Contextuales y complementada el condicionamiento del miedo de prueba utilizando un sistema de análisis de vídeo en ratones

La prueba de condicionamiento contextual y agudo al miedo es una prueba conductual que se utiliza ampliamente para evaluar la capacidad de Lawrence para aprender. Recuerde las asociaciones entre una experiencia agresiva y las señales ambientales. Sin embargo, en esta prueba existen algunas diferencias metodológicas entre los lugares de trabajo, lo que puede resultar en la dificultad de comparar datos y en duplicar los resultados.

Para obtener datos más estables y tivos, es importante estandarizar el protocolo de prueba tanto como sea posible. En esto demostramos el protocolo de la prueba de campo. El test de funcionamiento del miedo es una prueba sencilla, sensible y fiable para evaluar la memoria.

Esta prueba se utiliza a menudo para comprender los mecanismos neurológicos y moleculares y el aprendizaje y la memoria, y también para evaluar la función cognitiva de posibles modelos de ratón de trastornos psiquiátricos como el trastorno postestrés y la esquizofrenia. En la prueba de comportamiento de enfrentamiento, que se mide como un índice de aprendizaje y la memoria se puntúa mediante la ización de observadores humanos, se utilizaron algunos sistemas automatizados para analizar el comportamiento de uso de forma automática. Desarrollamos un sistema de análisis de imágenes utilizando el programa de software basado en imagen FG e imagen A.

Estamos distribuyendo dicho programa de software y se puede descargar gratuitamente en esta dirección. En este presentamos nuestro protocolo de pruebas y el sistema de análisis automatizado. En primer lugar, mostramos cómo proteger el operador de la aplicación como imagen del programa de software.

En segundo lugar, demostramos los protocolos detallados de la prueba, incluida la prueba de contexto de condicionamiento y la prueba Q para el dispositivo que usa el sistema. Finalmente, presentamos los resultados actuales que indican que el sistema FD de imágenes N puede producir resultados altamente confiables. Ahora comencemos.

Comienza rápido en la prueba de condicionamiento del miedo. Se coloca un ratón en una cámara con piso nivelado. El OID se presenta como un auditor.

Cola de auditor durante 30 segundos. A continuación, se proporciona una descarga eléctrica. Este emparejamiento de una cola de auditor y la descarga de pie se da tres veces para mejorar la asociación entre la cola de auditor y la descarga de código eléctrico.

Durante la prueba, el comportamiento de congelación se mide como un índice de aprendizaje asociado y memoria injusta. En segundo lugar, después de 24 horas, el ratón se coloca en la misma cámara de acondicionamiento y se le califica por comportamiento de pulga. Para medir el miedo de control contextual, el ratón se transfiere a una G de forma diferente sin ninguna cola auditiva y, a continuación, se presenta la cola auditiva.

En esta prueba, la conducta de congelación se utiliza como un índice de la memoria de miedo agudo. Durante la prueba, el comportamiento del mouse se registra a través de una cámara conectada a una computadora. El comportamiento se juzga como congelante o no congelante.

Mediante el programa de software de imagen, el programa puede calcular el porcentaje de tiempo de congelación y el tráfico de distancia. Aquí, por ejemplo, se demuestra el análisis de imágenes durante la prueba. Las imágenes en vivo se capturan a una longitud por segundo.

Image of the crea una imagen binaria a partir de cada imagen en vivo para cada par. Con llamas sucesivas, la cantidad de área a través de la cual se movió el mouse se calcula mediante la imagen del programa. Cuando el área está por debajo de un cierto umbral, el comportamiento se juzga como congelación, que generalmente se define como una ausencia total de cualquier movimiento, excepto la respiración y difícil de superar.

El comportamiento de congelación que dura menos del umbral de tiempo definido no se considera inmovilizado. El valor umbral debe establecerse de antemano para que produzca el mejor ajuste entre los tiempos de congelación medidos por la imagen Z y las observaciones humanas. Cuando la cantidad de área es igual al umbral o X tres Z, se considera que el comportamiento es no congelante.

