Name: Biosensor para la detección de antibióticos Las bacterias estafilococo resistentes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-08T09:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 4 s
Description: Aprende a diferenciar cepas MRSA y MSSA de Staphylococcus aureus mediante biosensores de fagos líticos inmovilizados en sensores de microbalanza de cristal de cuarzo. Este método elimina la extracción de ADN y mejora el diagnóstico clínico.

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El trabajo presentado en este documento fue apoyado por becas de la Universidad de Auburn y AUDFS USAF CRADA 07-277-60MDG-01. Las opiniones expresadas en este artículo son las de los autores y no reflejan la política o posición de la Fuerza Aérea de Estados Unidos, el Departamento de Defensa, ni del Gobierno de EE.UU. oficial.

1. Preparando el escenario <ol><li> Obtener la cepa de tipo S. aureus ATCC 12600, S. aureus ATCC 27690 y Bacillus subtilis ATCC 6051. Cepas resistentes a la meticilina de S. aureus - MRSA1, MRSA 2, MRSA 5, 13 MRSA, MRSA 26, 34 MRSA, MRSA 45, B. anthracis Sterne, Salmonella typhimurium LT2, Shigella flexneri, Yersinia enterocolotica, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae 13882; El fago lítico 12600. </li><li> Obtener PBP 2a anticuerpos conjugados con perlas de látex. </li><li> Preparar medio NZY tal como se describe 21. </li><li> Obtener solución tamponada con fosfato salino (PBS). </li><li> Preparar agua desionizada como subfase de Langmuir-Blodgett (LB) deposición monocapa. </li></ol> 2. Propagación del bacteriófago y Titulación <ol><li> Incubar 5 ml de cultivo de una noche de S. aureus ATCC 12600 (3,6 x 10 8 unidades formadoras de colonias (UFC) / ml) con 500 l de fago (3 x 10 9 &lt;/ Sup&gt; PFU / ml) en 500 ml de medio NZY en 2 L de Flack en un agitador-incubador a 37 ° C durante la noche. </li><li> Centrifugar cultivo a 4424 xg durante 10 min a 4 ° C. </li><li> Sobrenadante se volvió a centrifugar a 11.325 xg durante 10 min a 4 ° C. </li><li> Filtrar el sobrenadante a través de un filtro Millipore de 0,22 micras. </li><li> Centrifugar el filtrado a 75.395 xg durante 1,5 horas. </li><li> Disolver el precipitado en 100 l de agua destilada. </li><li> Preparar diluciones de 10 veces de la suspensión de fagos en medio NZY. </li><li> Placa 1 ml de cultivo de una noche (ON) de S. aureus ATCC 12600 en cada una de 2 placas con agar NZY para asegurarse de cubrir toda la superficie. Retire el exceso de la cultura y deje que la superficie se seque durante 30 minutos. </li><li> Detectar una muestra (10 l) de la dilución apropiada del fago sobre la superficie de la placa y se incuba a 37 ° C durante 18-24 horas. </li><li> Examinar la formación de placas y calcular el título de fagos. Los títulos de bacteriófagos (T) se calcula sobre la base del número de pLaques (N) formadas por 10 l de volumen (V) de suspensión de fago y el factor de dilución (F). El título se calculó por la fórmula:. T = N / (vxf) Por ejemplo, para el número de placas 75 a la dilución 10 -7 y el volumen de 10 l (10 x 10 -3 ml), el título es igual 75 / (10 x 10 x 10 -3 -7) = 7,5 x 10 10 unidades formadoras de placa (UFP) por ml de suspensión. </li></ol> 3. Phage Oro-inmovilizada <ol><li> Piezas de cuarzo recubiertos de oro Limpio (60 mm 2) de grabado con plasma en atmósfera de argón durante 10 min y después se esterilizan