Name: Una plataforma automatizada versátil para Micro escala experimentos de estimulación celular (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 21 s
Description: Aprende a cultivar y estimular poblaciones celulares a pequeña escala mediante una plataforma microfluídica semiautomatizada. Este método permite recuperar lisados celulares para análisis moleculares con alta precisión y versatilidad.

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Los autores agradecen a Ronald F. Renzi y Michael S. Bartsch por sus contribuciones al diseño y desarrollo de dispositivos de DMF y el cubo DMF. Esta investigación fue plenamente apoyada por el Programa de Desarrollo de Laboratorio Director de Investigación y en Sandia National Laboratories. Sandia es un laboratorio multi-programa administrado y operado por Sandia Corporation, una subsidiaria de propiedad total de Lockheed Martin Corporation, para el Departamento de Administración de Seguridad Nuclear Nacional de Energía de los EE.UU. bajo contrato DE-AC04-94AL85000.

Este protocolo general está diseñada para soportar la aplicación de la plataforma a una amplia variedad de estudios; aspectos específicos para el estudio representativo se describe en este informe se separan entre paréntesis Figura 2 ilustra un estudio representativo llevado a cabo utilizando el protocolo.. Tenga en cuenta que en el protocolo, todos los comandos de &quot;instruir&quot; se automatizan con el uso de scripts predeterminados. Tenga en cuenta también que el paso 2 puede llevarse a cabo en paralelo con el Paso 1 (por ejemplo, durante los pasos 1.7 y 1.8), y que el paso 2.1 es a menudo ignoradas (porque las placas de dispositivos DMF modelado / recubiertos se pueden lavar y volver a utilizarse; ver Paso 5.2) . 1. Ensamble y rellenar las cámaras de perfusión celular <ol><li> Escudo las superficies interiores de esterilizado (autoclave) microcapilares (sílice fundida; 679 micras OD, 534 Identificación del micras; 15 cm de largo) con fibronectina, dando instrucciones a la bomba de jeringa para extraer una solución de fibronectina estéril (30 l de 50 mg / ml) en cada unomicrocapilar, incubando (37 ° C durante 2 hr), dando instrucciones a la bomba de jeringa para extraer la solución, y dejar que el microcapilares seco (temperatura ambiente (TA) durante 6 horas). </li><li> Conectar cada microcapilar recubiertos de fibronectina (cámara de perfusión) a un tubo de policarbonato (500 micras OD, 100 Identificación del micras) y el tubo a la bomba de jeringa multi-puerto, el uso de accesorios de CapTite (6 cámaras de perfusión, 8-puerto de la bomba de jeringa). </li><li> Con cinta, asegure el cuerpo de cada cámara de perfusión a un bloque de calor establecidas en la temperatura deseada (37 º C). </li><li> Sumergir los extremos abiertos de las cámaras de perfusión en un depósito (tubo de microcentifuge o placa de microtitulación de) células que contienen (P388D.1 macrófagos murinos) suspendidas en medio de crecimiento fresco (RPMI-1640, 10% de FBS, 500 unidades / ml de penicilina, 500 mg / ml de estreptomicina) a una concentración deseada (10 6 células / ml). </li><li> Instruir a la bomba de jeringa para extraer células (10 l, 10 4 células) en cada cámara de perfusión seguido por suficiente air para mover el tapón de líquido (~ 4,5 cm) a la sección asegurada al bloque de calor. </li><li> Permitir que las células se adhieran a las superficies interiores recubiertas de fibronectina de las cámaras de perfusión (37 ° C durante 1 - 2 h). Mientras tanto, la transferencia de los extremos abiertos de las cámaras de perfusión desde el depósito de las células a un nuevo depósito que contiene medio de cultivo fresco. </li><li> Después del periodo de cumplimiento, instruir a la bomba de jeringa para enviar los tapones de líquido (medio condicionado y las células no unidas) a los residuos, retirar un nuevo medio (10 l), y seguir con el aire suficiente para colocar las nuevas bujías de líquido (medio fresco) sobre el adherido las células. </li><li> Continuar llevando a cabo intercambios media (es decir, repita el Paso 1.7) a intervalos regulares (cada 2 horas) hasta las poblaciones de células son suficientemente equilibrada y amplia (16 - 24 h de cultivo a microescala generados poblaciones de ~ 1.000 células / cámara). </li></ol> 2. Fabrique el dispositivo DMF y Monte la Arquitectura Hub <ol><li&gt; Como se describió previamente 14,29, patrón de la placa inferior del dispositivo de DMF con cuarenta y seis de óxido de indio y estaño (ITO) electrodos (conductores de gota accionamiento) por fotolitografía y el grabado, y la capa con 5 micras de parileno-C y 50 nm de teflón AF. Formar la placa superior del dispositivo de DMF por un sustrato de vidrio de