de la membrana y el perfil de señalización de calcio, respectivamente, de cada tipo de cabello vestibular, célula y/o arina primaria.
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