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DOI: 10.3791/50935-v
Mazen Amatoury1, Vera Merheb1, Jessica Langer1, Xin Maggie Wang2, Russell Clive Dale1, Fabienne Brilot1
1Institute for Neuroscience and Muscle Research, The Kids Research Institute at the Children's Hospital at Westmead,The University of Sydney, 2Flow Cytometry Centre,Westmead Millennium Institute for Medical Research
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Durante los últimos años, los ensayos basados en células vivas se han utilizado con éxito para detectar anticuerpos contra antígenos de superficie y conformacionales. Aquí se describe un método que utiliza el flujo de alto rendimiento citometría permite el análisis de grandes cohortes de pacientes. La detección de nuevos anticuerpos será mejorar el diagnóstico y el tratamiento de trastornos del sistema inmune-mediada.
El objetivo general del siguiente experimento es detectar anticuerpos neuronales anti D, dos R o N-M-D-A-R en muestras de pacientes utilizando un ensayo celular de citometría de flujo de alto rendimiento. Esto se logra mediante la subadherencia, la secuencia completa de CDNA de D humano dos R o N-M-D-A-R dentro de un plásmido. Como segundo paso, se transfecta una línea celular humana, lo que conduce a la expresión de antígenos neuronales en la superficie celular.
A continuación, las células transfectadas se incuban con suero del paciente y un anticuerpo secundario adecuado antes de la adquisición de la citometría de flujo. Para detectar la unión de anticuerpos a los antígenos de la superficie celular, los resultados se obtienen mediante el análisis de citometría de flujo. Este nuestro ensayo basado en células de citometría de flujo de tres puertos es rápido, cuantitativo y eficiente para grandes cohortes de muestras de pacientes.
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