Paraplejia reproducible por la oclusión de la aorta torácica en un modelo murino de la médula espinal por isquemia-reperfusión

El objetivo general del siguiente experimento es estudiar los efectos de la isquemia de la médula espinal en un modelo murino. Esto se logra primero insertando una sonda de láser doppler sobre la arteria femoral. A continuación, se realiza la esternotomía para acceder al arco aórtico y a la arteria subclavia izquierda.

Luego se realiza una disección cuidadosa de la aorta y las arterias subclavias con el fin de reducir adecuadamente el flujo sanguíneo arterial hacia la médula espinal. Se obtienen los resultados. El cho, un déficit neurológico posoperatorio, que se basa en la puntuación del ratón Baso.

La principal ventaja de esta técnica frente a otros métodos existentes, como la toracotomía lateral, es que no se viola el espacio pleural. Este método puede ayudar a responder preguntas sobre la fisiopatología de la médula espinal, la lesión por isquemia de perfusión y a proporcionar posibilidades para intervenciones farmacológicas. La implicación de esta técnica se extiende hacia terapias para prevenir la paraplejia tras isquemia medular.

Aunque este método puede proporcionar información sobre la paraplejia, que complica la cirugía torácica, también puede aplicarse a otros procesos patológicos que causan isquemia aguda de la médula espinal, como la hipotensión o la patología vascular. En general, las personas nuevas en esta técnica tendrán dificultades con la disección del arco aórtico porque se requiere extremo cuidado para evitar la muerte, hemorragia o neumotórax. Así, primero consideramos esta técnica tras enfrentar varias dificultades con el abordaje de toracotomía lateral, que está ampliamente publicado en la literatura, pero que en nuestros animales se asoció con una mortalidad más alta.

La demostración visual de este método es fundamental, ya que se requiere extrema precaución durante la disección mediastínica para prevenir la mortalidad intraoperatoria. Después de anestesiar un ratón según el protocolo descrito en el texto, asegurándose de que esté suficientemente sedado y eliminando el vello de la región torácica media y de la superficie ventral del extremo inferior izquierdo, inserte una sonda rectal lubricada en el recto del ratón y fíjela en su lugar a la camilla quirúrgica. Ajuste la camilla calefactora para mantener una temperatura rectal objetivo de 36,5 grados Celsius.

A continuación, realice una pequeña incisión sobre la arteria femoral y separe la piel del tejido subcutáneo. Luego, inserte una sonda de doppler láser sobre la arteria femoral. Ajuste la posición de la sonda hasta que el monitor de perfusión registre más de 800 unidades de perfusión para llevar a cabo la disección del arco aórtico y la arteria subclavia.

Realice una incisión cutánea de dos centímetros por encima de la escotadura esternal y separe cuidadosamente la piel del tejido subcutáneo. Libere la glándula submandibular si ocurre sangrado. Utilice un hisopo de algodón para aplicar una presión suave sobre el plano avascular.

Divida la glándula submandibular a través de la línea media utilizando pinzas. Levante suavemente el esternón y con tijeras realice cuidadosamente una esternotomía media de un centímetro a través de la línea media del esternón. Coloque cinco suturas de retracción en cada lado en el borde del esternón y retraja lateralmente el esternón asegurando las suturas a la mesa de operaciones.

A continuación, mediante disección romo, libere los músculos esternocleidomastoideos a lo largo de la tráquea. Luego use tijeras para dividir el músculo esternocleidomastoideo izquierdo y mejorar la exposición. Diseque el timo del tejido circundante.

Continúe con la disección romo hasta visualizar los grandes vasos. Con extrema precaución para evitar entrar en el espacio pleural, coloque luego pinzas vasculares en el arco aórtico y en la arteria subclavia izquierda. Verifique que el flujo distal se haya interrumpido adecuadamente, lo cual se observará como una reducción mayor al 90 % en las unidades de perfusión.

Continúe con la oclusión durante cuatro a ocho minutos. Cuando haya transcurrido el tiempo, retire la pinza vascular y verifique la hemostasia para cerrar la esternotomía y la piel. Comience retirando el punto de tracción del lado izquierdo del ratón.

Utilice la sutura de retracción adecuada para cerrar la esternotomía y una sutura continua de calibre cinco para cerrar la piel. Permita que el ratón se recupere en una jaula colocada sobre una almohadilla calefactora antes de devolverlo a una jaula normal con acceso a alimento y agua. Vigílelo en busca de signos de dificultad respiratoria y, si es necesario, practique la eutanasia según el protocolo descrito en el texto.

Finalmente, utilice la escala Baso para ratones de locomoción para monitorear al animal. A intervalos de 12 horas, los ratones fueron sometidos a cirugía simulada o a oclusión aórtica durante cuatro a ocho minutos. Y tras la intervención quirúrgica, los animales fueron evaluados mediante el sistema de puntuación Baso para ratones que se muestra aquí.

Este gráfico muestra que los ratones que se sometieron a una cirugía simulada no presentaron déficits funcionales observables en ningún momento después de la operación. Los ratones sometidos a isquemia moderada tuvieron una función de las extremidades traseras casi normal a las 12 horas, con una disminución funcional progresiva hasta la parálisis completa a las 48 horas. Y los ratones del grupo de isquemia prolongada presentaron parálisis completa tras la cirugía, sin ninguna función recuperable.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo diseccionar de forma segura el arco aórtico y reducir adecuadamente el flujo sanguíneo arterial de la médula espinal.