revestimiento no pautada ITO con teflón AF, como anteriormente. </li><li> El uso de fotogramas de compresión de metal, fijar las placas de DMF en un molde de polímero 14,30 con rebajes que mantienen una separación de 400 m entre las placas; esta separación, combinado con el tamaño del electrodo de accionamiento (2.5 mm 2), define el volumen de la gotita (2,5 l por electrodo). Tenga en cuenta que el conjunto de DMF se puede lograr por medios más simples 24. </li><li> Insertar transferencia revestido de teflón microcapilares (360 micras OD, 100 Identificación del micras; 3.5 - 4.0 cm de largo) en el espacio entre las placas de DMF, posicionar cada uno para extenderse hasta el borde de su electrodo de accionamiento cognado. </li><li> Para la linea de frented de cada transferencia colocar microcapillary un accesorio CapTite. </li><li> Enganche los conectores eléctricos para suministrar voltaje a los electrodos de ITO. Secuencias de activación de electrodos están automatizadas a través del uso de un interfaz electrónico controlado por ordenador ejecutar scripts predeterminados. </li><li> Opcional: Mover el cubo DMF montada en la etapa de traslación de un microscopio (SZ-6145TR (Olympus, Japón)) equipado con un dispositivo de carga acoplada (CCD) de la cámara (DCR-HC96 (Sony, Japón)) para facilitar el seguimiento de las gotitas 31. </li></ol> 3. Conecte las cámaras de perfusión al Hub DMF y estimular las poblaciones celulares <ol><li> Retire los extremos abiertos de las cámaras de perfusión del depósito de medio (consulte el Paso 1.6) e insertarlos en los conectores CapTite fijados a los extremos de la transferencia microcapilares del cubo DMF (ver Paso 2.4). </li><li> Instruir a la bomba de jeringa para enviar los tapones de líquido (medio acondicionado) en las cámaras de perfusión que perder. </li><li> InstRUCT el cubo de DMF para elaborar estímulo (E. coli biopartículas a 100 g / ml en medio fresco con 0,1% de Pluronic F127 w / v) de un depósito de a bordo y entregar una gota de tamaño apropiado (10 l) a cada transferencia microcapilar . Los reservorios de a bordo se componen de compartimentos con forma cilíndrica (1,5 x 1,5 cm cada una) y conectados al concentrador DMF a través de tubos. </li><li> Instruir a la bomba de jeringa para extraer los tapones de estímulo a la transferencia microcapilares y siga con el aire suficiente para colocar los tapones en las poblaciones de células en las cámaras de perfusión. </li><li> Se incuban las células con el estímulo (37 ° C durante 1 - 4 horas). Opcional: Cambio de un nuevo impulso (es decir, repita los pasos 3.2 a 3.4) a intervalos regulares. </li></ol> 4. Terminar estimulación y recuperación lisados ​​de células para el análisis <ol><li> Opcional: Si se requiere un período posterior a la estimulación, intercambiar los tapones de líquidos que contienen estímulo para el medio fresco (es decir, repita los pasos 3,2-30.4, sustituyendo el medio fresco para el estímulo), y continuar a incubar e intercambiar según sea necesario. </li><li> Cambio de los tapones de líquido en las cámaras de perfusión de tampón de lavado (preludio directo Lisis Módulo de Tampón B) (es decir, repita los pasos 3.2 a 3.4, sustituyendo el tampón de lavado para el estímulo), y se incuba según sea necesario (5 min). </li><li> Cambio de los tapones de líquido (tampón de lavado) para la solución de lisis (preludio directo Tampón de Lisis Módulo A con 0,1% de Pluronic F127 w / v) (es decir, repita los pasos 3.2 a 3.4, sustituyendo solución de lisis para el estímulo), y se incuba según sea necesario (5 min) . </li><li> Instrucciones a la bomba de jeringa para enviar los tapones de líquido (lisados ​​celulares) al cubo DMF. </li><li> Desmontar el eje DMF, retire la placa superior del dispositivo DMF (teniendo cuidado de no inclinar el plato de lado, ya que esto puede dar lugar a gota la mezcla), y recoger los lisados ​​utilizando un Pipetman o jeringa para análisis fuera de la plataforma (perfiles de expresión génica mediante qPCR). </li></ol> 5. Plataformas de hardware puro paraReutilización <ol><li> Sumergir la transferencia microcapilares y accesorios CapTite en lejía al 10% (v / v en agua) durante 10 min a TA, enjuague bien con agua desionizada, y el uso de gas nitrógeno seco. </li><li> Sumergir las placas de dispositivos DMF en 10% de lejía por 10 min a TA, enjuague bien con isopropanol seguido por agua desionizada, y el uso de gas nitrógeno seco seguido de cocción a 160 ° C durante 10 min. </li><li> El tubo de policarbonato de la bomba de jeringa, y el polímero fundido del dispositivo de DMF y el marco de la compresión, se puede volver a utilizar sin limpieza. La cámara de perfusión microcapilares se desechan después de cada experimento. </li></ol>