durante 6 horas bajo luz UV en un gabinete estéril. </li><li> Añadir 50 microlitros de 1 x 10 9 UFP / ml de suspensión de fagos a la superficie de oro de cada pieza en una placa de Petri estéril, y luego incubar durante la noche en una cámara húmeda a temperatura ambiente. </li><li> Retire y título de la suspensión de fago restante. </li><li> Lavar piezas con fago unido 5 veces con PBS para eliminar no unidofagos. </li></ol> 4. Las pruebas de infectividad fago inmovilizado sobre una superficie seca <ol><li> Difundir una cultura de O / N de S. Aureus ATCC 12600 en una placa de agar NZY y dejar secar. </li><li> Coloque una pieza de oro con el fago inmovilizado en la placa frontal hacia abajo. </li><li> Observe una zona de lisis después de 12 h de incubación a 37 ° C que indica la infectividad. </li><li> Utilice piezas cubiertos de oro sin fagos en los experimentos de control. </li></ol> 5. Pruebas de actividad lítica de fagos libres y ligados en el líquido <ol><li> Añadir una cultura ON del S. aureus ATCC 12600 a 10 ml de NZY en cada uno de cuatro matraces de 300 ml brazo lateral (6 x 10 6 UFC / ml en cada matraz). </li><li> Añadir en dos matraces de 2 x 10 6 PFU / ml de fagos libres. </li><li> Utilice las otras dos frascos como controles. </li><li> Vigilar la evolución temporal de la S. lisis celular aureus para 570 min por medición de la densidad óptica (DO 600) a intervalos de 30 min para todos los matraces.</li><li> Tome una medición final a las 24 horas. </li><li> Repita los pasos 5.1 a 5.5, pero el uso de piezas de oro con fagos unidos en vez de fagos libres, y piezas de oro sin fago en frascos de control. </li></ol> 6. La pérdida de los fagos unidos Durante la Incubación <ol><li> Añadir 50 l de 1 x 10 9 PFU / ml de fago sobre la superficie de la pieza de oro estéril en una placa de Petri que se coloca en una cámara húmeda durante la noche a temperatura ambiente. </li><li> Extraiga la suspensión con el fago no unido de la superficie de oro y el título. </li><li> Lave la pieza de oro con fagos unidos 5 veces con PBS y colóquelos en 1 ml de solución NZY 15 ml tubo de agitador-incubador a 37 º C durante 8 horas. </li><li> Determinar el título del fago individual como se describe en 2. </li></ol> 7. Phage Spheroids Preparación <ol><li> La combinación de 400 l de suspensión de fago 12600 (10 11 UFP / ml) con un volumen igual de cloroformo espectrofotométrico grado en 1 ml frascoa temperatura ambiente. </li><li> Suavemente vórtex con la suspensión de fago-cloroformo 5-6 veces (intervalos de 5 segundos) más de un minuto de duración. </li><li> Con la suspensión de estabilizar durante 30 segundos y luego pipeta de la fase superior que contiene esferoides se pipeta para la preparación monocapa. </li><li> Tómese unos microlitros de la suspensión esferoides para la transmisión y microscopía electrónica de barrido. </li><li> Utilizar una suspensión esferoide restante para la fabricación de biosensores. </li></ol> 8. Preparación biosensor <ol><li> Limpiar sensores QCM-D por plasma grabado en argón durante 10 min PDC-32G limpiador plasma Harrick. </li><li> Enjuague sensor con hexano para eliminar las posibles impurezas orgánicas. </li><li> Preparar y limpiar un canal de la balanza película como se describe en el 22. </li><li> Rellene través LB con una solución subfase y limpiarlo con una barrera a través y estabilizar el canal a 20 ± 0,1 ° C </li><li> Extienda 300 l alícuota de fago 12600 en Suspensiòn acuosaen (10 11 UFP / ml) en subfase LB. </li><li> Prepare monocapa fago sobre una solución subfase LB al permitir 300 l alícuota de fago 12600 suspensión acuosa (10 11 PFU / ml) a correr por una varilla de vidrio mojable inclinado que está parcialmente sumergido en la subfase de 22,23. </li><li> Estabilizar la monocapa preparada durante 10 min, y luego comprimir a una velocidad de 30 mm / min (45 cm 2 / min), hasta que una presión constante se alcanza 19 N / m. </li><li> Realizar una deposición de película vertical sobre posicionado perpendicular sensor de QCM-D a una velocidad de 4,5 mm / min por inmersión sucesiva sensor de dentro y fuera de la monocapa siete veces. La microscopía electrónica de depositado monocapas de fagos antes de la exposición a muestras de bacterias mostró que las capas estaban continua, homogénea y uniforme (datos no mostrados). </li><li> Repetir los pasos 4.5 a 4.8 con una suspensión de esferoide fago que se prepara en 3. </li><li> Utilice biosensores fagos fabricados por MRSA detección electrónicamicroscopía, y elipsometría. </li></ol> 9. Prueba biosensor, la Discriminación de la meticilina resistente y bacterias estafilococos sensibles <ol><li> En este protocolo, se preparan biosensores con fago no modificado y modificado y esferoides de fagos. Una microbalanza de cristal de cuarzo con cuatro cámaras de flujo de sensor se utiliza para monitorizar la unión de las bacterias a los fagos inmovilizada en la superficie del sensor QCM. PBP 2a anticuerpos conjugados con perlas de látex se utilizan para discriminar entre resistente a la meticilina (SARM) y bacterias estafilococos sensibles. Todas las mediciones se llevan a cabo en el modo de flujo (50 l / min) a 5 MHz. </li><li> Establecer una línea de base de la frecuencia de resonancia del sensor QCM en agua (~ 30 min). </li><li> Dibuje una suspensión de células vivas sensibles a meticilina de estafilococos bacterianas en el agua (10 9 UFC / ml) a través de la celda de ensayo. </li><li> Un seguimiento continuo de los cambios en la frecuencia de resonancia de sensores y la disipación de la energía para el primer armónico, using el software Q-Soft. </li><li> Cuando los cambios en la frecuencia de resonancia de sensores y la disipación alcanzaron niveles de saturación, añadir la suspensión de PBP de anticuerpos conjugados con perlas de látex (6,77 x10 10 perlas / ml) para el flujo durante el monitoreo continuo de la frecuencia y la disipación. </li><li> Repita los pasos de 09.02 a 09.05 para las células bacterianas por estafilococos resistentes a la meticilina (MRSA). </li><li> Definir un cambio de frecuencia a través de la variación de la masa debido a las bacterias de unión por la ecuación de Sauerbrey 24,25 Df = xn-Delta M / C, donde C es la sensibilidad masa constante (C = 17,7 ng x cm x -2 -1 Hz a 5 MHz ), m es la masa y n es el número de armónicos (n = 1). </li><li> Definir un cambio de disipación de energía (Δ D) a partir de la grabación de la disminución exponencial de oscilación (frecuencia y amplitud de amortiguación, lo que permitió la cuantificación de la energía disipada y se almacena durante un período de oscilación,E se disipó y E almacenada, respectivamente: Δ D = E disipada / 2 πE almacenada. Δ D se mide en unidades de disipación (DU), uno DU = 10 -6 unidades relativas). </li></ol>