Aquí demostramos nuestro protocolo de prueba en ratones utilizando este sistema de análisis de video. En este protocolo, los operadores están construidos en una cámara cuadrada de rejilla con rejillas metálicas y descubierta con una imagen de plomo transparente. FD puede distinguir el sujeto oscuro de un fondo blanco en cada imagen de video capturada.

Pero este proceso nos permite analizar el comportamiento de congelación del sujeto que necesita colocar la cámara sobre un suelo blanco para analizar el comportamiento de ratones negros, buenos o negros directos. El comportamiento de congelación de los ratones de aluminio también se puede analizar mediante la imagen D utilizando rejillas de metal negro Bajo una regla negra, las luces de diodos emisores de luz se unen a la vela sobre el aparato. La regla de la cuadrícula se ilumina en 100 techos mediante luces LED.

Un altavoz conectado con el generador de tonos de ruido blanco está montado en una vela sobre la tapa. Un ruido blanco de 55 se presenta como una cola auditiva. Las rejillas están conectadas a un generador de choque para proporcionar descargas eléctricas de alimentos.

La prueba de viento de choque se establece en 0,3 millones de pares antes de que se inicie la prueba. La intensidad de la corriente en la red debe ser verificada por un metal porque la prueba de choque puede disminuir por una acumulación de fe y orina en los ratones, la cámara de prueba se coloca en un telar insonorizado para minimizar el ruido externo. Durante la prueba, la apelación se encuentra en un sonido diferente al que se realizan las pruebas de cono y contexto.

Está compuesto por una cámara que tiene propiedades diferentes a la cámara de cono. Proporcionando un contexto normal, es necesario cambiar los códigos sensoriales tanto como sea posible para que el ratón perciba el contexto del Nobel como no relacionado con la cámara de contención. En este protocolo, el aparato es una cámara triangular acri con una regla de acri plana y el cable transparente.

Un altavoz se monta en una vela sobre el plomo para presentar en una o tres colas. Esta cola es la misma señal que se proporcionó a los ratones en hawing. El nivel de iluminación del suelo se ajusta para estudiar el aspecto.

Cada cámara es un cubo con una cabina de carga montada en una vela, cámara de dispositivo para monitorear el comportamiento del mouse. Antes de que comience cada prueba, las paredes y los pisos acrílicos se limpian con una lengua, por lo que se mezclan con agua bruta súper alta y las rejillas se limpian con etanol al 70%. Para evitar un sesgo basado en el corte olfativo, las rejillas se limpian con Ethan en lugar de agua bruta súper exagerada para injuri que las rejillas no deducen su conductividad eléctrica debido a los últimos dos a cuatro ratones, un paquete de casa en una sala de almacenamiento con temperatura controlada para reducir los posibles aumentos del transporte de la jaula en el comportamiento y para adaptar los ratones al entorno experimental.

La jaula que contenía los ratones se transfirió a una sala de espera insonorizada al menos 30 minutos antes de que comience cada prueba. Todos los experimentos deben realizarse durante el mismo período de tiempo para minimizar las variaciones de comportamiento que se pueden producir al realizar pruebas en diferentes momentos. Los ratones de cada grupo deben ser probados en un contrapeso para reducir los efectos potenciales del tiempo experimental.

Bajo el orden de prueba del sujeto sobre el rendimiento conductual, la imagen D puede controlar un máximo de cuatro aparatos que prueban de ratones simultáneamente mientras que el investigador para ahorrar tiempo y digital para deducir en los efectos potenciales del procedimiento experimental sobre el comportamiento del ratón. Antes de que comience la sesión continua, ejecute el software de aplicación A FD. Seleccione el menú de enchufe FD concerniente y FD en línea y configure los valores de los parámetros establecidos paso a paso de la siguiente manera.