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Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.

Hemos desarrollado una plataforma automatizada simple y versátil para el cultivo celular micro-escala y experimentos de estimulación. La plataforma nos permite trabajar con pequeñas cantidades de cultivos y poblaciones de células (1 - 20 ly 100 - 2000 células por cámara); tamaños cultura podría reducirse aún más mediante el uso de microcapilares de menor diámetro. Trabajar en estas escalas reduce el costo de estudios de rutina y hace que los estudios viables que requieren el uso de reactivos preciosos y / o cél...

El estudio de las células se mantuvieron en cultivo (análisis in vitro) ha proporcionado valiosa información sobre los principios fundamentales y los mecanismos moleculares que regulan los complejos sistemas biológicos y la salud humana. Los métodos convencionales para el cultivo, la estimulación, y colección de las células para el análisis, que utilizan placas de Petri y las placas de microtitulación, se han diseñado para el estudio de grandes poblaciones de células (≥ 10 5) en volúmenes de cultivo escala ≥ mililitro (0,1 ml). Sin embargo, hay muchos casos en los que sólo cantidades limitadas de células están disponibles (por ejemplo, células primarias), o pequeñas poblaciones de células son deseables (por ejemplo, para reducir la variabilidad de célula a célula a través de la población), o reactivos requeridos son difíciles de obtener o prohibitivamente caro (por ejemplo, factores secretados por células purificadas). Estos temas pueden ser abordados con éxito por la escala hasta el tamaño cultura, que tiene el beneficio adicional de reducir el consumo de todos losreactivos necesarios para el análisis en 1,2 vitro. Desafortunadamente, el equipo y los métodos convencionales no soportan la manipulación precisa y reproducible de las culturas micro-escala y los sistemas automatizados de microfluidos basadas actualmente disponibles 3-11 son demasiado complejos y especializados para el uso habitual en la mayoría de los laboratorios. En este reporte se describe el montaje y el uso de una plataforma de tecnología simple y versátil para el cultivo automatizado, el estímulo y la recuperación de las pequeñas poblaciones de células (100 - 2000 células) en los volúmenes de micro-escala (1-20 l). La arquitectura de la plataforma (Figura 1) es de diseño modular: un conjunto de fibronectina recubierto microcapilares (&quot;cámaras de perfusión de células&quot; módulo) sirve como el sitio para el establecimiento, el mantenimiento, y la estimulación de cultivos de micro-escala, y un microfluídica digital (DMF ) 12,13 14,15 dispositivo equipado con células de rutas &quot;transferencia&quot; microcapilares (módulo central &quot;hub&quot;)y reactivos hacia y desde las cámaras de perfusión. DMF permite al usuario resolver individualmente varias gotas al mismo tiempo y cambiar o volver a ordenar las manipulaciones (es decir, volver a configurar los trenes de procesamiento de la muestra) sin alterar el hardware del dispositivo. Su gran flexibilidad es evidente en su reciente aparición como una tecnología clave en una amplia gama de aplicaciones, incluido el cultivo celular 16,17, 18,19 ensayos enzimáticos, inmunoensayos 20,21, 22,23 análisis de ADN, el procesamiento de proteínas, 24,25 y procesamiento de la muestra clínica. 26,27 Nuestro cubo central toma ventaja de la flexibilidad inherente a los dispositivos de DMF, y se mejora aún más mediante la adición de interfaces de microcapilares, lo que proporciona la oportunidad de llevar a cabo un subconjunto de manipulaciones (por ejemplo, cultivo celular) en periférica especializada módulos, en lugar de en el dispositivo de DMF en sí. La compartimentación de los trenes de procesamiento de esta manera también simplifica el diseño de la plaArquitectura TForm (sin necesidad de construir un dispositivo de DMF que pueden llevar a cabo todas las etapas de elaboración) y facilita su evolución como nuevas funciones se requieren (simplemente integrar nuevos módulos periféricos, según sea necesario). Transporte de las células y los reactivos dentro del cubo central es accionado por electrohumectación fuerzas generadas por la activación secuencial de electrodos dentro del dispositivo de DMF 13,28; transporte hacia, desde y dentro de las cámaras de perfusión es impulsado por los cambios de presión generados por una jeringa de alta precisión bomba. Todos estos movimientos fluidos son controlados a través de una interfaz electrónica simple y automatizado a través del uso de secuencias de comandos predeterminados. Como ejemplo representativo, se demuestra el uso de la plataforma para el estudio de las respuestas transcripcionales provocado en las células inmunes al reto con bacterias (Figura 2). La realización de estos experimentos en la plataforma nos permitió trabajar con un pequeño número de células ~ 1000 por la experimentación (condición de tal), minimizar la variabilidad experimento a experimento, reactivos conservar y volver a dirigir las manos-sobre el trabajo. Dadas las ventajas que ésta confiere, así como su accesibilidad y versatilidad, esta plataforma debe encontrar uso en una amplia variedad de laboratorios y aplicaciones y resultar especialmente útil para facilitar el análisis de las células y los estímulos que están disponibles sólo en cantidades limitadas.