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<li>Sanders, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aseptic+Laboratory+Techniques%3A+Plating+Methods%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods.</a> J. Vis. Exp. (63), e3064(2012).</li>
</ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.

Es bien sabido que los fagos se pueden utilizar como sondas de biosensores para patógenos bacterianos 28. Se demuestra en este trabajo que fago junto con anticuerpos PBP 2a puede ser utilizada para resolver el viejo problema: las cepas resistentes y sensibles a antibióticos discriminación rápidos. Se encontró sin embargo esos fagos de estafilococos no modificados normales no son adecuados para la detección de bacterias con dispositivos QCM, a pesar de que las bacterias se unen. La...

Cepas resistentes a la meticilina de Staphylococcus aureus se han sugerido como un factor en las infecciones esenciales y los brotes nosocomiales 4-8. Las formas más comunes de reconocimiento de la resistencia a la meticilina, tales como la prueba de difusión en disco oxacilina agar pantalla, o de microdilución en caldo, se basan en las condiciones de cultivo a medida para mejorar la expresión de la resistencia. Las alteraciones incluyen la utilización de oxacilina, incubación a 30 o 35 ° C en lugar de 37 ° C, y la inclusión de NaCl al medio de crecimiento. Por otra parte, para la detección correcta de estos tipos de técnicas, en lugar de 16 a 18 horas se requiere un largo período de incubación de 24 h. Técnicas rápidas con nivel apropiado (&gt; 96%) de la sensibilidad para la identificación de la resistencia a la meticilina incluyen técnicas de microdilución automatizados tales como la tarjeta Vitek GPS-SA, el sistema Rapid ATB Staph, y el sistema Rapid Panel de Microscan que producen resultados después de 3-11 hr 9-11. El Crystal MRSA sistema de identificación es un método rápido que se basa en el reconocimiento de crecimiento de S. aureus en presencia de 2% de NaCl y 4 mg de oxacilina por litro con un sensor de fluorescencia sensible al oxígeno. Sensibilidades reclamados varían entre el 91 y el 100% después de 4 horas de incubación 12-14. Estos métodos fenotípicos están limitados en sus exactitudes por el impacto de las cepas prevalentes que expresan resistencia heterogénea. Por lo tanto, los mejores métodos aceptados para el reconocimiento de la resistencia a la meticilina es PCR o hibridación de ADN del gen mecA 15. Sin embargo, esta técnica requiere ADN purificado y es extremadamente sensible a varias mezclas (impurezas), que incluyen restos de células de 16. Además, estas técnicas necesitan mucho tiempo para llevar a cabo. Estrategias para el reconocimiento del producto del gen mecA, proteína PBP 2a, se podrían utilizar para determinar la resistencia y pueden ser más fiable en comparación con las técnicas de ensayo estándar 17. Staphylococcus aureus incluso los que tienen resistencia a la meticilina 1,2,18. En este trabajo hemos propuesto una nueva técnica en el reconocimiento específico y la detección de MRSA, tales como el reconocimiento de las bacterias, junto con la conformación de MRSA en tiempo real. Para este propósito específico de una S. bacteriófago aureus con un amplio espectro de huéspedes (incluyendo cepas de SARM) en combinación con el anticuerpo monoclonal contra la proteína (PBP 2a) se han utilizado. PBP 2a es una proteína de la pared celular y que es la causa de la resistividad antibiótico de MRSA. Sin embargo anticuerpo PBP 2a no es específico para S. aureus, ya que algunas otras bacterias tienen proteínas de unión a los antibióticos con secuencia similar a PBP 2a 19,20. En consecuencia, en este trabajo, S. bacteriófago aureus y anticuerpos contra la proteína PBP 2a se han utilizado. Para ser capaz de desarrollar un biosensor que específicamentecamente detectar e identificar MRSA un dispositivo con una acción en dos etapas se ha utilizado. El paso inicial utilizó una S. aureus monocapa bacteriófago como un sensor de la sonda, mientras que el segundo paso emplea PBP 2a anticuerpos específicos. Por lo tanto, el primer paso será reconocer S. bacteria Staphylococcus, como el otro serán sensibles a la proteína de unión a los antibióticos. Cuando las señales recibidas de los dos pasos son positivos, que indica la detección específica de MRSA.