Paso uno, el ID del proyecto especifica la carpeta donde desea almacenar la fecha de los archivos. Paso dos, tipo de nombre de sesión. Cualquier palabra en el cuadro de sesión es la fecha experimental y el texto de referencia a archivar en el que se escriben en el cuadro de referencia la hora de inicio y la duración del ruido blanco y el choque alimentario.

El texto de deferencia al archivo debe prepararse en la carpeta de deferencia de la imagen, la carpeta de antemano. Paso tres ajustes de parámetros. Introduzca los valores de los parámetros, como la duración, el tiempo y los criterios de congelación, tal y como se muestran en la película.

Paso cuatro, identificación del sujeto. Ingrese la identificación del sujeto. Paso cinco, la configuración de la cámara contrasta el brillo y el contraste de la imagen capturada.

Paso seis, configuración del umbral. Primero para medir la distancia recorrida desde las imágenes consecutivas, ajuste el valor principal del umbral del programa, que está configurado para segmentar las imágenes en partículas negras y fondo blanco. La distancia recorrida se calcula entre cada conjunto con coordenadas XY para el centro de gravedad con la partícula en las imágenes consecutivas.

En segundo lugar, el mayor para el comportamiento de las imágenes consecutivas, simplemente asumiendo x valor adicional del programa que está configurado para segmentar las imágenes en partículas negras debajo del fondo y luego calcular la cantidad de área de regiones no superpuestas entre partículas de cuyo par de ventanas de entrada de imágenes consecutivas se muestra la región no superpuesta. Cambiar las medias expresas al valor en la cantidad de valor de la región debe estar por debajo del valor del grito ING cuando el mouse muestra el comportamiento ing. Estos valores deben ajustarse para que los datos por fatiga de imagen coincidan con los de la plantilla por el propio humano.

El paso siete, establecido en el campo de captura, especificó el campo, la cámara que desea capturar después de hacer clic con el botón rectangular en la caja de herramientas para rectangular alrededor del piso de la misma. Cámara en la ventana de imagen en vivo. A continuación, seleccione la novela de cámara y haga clic en el botón establecer para finalmente hacer clic en el botón completar.

Una vez que se hayan definido los ajustes de los parámetros, se debe realizar una prueba preparatoria utilizando ratones de práctica antes de la primera prueba de la fecha para determinar si el sistema de análisis de imágenes y qué generadores de choque de ruido funcionan con esos problemas mover la jaula de peine que contiene los ratones de práctica a la penumbra de prueba de sonido desde la penumbra adyacente a la penumbra en espera y colocar cada ratón en la cámara de acondicionamiento inmediatamente después de colocar los ratones en la cámara, haga clic en la parte inferior de inicio de la imagen de Z.Los ratones pueden explorar completamente la cámara durante 120 segundos. Después. Durante 30 segundos se presenta un ruido blanco en forma de cola auditiva y durante los dos últimos segundos del sonido, se da un choque alimentario a los ratones. Este procedimiento se repite tres veces en sesión para reforzar la asociación entre la cola y el choque alimentario.

Las mascarillas se dejan en la cámara durante 90 segundos después del último emparejamiento. Establecer aún más la asociación entre el contexto de la cámara y la experiencia pasiva. Después de 480 segundos de fuga, los ratones se devuelven a la jaula de inicio y la jaula se devuelve al estante de la sala de espera.

Después de cada prueba, limpie cuidadosamente las cámaras y la rejilla. A continuación, haga clic en el botón siguiente análisis y repita la sesión en los ratones de prueba. Aproximadamente 24 horas después del traslado de la jaula a los ratones a una sala de telar de espera insonorizada.

El telar de espera al menos 30 minutos antes de que comience cada prueba. Imagen larga de la y establezca los valores de los parámetros del software de la misma manera que en el acondicionamiento. Sin embargo, establezca el tiempo de duración en 300 segundos y seleccione 35 texto para archivar para la prueba contextual.

