Name: Enterrar Mármol y Nestlet Trituración como pruebas de Conductas repetitivas, compulsivo-como en ratones (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-12-24T13:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: Aprende a evaluar comportamientos compulsivos en ratones mediante los tests de enterrar mármoles y triturar nidos. Estos métodos cuantifican conductas repetitivas para modelar trastornos psiquiátricos humanos como el TOC.

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Este trabajo fue apoyado por subvenciones del Departamento de Asuntos de Veteranos y los Institutos Nacionales de Salud.

Todos los protocolos con animales se llevaron a cabo en estricta conformidad con las recomendaciones de la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio de los Institutos Nacionales de Salud. Los protocolos fueron aprobados por el Comité de Cuidado y Uso Institucional de la Universidad Estatal de Wayne (Número de Permiso A3310-01).
1. Preparación de jaulas para enterrar mármol y triturar nidos
<ol>
	<li>Utilice jaulas para ratas de policarbonato estándar (26 cm x 48 cm x 20 cm) con cubiertas de filtro ajustadas para la prueba de enterramiento de mármol. Agregue material de cama de ratón fresco y sin perfume a cada jaula a una profundidad de 5 cm y nivele la superficie de la cama insertando otra jaula del mismo tamaño en la superficie de la cama. Esto tiene la ventaja adicional de imprimir una plantilla de líneas paralelas en la superficie del lecho que se puede utilizar para la colocación de mármol.</li>
	<li>Coloque suavemente canicas de juguete de vidrio estándar (estilos y colores variados, 15 mm de diámetro, 5,2 g de peso) sobre la superficie de la ropa de cama en 5 filas de 4 canicas (ver Figura 1A). Lave las canicas con detergente suave de laboratorio, enjuague exhaustivamente con agua destilada y desionizada y seque antes de cada uso.</li>
	<li>Utilice jaulas de policarbonato estándar para ratas (19 cm x 29 cm x 13 cm) con cubiertas de filtro ajustadas para la parte superior del filtro para la prueba de trituración de nidos. Añada material de cama de ratón fresco y sin perfume a cada jaula hasta una profundidad de 0,5 cm y empaque la ropa de cama insertando otra jaula del mismo tamaño en la superficie de la cama.</li>
	<li>Pese los nidos de fibra de algodón disponibles comercialmente (5 cm x 5 cm, 5 mm de grosor, ~ 2,5 g cada uno) en una balanza analítica y coloque un nido encima del lecho en cada jaula de prueba (consulte la Figura 3A).</li>
	<li>Establezca cronómetros o temporizadores para cronometrar la duración de las sesiones (30 minutos para cada prueba).</li>
</ol>
2. Manejo de animales antes de la prueba
<ol>
	<li>Aloje a los ratones individualmente o en grupos en una habitación con un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas. Proporcionar a todos los ratones comida y agua ad libitum. Manipule los ratones con cuidado durante tres a cinco días antes de la prueba. Use ratones de ambos sexos para ambas pruebas.</li>
	<li>Realice pruebas de comportamiento entre las 9:00 a.m. y las 4:00 p.m. y transporte todas las jaulas domésticas que contengan ratones a la sala de pruebas 60 minutos antes del inicio de las pruebas.</li>
</ol>
3. Prueba de enterramiento de mármol
<ol>
	<li>Coloque un ratón en una esquina de la jaula que contenga canicas, teniendo cuidado de colocar el ratón en la ropa de cama lo más lejos posible de las canicas, y coloque la cubierta superior del filtro en la jaula. Evite comer y beber agua durante la prueba. Deje que el ratón permanezca en la jaula sin ser molestado durante 30 minutos.</li>
	<li>Retire el ratón y devuélvalo a su jaula de origen después de completar la prueba, teniendo mucho cuidado de no mover o desalojar las canicas en el proceso de sacar al sujeto de la jaula.</li>
	<li>Evaluadores de tareas (2-3) ciegos a las condiciones de tratamiento o al genotipo del ratón que se está probando para contar el número de canicas enterradas. Marca una canica como enterrada si dos tercios de su superficie están cubiertos por ropa de cama. Puntuaciones medias del número de canicas enterradas por cada ratón.</li>
	<li>Recupera las 20 canicas de la ropa de cama. Deseche la ropa de cama.</li>
</ol>
4. Prueba de trituración de nestlets
<ol>
	<li>Coloque un ratón en una jaula que contenga un solo nido prepesado y coloque la cubierta superior del filtro en la jaula. Evite comer y beber agua durante la prueba. Deje al ratón intacto en la jaula con el nido durante 30 minutos.</li>
	<li>Retire el mouse y devuélvalo a su jaula de inicio después de completar la prueba. Retire el material restante del nido intacto de la jaula con pinzas y deje secar el O/N.</li>
	<li>Pesa el nido restante sin triturar y divide este peso por el peso inicial para calcular el porcentaje de nido triturado. Si lo desea, marque la forma del nido producido por el ratón sujeto utilizando una escala de calificación de nido definitiva de 5 puntos17, pero teniendo en cuenta que esta escala generalmente está destinada a calificar la construcción de nidos, no la trituración obsesiva.</li>
	<li>Deseche el material restante de los nidos triturados y la ropa de cama.</li>
</ol>