<table><tbody><tr><td colspan="4"><fuerte>Reactivos</fuerte></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato (PBS) </td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>cloroformo de grado espectrofotométrico </td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td><td>154733</td><td>(99.8% A.C.S.) </td></tr><tr><td>Hexano-Anhidro </td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td><td>29609-0(</td><td>95%)</td></tr><tr><td>Alcohol etílico </td><td>Pharmco products Inc. Brookfield, CT</td><td>64-17-5</td><td>190 Proof</td></tr><tr><td colspan="4">Equipment</td></tr><tr><td>PBP 2a perlas de látex conjugadas con anticuerpos</td><td>Denka Seiken Co., Ltd, Tokio, Japón</td><td>La prueba</td><td></td></tr> <tr><td>de pantalla MRSAS. aureus ATCC 12600, S. aureus ATCC 27690 y Bacillus subtilis ATCC 6051 de </td><td>American Type Culture Collection (Manassas, VA);</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MRSA1, MRSA 2, MRSA 5, MRSA 13, MRSA 26, MRSA 34, MRSA 45, B. anthracis Sterne, Salmonella typhimurium LT2, Shigella flexneri, Yersinia enterocolotica, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae 13882; El fago lítico 12600 </td><td>La colección de cultivos de la Universidad de Auburn, Auburn, AL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga </td><td>Beckman Coulter</td><td>Optima L-90K Ultra Centrifugadora</td><td></td></tr><tr><td>KSV 2200 LB Balanza de película</td><td>KSV Chemicals, Finlandia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sistema óptico de microscopio óptico </td><td>CitoViva Technology Inc., Auburn, AL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>QCM-D</td><td>Q-Sense AB, V&#228; stra Fr&#246; lunda, Suecia</td><td>E4</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio electrónico de barrido (SEM)</td><td>JEOL USA Inc., Peabody, MA</td><td>JEOL-7000F SEM</td><td></td></tr><tr><td>Microscopía electrónica de transmisión (TEM)</td><td>JEOL USA Inc., Peabody, MA</td><td>JEOL, JEM 2010</td><td></td></tr><tr><td>Stericup, Presterilizado</td><td>Millipore Corporation, Billerica, MA</td><td>SCGPU05RE</td><td>0.22 &mu; m, placa de bioensayo de membrana GP Express PLUS</td></tr><tr><td></td><td>NUNC A/S, Dinamarca</td><td>240835</td><td>Dimensiones (mm), 245 x 245 x 25</td></tr><tr><td>Pipetas</td><td>Gilson, Pipetman, Francia</td><td>P100, P200, P1000</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora C24 Agitador</td> New <td>Brunswick Scientific, CT</td><td>Classic C24</td><td></td></tr><tr><td>Piezas de cuarzo recubiertas de oro</td><td>Auburn University, AL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Placas</td> <td>de Petri caserasFisher Brand, EE. UU.</td><td>0875713</td><td>100 mmX15 mm </td></tr><tr><td>SterilGard III Advance</td><td>The Baker Company, ME</td><td>SG403</td><td></td></tr><tr><td>Matraces de cultivo</td><td>Corning Incorporated, NY</td><td>4995</td><td>PYREX 250 ml Matraces Erlenmeyer </td></tr><tr><td>Espectrómetro óptico</td><td>Genesys 20. Thermo Spectronic, Estados Unidos.</td><td>4001</td><td></td></tr><tr><td>Limpiador de plasma</td><td>Harrick Plasma, EE. UU.</td><td>PDC-32G</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de purificación de agua Millipore</td> Elipsómetro de imagen <td>Millipore</td><td>Direct-Q</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Accurion, EE. UU</td><td>. nanofilm_ep3se</td><td></td></tr><tr><td>Software </td><td>Q-Sense AB, Suecia</td><td>QSoft, QTools</td><td></td></tr></tbody></table>

biosensor para la detección de antibióticos las bacterias estafilococo resistentes

Biosensor for Detection of Antibiotic Resistant Staphylococcus Bacteria

Un bacteriófago lítico estructuralmente transformado que tiene una amplia gama de huéspedes de cepas de Staphylococcus aureus y una proteína de unión a penicilina (PBP 2a) de anticuerpos conjugados con perlas de látex se han utilizado para crear un biosensor diseñado para la discriminación de resistente a la meticilina (SARM) y sensible a la meticilina (SASM) S . especies aureus 1,2. Los fagos líticos se han convertido en esferoides de fagos por el contacto con la interfase agua-cloroformo. Fagos monocapas esferoide se han movido en una superficie biosensor de Langmuir-Blodgett (LB) Técnica 3. Los biosensores creados han sido examinados por una microbalanza de cristal de cuarzo con seguimiento de disipación (QCM-D) para evaluar las interacciones bacteria-fago. Interacciones bacteria-esferoide llevaron a la reducción de la frecuencia de resonancia y un aumento de la disipación de la energía, tanto para las cepas de SARM y SASM. Después de la unión bacteriana, estos sensores han sido expuestos más al anticuerpo de proteína de unión a penicilina perla de látexs. Sensores analizados con MRSA respondieron a PBP 2a cuentas de anticuerpos, aunque sensores inspeccionados con SASM dieron ninguna respuesta. Esta distinción experimental determina una discriminación inequívoca entre resistente a la meticilina y S. sensible cepas de Staphylococcus. Igualmente consolidados y no consolidados bacteriófagos suprimen el crecimiento de bacterias en las superficies y en suspensiones de agua. Una vez que los fagos líticos se transforman en esferoides, que conservan su fuerte actividad lítica y muestran una alta capacidad de captura bacteriana. Los esferoides de fago y los fagos se pueden utilizar para la prueba y la esterilización de los microorganismos resistentes a los antibióticos. Otras aplicaciones pueden incluir el uso en la terapia de bacteriófagos y las superficies antimicrobianas.