35 El texto del archivo está en blanco. Coloque el mouse en la cámara de acondicionamiento y haga clic en la parte inferior de inicio. A los ratones se les permite explorar completamente la cámara durante 300 segundos sin ninguna presentación de estímulos.

Después de 300 segundos, lleva a los ratones a su jaula de casa y limpia las cámaras. A continuación, haga clic en la siguiente parte inferior del análisis y repita el procedimiento en la imagen larga de los ratones de prueba de D y establezca los valores de los parámetros de la misma manera que en el texto de referencia continuo para archivar para esta prueba y establezca el tiempo de duración hasta 360 segundos. Este es un texto de referencia para archivar para esta prueba.

Coloque cada ratón en la cámara triangular y haga clic en el botón de inicio de la imagen Z.Todos los ratones deben explorar la cámara en los primeros tres minutos. No se presenta ruido blanco ni choque en los pies. Esta cámara tiene diferentes propiedades que proporcionan un nuevo contexto y se relacionan con la cámara continua.

En esta cámara, por lo general, debe moverse mucho y no mostrar comportamiento. Al final de los primeros tres minutos, el ruido blanco que se presenta en Concho se proporciona a los ratones durante tres minutos. Durante la presentación del auditor, el auditor pone en cola a los ratones o exhibe un comportamiento escrito después de que 360 segundos ha estallado, devuelve a los ratones a su jaula doméstica y devuelve la jaula al estante de la sala de espera.

Después de la prueba, limpie las cámaras cuidadosamente. A continuación, haga clic en la siguiente parte inferior del análisis y repita el procedimiento con los ratones de prueba. Este video muestra que el paso de la congelación analizado por la imagen del sistema parece estar más estrechamente relacionado con el pensamiento medido por un observador humano.

La observación fue confirmada por los detalles que mostraron que el porcentaje de arrendamiento medido por la imagen física en cada prueba estaba altamente correlacionado o puntuado por el observador humano. Además, esta figura demuestra que las diferencias entre los porcentajes de congelación medidos por las observaciones humanas y la imagen del sistema en su imagen fueron las más pequeñas. Estos resultados indicaron que el porcentaje de congelación medido por la imagen del sistema era similar a los obtenidos por la observación humana y que la precisión medindo la cantidad de razón por la imagen Z es alta. Bien.

¿Qué te pareció? Como puede ver en la prueba, el análisis de comportamiento estándar se puede realizar fácilmente. Hay algunos consejos y puntos importantes para usar la imagen del sistema, así que permítanme preguntarle al respecto. Bien.

En primer lugar, ¿qué le pareció el procedimiento de prueba de la imagen del sistema? Creo que nuestro procedimiento de prueba es muy simple y la imagen del sistema es una herramienta útil para medir la razón, el comportamiento de manera precisa y rápida. Cualquier persona puede utilizar fácilmente un programa de software con una formación previa Como resultado, este sistema puede servir para evaluar su memoria en muchos meses en poco tiempo, lo que nos ahorrará tiempo y más adelante.

Ya veo. Entonces, ¿hay algo con lo que debamos tener cuidado cuando realizamos la prueba? Sí, porque el operador indica que es importante obtener la imagen más nítida para medir el comportamiento con precisión, por lo que debe ajustar la longitud de la cámara y las cosas de escritura belo.

También en el estudio del programa, es necesario establecer cuidadosamente los valores sexuales y los criterios de razón para juzgar si el comportamiento puede o no ser calificado como razón. Es importante que el resultado haya sido inmediato, el programa como con el pensamiento de ellos por la observación humana Como se muestra en el presente resultado. Bien. Como puede ver, este puede ser un artículo, proporcionar información detallada sobre el procedimiento de prueba y el uso del programa de software.

Esperamos que este pueda ser el artículo. Promover su comprensión de la prueba y contribuir a la estandarización del protocolo.