<table><tbody><tr><td>Prelude Módulo de lisis directa</td><td>NuGEN</td><td>1400-24</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue (0.4% w/v)</td><td>GIBCO</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>Cell Stripper</td><td>Cellgro</td><td>25-056-C1</td><td></td></tr><tr><td>Ovation PicoSL WTA</td><td>NuGEN</td><td>3310-048</td><td></td></tr><tr><td>Agencourt RNAClean XP</td><td>Beckman Coulter Genomics</td><td>A63987</td><td></td></tr><tr><td>pHrodo BioParticles</td><td>Invitrogen</td><td>P35361</td><td></td></tr><tr><td>CCL4 Ensayo de qRT-PCR TaqMan</td><td>de Applied Biosystems Mm00443111_m1</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ensayo CCL5 TaqMan qRT-PCR</td><td>Applied Biosystems</td><td>Mm01302428_m1</td><td></td></tr><tr><td>PTGS2 Ensayo de qRT-PCR TaqMan de</td><td>Applied Biosystems Mm00478374_m1</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TNF Ensayo qRT-PCR</td><td>de Applied Biosystems</td><td>Mm00443258_m1</td><td></td></tr><tr><td>GAPDH Ensayo TaqMan qRT-PCR</td><td>Biosystems Aplicado</td><td>Mm99999915_g1</td><td></td></tr><tr><td>Pluronic F127</td><td>Sigma Chemical</td><td>2594628</td><td></td></tr><tr><td>Fluorinerte FC-40</td><td>Sigma Chemical</td><td>51142-49-5</td><td></td></tr><tr><td>Dímero de parileno C</td><td>Sistemas de recubrimiento especiales</td><td>28804-46-8</td><td></td></tr><tr><td>Teflón-AF</td><td>DuPont</td><td>AF1600</td><td></td></tr><tr><td>Cinta de poliimida</td><td>ULINE</td><td>S-11928</td><td></td></tr><tr><td>Sustratos de vidrio recubiertos de óxido de indio y estaño (ITO) Delta </td><td>Technologies</td><td>CB-40IN-1107</td><td></td></tr><tr><td>Cubo DMF Microcapilares de sílice fundida recubiertos de teflón</td><td>Polymicro Technologies TSU100375</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microcapilares de cámara de perfusión</td><td>Polymicro Technologies TSP530700</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubos y accesorios microcapilares</td><td>Sandia National Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubo de policarbonato</td><td>Paradigm Optics</td><td>CTPC100-500-5</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de jeringa de precisión de 8 puertos equipada con 30 mm (500 &#956; l capacidad) jeringas</td><td>Hamilton Company</td><td>54848-01</td><td></td></tr><tr><td>Instrumento de deposición de vapor Parylene-C</td><td>Sistemas de recubrimiento especiales</td><td>PDS 2010 Labcoter 2</td><td></td></tr><tr><td>Generador de función de alto voltaje</td><td>Trek</td><td>615A-1 615-3</td><td></td></tr><tr><td>MVX10 Microscopio</td><td>Olympus</td><td></td><td>Opcional (facilita el seguimiento de gotas en el concentrador DMF)</td></tr><tr><td>Cámara CCD digital QIClick</td><td>QImaging</td><td>QIClick-F-CLR-12</td><td>Opcional (facilita el seguimiento de gotas en el hub DMF)</td></tr></tbody></table>

