Renal Cápsula xenotrasplante y subcutánea Pellet Implantación para la Evaluación de la próstata Carcinogénesis y la hiperplasia prostática benigna

Las técnicas ilustradas en este video son útiles en experimentos que evalúan la regulación hormonal de la carcinogénesis y el crecimiento benigno de la próstata. Las primeras prensas de apelación se utilizan para hacer gránulos de hormonas que permitirán la administración continua. A continuación, se preparan pipetas de vidrio con puntas redondeadas después de que el riñón se exterioriza.

La punta de la pipeta se utiliza para ayudar en la inserción del injerto. A continuación, los gránulos de hormona comprimidos se implantan por vía subcutánea. Finalmente, se obtienen resultados que muestran los efectos del tratamiento hormonal sobre el crecimiento de xenoinjertos de tejido benigno.

Las técnicas presentadas en este video son fáciles de realizar y reproducibles. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo, como cómo las hormonas están implicadas en la transformación de las células benignas en malignas, así como cómo las hormonas regulan el crecimiento benigno de la próstata. Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia posibles nuevas terapias y estrategias de prevención para la hiperplasia protésica benigna y el cáncer de próstata.

Por lo general, las personas que son nuevas en esta técnica tendrán dificultades con el aspecto técnico de la cápsula renal. Los pellets de xenoinjerto se preparan en una capucha de seguridad química mientras se usa el equipo de protección adecuado para comenzar a limpiar a fondo el equipo de fabricación de pellets con etanol al 70% para evitar la contaminación cruzada. A continuación, pese la cantidad deseada de polvo de hormonas, dejando aproximadamente un 5% de material adicional para acomodar la pérdida durante el prensado.

Algunas hormonas requieren un agente aglutinante o relleno, que se mezcla antes del fabricante de pellets. Aquí, el estradiol se combina con un relleno de colesterol, lo que da como resultado una bolita de 25 miligramos. Una vez que todo esté pesado y combinado, transfiera el polvo al dset.

Coloque el tinte debajo de la prensa y empuje la palanca hacia abajo firmemente para comprimir la bolita. Utilice una presión constante para mantener una relación constante entre el área de superficie y el volumen. A continuación, invierta el soporte de tinte y vuelva a empujar la palanca hacia abajo para liberar el pellet.

Inspeccione la integridad del pellet y determine si la masa final está dentro del rango deseado. Los gránulos se pueden fabricar antes de la cirugía y almacenarse de acuerdo con la estabilidad de la hormona o el medicamento utilizado mientras se usa la protección adecuada. Pase la punta de una pipeta pastosa de vidrio a través de la llama, un mechero bunsen para crear una punta redondeada pulida al fuego.

Mantenga un movimiento constante y ligero de la pipeta para evitar puntos calientes. A continuación, coloque la pipeta en la llama en un ángulo de aproximadamente 60 grados para crear una punta redondeada curva. Esta punta se utilizará para crear un bolsillo para el injerto debajo de la cápsula renal.

Antes de comenzar el procedimiento quirúrgico, esterilice todos los instrumentos necesarios y prepare el área de trabajo. Una vez que el animal esté debidamente anestesiado, desinfectar el sitio quirúrgico con aplicaciones repetidas de Betadine y alcohol. Después de aplicar paños estériles en el área, se realiza una incisión de dos a tres centímetros en la línea media dorsal.

A continuación, separe la dermis subyacente de la pared del cuerpo. Separe ambos lados de la incisión para el injerto bilateral, o solo uno para el injerto unilateral. Una vez separado, coloque el ratón en posición lateral y localice el riñón observando el perfil renal a través de la pared muscular.

Aplicar una presión suave con el pulgar y el índice puede ayudar a visualizar los órganos internos con unas tijeras finas para el iris y tener cuidado de evitar los vasos principales y los nervios espinales. Haz una incisión de un centímetro en la pared del cuerpo paralela a la columna vertebral. Ensancha esta incisión a uno y medio a dos centímetros abriendo suavemente las tijeras más anchas.

Después de colocarlos en la incisión inicial, exteriorice el riñón aplicando una presión suave fuera de la pared muscular a ambos lados del riñón. A continuación, mete los bordes de la piel por debajo del riñón exteriorizado, que descansará sobre la pared del cuerpo. Si también hay otras estructuras, se pueden meter suavemente mientras se exterioriza el riñón.

Mantener la hidratación de la cápsula renal mediante la aplicación de solución salina estéril. Levante suavemente la cápsula de riñón y haga una incisión de dos a cuatro milímetros. El tamaño de la incisión está determinado por el tamaño del injerto, pero debe minimizarse para mantener la integridad de la cápsula.

Inserte el extremo cerrado redondeado de la pipeta preparada anteriormente debajo de la cápsula tangencial a la superficie del riñón. Una vez insertados, abra suavemente un pequeño bolsillo para los injertos con mucho cuidado de no dañar el riñón. Los injertos de tejido de parénquima se preparan a partir de tejido prostático fresco obtenido durante la resección quirúrgica.

Levante el borde cortado de la cápsula renal e inserte el injerto en el bolsillo. Con la punta de la pipeta, se pueden colocar varios injertos debajo de la cápsula renal y espaciarlos uniformemente en la superficie del riñón. Una vez finalizado el injerto, levante suavemente los lados de la incisión de la pared muscular para volver a colocar el riñón en la cavidad corporal.

Asegúrese de que el injerto no se salga de debajo de la cápsula. Se utiliza una sola sutura para cerrar la pared muscular antes de proceder con la implantación de pellets subcutáneos. Una vez finalizado el injerto, separe la dermis subyacente de la pared corporal en dirección craneal.

Levante suavemente el aspecto craneal de la incisión cutánea para crear un bolsillo mientras sostiene la bolita de hormonas Suavemente con pinzas dentadas rectas, inserte la bolita en el pescuezo del cuello. Con pinzas dentadas, alinee los bordes de la piel y aplique dos o tres clips quirúrgicos para heridas quirúrgicas para cerrar la incisión. En este ejemplo, los xenoinjertos de tejido primario de pacientes con hiperplasia prostática benigna se complementaron con testosterona exógena.

Durante un mes, las puntas de flecha denotan las ubicaciones de los xenoinjertos. El injerto de cápsula renal también se puede utilizar para evaluar la carcinogénesis hormonal. En este caso, los recombinantes celulares que contienen epitelio prostático benigno y la mecánica urogenital inductiva forman crecimientos benignos en ratones no tratados.

En este ejemplo, el mismo injerto se cultiva en un huésped que recibió gránulos subcutáneos de testosterona y estradiol durante cuatro meses y eligió un carcinoma de próstata que invade la cápsula renal. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo fabricar e implantar gránulos de hormonas comprimidas, así como cómo crear una pipeta de vidrio pulido al fuego para cirugía y realizar un xenoinjerto de cápsula renal. Al intentar este procedimiento, es importante recordar manipular suavemente la cápsula renal, mantener la humedad y evitar dañar el parénquima renal después de este procedimiento.

Se pueden realizar otros métodos como la histología, la inmunohistoquímica y las técnicas moleculares para detectar R-N-A-D-N-A o proteínas de interés. Esto permitirá una mejor evaluación de la naturaleza del crecimiento benigno o maligno observado. No olvide que las hormonas utilizadas en estos experimentos son potencialmente teratogénicas y cancerígenas.

El fabricante de gránulos de hormonas comprimidas siempre debe realizarse en una campana de seguridad química. Siempre se debe usar el equipo de protección personal adecuado para cada paso del procedimiento descrito en este video.