Un ensayo de exonucleasa basado en fluorescencia para caracterizar DmWRNexo, ortólogo de la exonucleasa WRN progeroide humana, y su aplicación a otras nucleasas

Este experimento utiliza un ensayo robusto y reproducible basado en fluorescencia para determinar la actividad de la exonucleasa. Incubar la enzima purificada con el sustrato de ADN fluorescente para permitir que la enzima degrade secuencialmente el ADN. A continuación, resuelva el ADN en un gel de urea acrilamida para separar los productos de degradación por tamaño.

A continuación, utilice imágenes de fluorescencia para identificar y cuantificar el alcance de la actividad de la exonucleasa. Los resultados analizados pueden determinar las condiciones de reacción preferidas del sustrato, el proceso y la actividad general de la enzima. La principal ventaja de esta técnica sobre las técnicas existentes basadas en radiactividad es que los sustratos de ADN son estables durante mucho tiempo, lo que permite una excelente reproducibilidad, disminuyendo el costo y aumentando la seguridad.