una plataforma automatizada versátil para micro escala experimentos de estimulación celular

A Versatile Automated Platform for Micro-scale Cell Stimulation Experiments

Estudio de las células en cultivo (análisis in vitro) ha proporcionado datos importantes en los sistemas biológicos complejos. Métodos y equipos convencionales para el análisis in vitro son muy adecuadas para el estudio de un gran número de células (≥ 10 5) en volúmenes de escala ≥ mililitro (0,1 ml). Sin embargo, hay muchos casos en los que es necesario o deseable que reducir el tamaño cultura para reducir el consumo de las células de interés y / o reactivos necesarios para su cultura, estimulación, o de procesamiento. Desafortunadamente, los enfoques convencionales no soportan una manipulación precisa y reproducible de cultivos de micro-escala, y los sistemas automatizados de microfluidos basados ​​actualmente disponibles son demasiado complejas y especializadas para el uso rutinario por la mayoría de los laboratorios. Para hacer frente a este problema, hemos desarrollado una plataforma de tecnología simple y versátil para el cultivo automatizado, estimulación, y la recuperación de pequeñas poblaciones de células (100 - 2000 células) en el volumen de micro-escalas (1 - 20 l). La plataforma consta de un conjunto de microcapilares recubiertos de fibronectina (&quot;cámaras de perfusión de células&quot;), dentro de la cual se establecieron cultivos de micro-escala, mantienen, y se estimularon; un dispositivo digital de microfluidos (DMF) equipado con &quot;transferencia&quot; microcapilares (&quot;cubo central &quot;), el cual las células rutas y reactivos hacia y desde las cámaras de perfusión; una bomba de jeringa de alta precisión, que alimenta el transporte de materiales entre las cámaras de perfusión y el eje central, y una interfaz electrónica que proporciona control sobre el transporte de materiales, que es coordinado y automatizado a través de scripts predeterminados. Como un ejemplo, se utilizó la plataforma para facilitar el estudio de las respuestas transcripcionales provocados en las células inmunes al reto con bacterias. El uso de la plataforma nos ha permitido reducir el consumo de las células y los reactivos, minimizar la variabilidad experimento a experimento, y re-directos práctica laboral. Dadas las ventajas que ésta confiere, así como su accesibilidad y versatilidad, Oplataforma ur debe encontrar uso en una amplia variedad de laboratorios y aplicaciones, y ser especialmente útil para facilitar el análisis de las células y los estímulos que están disponibles sólo en cantidades limitadas.

Como una demostración de la plataforma automatizada, lo usamos para llevar a cabo un estudio en el que pequeñas poblaciones de células inmunes se cultivaron en cultivos de micro-escala, desafió con bacterias, y zadas para el análisis fuera de la plataforma de las respuestas pro-inflamatorias (Figura 2 ). Cada una de las seis cámaras de perfusión de células se sembró con 10 4 células inmunes (P388D.1 macrófagos murinos) se resuspendieron en 10 l de medio de crecimi...

Hemos desarrollado un cultivo de células automatizado y la plataforma de interrogación para experimentos de estimulación de células micro-escala. La plataforma ofrece un control sencillo, versátil y precisa en el cultivo y estimular las pequeñas poblaciones de células, y la recuperación de lisados ​​de análisis moleculares. La plataforma se adapta bien a los estudios que utilizan las células preciosos y / o reactivos.

Una plataforma automatizada versátil para Micro escala experimentos de estimulación celular

Study of cells in culture (in vitro analysis) has provided important insight into complex biological systems. Conventional methods and equipment for in ...