El fago demostró actividad lítica contra todas las cepas ensayadas de S. aureus, incluyendo cepas de MRSA, tal como se indica por la prueba de la mancha fago. Tamaños de placa generalmente variaron de 5 a 15 mm. No se encontró actividad contra otros-cultivos de ensayo (Tabla 1). Un crecimiento normal de S. aureus ATCC 12600 en un medio NZY en un agitador-incubador a 37 ° C se muestra en la Figura 1A (una curva marcada por círculos vacíos). ...

Biosensores fagos líticos y los granos de anticuerpos son capaces de discriminar entre resistente a la meticilina (MRSA) y la bacteria estafilococo sensibles. Los fagos se inmovilizaron mediante un método de Langmuir-Blodgett sobre una superficie de un sensor de microbalanza de cristal de cuarzo y trabajaron como amplias sondas estafilococo gama. Perlas de anticuerpos reconocen SARM.

Biosensor para la detección de antibióticos Las bacterias estafilococo resistentes

A structurally transformed lytic bacteriophage having a broad host range of Staphylococcus aureus strains and a penicillin-binding protein (PBP 2a) ...

El objetivo general del siguiente experimento consiste en discriminar cepas de staphylococcus aureus resistentes a la meticilina (MRSA) y sensibles a la meticilina (MSSA) mediante un fago lítico anti modificados selecto especialmente. Cuando las bacterias se unen a las colas largas y flexibles del fago lítico, la distancia entre las células unidas y la superficie del sensor es mayor que la penetración de la onda acústica del QCm. Por lo tanto, no se genera la señal del evento de unión. Sustituir el fago intacto por esferoides da como resultado fagos completamente funcionales con colas cortas, que se unen a las bacterias dentro de la profundidad de penetración de la onda acústica del cristal A-Q-C-M-D. Por lo tanto, contribuyen a los cambios en frecuencia y disipación cuando los esteroides de fago se depositan sobre el cristal A-Q-C-M-D y se exponen a la suspensión bacteriana mixta. Estos se unen tanto a las cepas MRSA como MSSA de Staphylococcus aureus, pero no a otras bacterias, separando así Staphylococcus aureus del resto de bacterias sobre la superficie del cristal. Finalmente, cuando se añaden perlas recubiertas con el anticuerpo específico PPP2A contra MRSA, se genera una señ

biosensor-for-detection-antibiotic-resistant-staphylococcus

Research

Investigación

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingeniería

El diseño de un esquema de flujo de trabajo sencillo de un día para el diagnóstico de patógenos bacterianos permite el reconocimiento rápido de infecciones del torrente sanguíneo. La inclusión de los ocho objetivos bacterianos clínicamente relevantes y sus perfiles de resistencia a los antibióticos ofrece al clínico una visión inicial en el mismo día, que puede conducir a una terapia más adecuada.

Un día de flujo de trabajo Método de detección de patógenos bacterianos y pruebas de resistencia a los antimicrobianos de cultivos de sangre

Se describe un método de ensayo sensor electroquímico para la detección e identificación bacteriana rápida. El ensayo implica una serie de sensores funcionalizado con sondas de captura de oligonucleótidos de ADN para ARN ribosomal (ARNr) secuencias específicas de la especie. Sandwich hibridación de ARNr objetivo con la sonda de captura y una sonda de oligonucleótido detector de ADN unido a peroxidasa de rábano picante produce una corriente amperométrica medible.