El objetivo general de este procedimiento es ensamblar y utilizar una plataforma basada en microfluídica semiautomatizada para cultivar y estimular pequeñas poblaciones de células y recuperar lisados celulares para análisis moleculares. Esto se logra primero estableciendo cultivos celulares a microescala en microcapilares recubiertos con fibronectina denominados cámaras de perfusión celular. El segundo paso consiste en conectar las cámaras de perfusión a un módulo de microfluídica digital o DMF, que proporciona un medio flexible para dirigir reactivos hacia y desde los cultivos celulares a microescala.A continuación, el módulo DMF suministra el estímulo de interés a las cámaras de perfusión y las células se incuban con el estímulo durante un tiempo predeterminado de exposición. Finalmente, las células se lisan por medios químicos y los lisados se recuperan en el módulo DMF para su análisis molecular. Los lisados recuperados luego se analizan mediante R-T-P-C-R cuantitativa para caracterizar la respuesta transcripcional de la población celular al estímulo.La principal ventaja de esta técnica frente a los métodos convencionales de cultivo celular es que permite realizar estudios de e

a-versatile-automated-platform-for-micro-scale-cell-stimulation

Research

Investigación

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingeniería

En este protocolo, se demuestra la fabricación de una amplia microactuator de mensajes desplazadas verticalmente en que se basa la tecnología, y cómo esta tecnología de base pueden ser modificados para llevar a cabo de alto rendimiento de cultivo de células mecánica dinámica, tanto en la cultura de dos dimensiones y tres dimensiones paradigmas.

Plataformas microfabricated para el cultivo celular mecánico dinámico

Este video demuestra el uso de un chip microfluídico recubierto de matriz extracelular para diferenciar células madre neurales y progenitoras o NPC a través de la estimulación eléctrica. Después de sembrarse y adherirse a la región recubierta, las NPC crecen y la aplicación de una corriente continua desencadena su diferenciación en neuronas, astrocitos y oligodendrocitos.

Diferenciación inducida por estimulación eléctrica de células madre neurales y progenitoras

Se presenta en este artículo una plataforma novela de estiramiento que se puede utilizar para investigar las respuestas de células individuales a complejo deformación mecánica biaxial anisotrópico y cuantificar las propiedades mecánicas de los tejidos biológicos.

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Aquí, presentamos un protocolo para aislar y cultivar células individuales con una plataforma microfluídica, que utiliza un nuevo concepto de diseño de micropozos para permitir el aislamiento de células individuales de alta eficiencia y el cultivo clonal a largo plazo.

Una plataforma microfluídica para el aislamiento de gran procesamiento de celda única y Cultura

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Simultánea estimulación eléctrica y mecánica para mejorar el potencial de las células cardiomiogenético

Este artículo proporciona métodos detallados para fabricar y caracterizar un dispositivo microfluídico de accionamiento neumático para la compresión de condrocitos.

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Generación de condiciones ambientales dinámicas utilizando un dispositivo microfluídico de alto rendimiento

Una nueva plataforma estática se utiliza para caracterizar la estructura proteica y los sitios de interacción en el entorno celular nativo utilizando una técnica de huella proteica llamada oxidación fotoquímica rápida en células de proteínas (IC-FPOP).

Incubadora de plataformas con etapa XY móvil: una nueva plataforma para implementar la oxidación fotoquímica rápida en células de proteínas

Presentamos un método para la estimulación química flexible y multimodal y el registro de la actividad neuronal simultánea de muchos gusanos Caenorhabditis elegans . Este método utiliza microfluídica, hardware y software de código abierto y análisis de datos automatizados supervisados para permitir la medición de fenómenos neuronales como la adaptación, la inhibición temporal y la diafonía de estímulos.

Estimulación multimodal automatizada y registro neuronal simultáneo de múltiples organismos pequeños

Este protocolo describe la edición miniaturizada del genoma CRISPR–Cas9 del receptor TCRα/β en células T humanas primarias utilizando 'DMF-ection', una plataforma de electroporación microfluídica digital (DMF). El método permite la edición genética paralela y de baja entrada y alta viabilidad y es además adaptable para la entrega de ARNm en esferoides 3D multicelulares.

Una plataforma digital de electroporación microfluídica para edición genómica CRISPR de baja entrada y transfección de ARNm en células T en suspensión y modelos de células 3D

Aprende a cultivar y estimular poblaciones celulares a pequeña escala mediante una plataforma microfluídica semiautomatizada. Este método permite recuperar lisados celulares para análisis moleculares con alta precisión y versatilidad.

Una plataforma automatizada versátil para Micro escala experimentos de estimulación celular

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