Bacterial Detección e Identificación Usando sensores electroquímicos

Fuente: Zhang, M. et al., Pruebas rápidas de susceptibilidad antimicrobiana mediante imágenes de dispersión Raman estimulada de incorporación de deuterio en una sola bacteria. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demuestra la aplicación de la microscopía de dispersión Raman estimulada para evaluar la susceptibilidad a los antibióticos mediante el seguimiento de la actividad metabólica marcada con deuterio. Al monitorizar señales de carbono-deuterio, el método permite la detección rápida de poblaciones...

Detección de la susceptibilidad a antibióticos bacterianos mediante un microscopio Raman de dispersión estimulado

Este video muestra un ensayo de biosensor conductimétrico para estudiar la interacción de un anticuerpo con un antígeno objetivo inmovilizado en un chip transductor. El biosensor está diseñado para tener una proteína quimérica bifuncional: una enzima β-lactamasa con un sitio catalítico funcional fusionado a un nanocuerpo para unirse al antígeno objetivo inmovilizado. Al unirse, la hidrólisis catalítica de un sustrato antibiótico por la enzima β-lactamasa genera una señal eléctrica que confirma...

Ensayo de biosensores conductimétricos basado en β-lactamasas para interacciones proteína-proteína

Se introduce un biosensor óptico libre de marca para la detección de bacterias rápidos. El biosensor se basa en una Si poroso nanoestructurado, que está diseñado para capturar directamente las células de las bacterias diana sobre su superficie. Utilizamos anticuerpos monoclonales, inmovilizados sobre el transductor porosa, como las sondas de captura. Nuestros estudios demuestran la aplicabilidad de estos biosensores para la detección de concentraciones bacterianas bajas dentro de minutos sin...

Detección óptica de E. coli Bacterias por mesoporosos Silicon Biosensores

Hemos desarrollado una plataforma microfluídica para la prueba rápida de la susceptibilidad a los antibióticos. El líquido se pasa a altas velocidades sobre las bacterias inmovilizadas en el fondo de un canal microfluídico. En presencia de estrés y antibióticos, las cepas susceptibles de bacterias mueren rápidamente. Sin embargo, las bacterias resistentes pueden sobrevivir a estas condiciones estresantes.

Pruebas de susceptibilidad a antibióticos inducidas por el estrés en un chip

La mayoría de las infecciones bacterianas producen una biopelícula. En virtud de su entorno, las bacterias asociadas a la biopelícula suelen ser fenotípicamente resistentes a los fármacos. Por lo tanto, las nuevas moléculas antibacterianas que matan las bacterias en las biopelículas son una alta prioridad. Establecemos un ensayo para detectar rápidamente compuestos antimicrobianos que sean eficaces para erradicar las biopelículas.

Orientación de Biofilm Asociadas<em&gt; Staphylococcus aureus</em&gt; Uso de Ensayo de susceptibilidad a fármacos Basado resazurina

En este trabajo se presenta un nuevo método para estudiar las interacciones de la proteína-proteína usando un biosensores conductimétricos basados en la tecnología híbrida de β-lactamasa. Este método se basa en la liberación de protones al producirse la hidrólisis de β-lactámicos.

El uso de un análisis de biosensores conductimétricos β-lactamase-base para detectar las interacciones biomoleculares

Aquí, presentamos un protocolo para la detección y cuantificación de moléculas abundantes bajas en soluciones complejas usando molecular imprinting en combinación con un biosensor de capacitancia.

Detección ultrasensible de biomarcadores utilizando una impresión Molecular basado Biosensor capacitiva

Gota de plataformas basadas en microfluidos son candidatos prometedores para la experimentación de alto rendimiento, ya que son capaces de generar picolitros, la auto-compartimentado barcos bajo costo en las tasas de kHz. Mediante la integración con rápido, sensible y de alta resolución espectroscópica métodos de fluorescencia, la gran cantidad de información generada dentro de estos sistemas se puede extraer de manera eficiente, aprovechar y utilizar.

Métodos de detección de fluorescencia para las plataformas de las gotas de microfluidos

Aprende a diferenciar cepas MRSA y MSSA de Staphylococcus aureus mediante biosensores de fagos líticos inmovilizados en sensores de microbalanza de cristal de cuarzo. Este método elimina la extracción de ADN y mejora el diagnóstico clínico.

Biosensor para la detección de antibióticos Las bacterias estafilococo resistentes

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