<ol><li>Chamberlain, S. R., Blackwell, A. D., Fineberg, N. A., Robbins, T. W., Sahakian, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuropsychology+of+obsessive+compulsive+disorder%3A+the+importance+of+failures+in+cognitive+and+behavioural+inhibition+as+candidate+endophenotypic+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Biobehav.+Rev%22%5BJournal%5D)">The neuropsychology of obsessive compulsive disorder: the importance of failures in cognitive and behavioural inhibition as candidate endophenotypic markers.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 29, 399-419 (2005).</li>
<li>McGuire, J. F., Lewin, A. B., Horng, B., Murphy, T. K., Storch, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nature%2C+assessment%2C+and+treatment+of+obsessive-compulsive+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Postgrad.+Med%22%5BJournal%5D)">The nature, assessment, and treatment of obsessive-compulsive disorder.</a> Postgrad. Med. 124, 152-165 (2012).</li>
<li>Fineberg, N. A., Brown, A., Reghunandanan, S., Pampaloni, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence-based+pharmacotherapy+of+obsessive-compulsive+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Neuropsychopharmacol%22%5BJournal%5D)">Evidence-based pharmacotherapy of obsessive-compulsive disorder.</a> Int. J. Neuropsychopharmacol. 15, 1173-1191 (2012).</li>
<li>Dove, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medications+for+adolescents+and+young+adults+with+autism+spectrum+disorders%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Medications for adolescents and young adults with autism spectrum disorders: a systematic review.</a> Pediatrics. 130, 717-726 (2012).</li>
<li>Doyle, C. A., McDougle, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacotherapy+to+control+behavioral+symptoms+in+children+with+autism%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin.+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Pharmacotherapy to control behavioral symptoms in children with autism.</a> Expert Opin. Pharmacother. 13, 1615-1629 (2012).</li>
<li>Albelda, N., Joel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+animal+models+of+obsessive+compulsive+disorder%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Current animal models of obsessive compulsive disorder: an update.</a> Neuroscience. 211, 83-106 (2012).</li>
<li>Albelda, N., Joel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+obsessive-compulsive+disorder%3A+Exploring+pharmacology+and+neural+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Biobehav.+Rev%22%5BJournal%5D)">Animal models of obsessive-compulsive disorder: Exploring pharmacology and neural substrates.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 36, 47-63 (2012).</li>
<li>Wang, L., Simpson, H. B., Dulawa, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+validity+of+current+mouse+genetic+models+of+obsessive-compulsive+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Assessing the validity of current mouse genetic models of obsessive-compulsive disorder.</a> Behav. Pharmacol. 20, 119-133 (2009).</li>
<li>Joel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+animal+models+of+obsessive+compulsive+disorder%3A+a+critical+review%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Neuropsychopharmacol.+Biol.+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Current animal models of obsessive compulsive disorder: a critical review.</a> Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 30, 374-388 (2006).</li>
<li>Witkin, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+obsessive-compulsive+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Animal models of obsessive-compulsive disorder.</a> Curr. Protoc. Neurosci. 30, 1-9 (2008).</li>
<li>Deacon, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digging+and+marble+burying+in+mice%3A+simple+methods+for+in+vivo+identification+of+biological+impacts%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Digging and marble burying in mice: simple methods for in vivo identification of biological impacts.</a> Nat. Protoc. 1, 122-124 (2006).</li>
<li>Moy, S. S., Nadler, J. J., Magnuson, T. R., Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+autism+spectrum+disorders%3A+the+challenge+for+behavioral+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Med.+Genet.+C+Semin.+Med.+Genet%22%5BJournal%5D)">Mouse models of autism spectrum disorders: the challenge for behavioral genetics.</a> Am. J. Med. Genet. C Semin. Med. Genet. 142, 40-51 (2006).</li>
<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+behavioral+assays+relevant+to+the+symptoms+of+autism%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mouse behavioral assays relevant to the symptoms of autism.</a> Brain Pathol. 17, 448-459 (2007).</li>
<li>Silverman, J. L., Yang, M., Lord, C., Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+phenotyping+assays+for+mouse+models+of+autism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Behavioural phenotyping assays for mouse models of autism.</a> Nat. Rev. Neurosci. 11, 490-502 (2010).</li>
<li>Angoa-Perez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+depletion+of+brain+5HT+reveals+a+common+molecular+pathway+mediating+compulsivity+and+impulsivity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Genetic depletion of brain 5HT reveals a common molecular pathway mediating compulsivity and impulsivity.</a> J. Neurochem. 121, 974-984 (2012).</li>
<li>Kane, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+genetically+depleted+of+brain+serotonin+display+social+impairments%2C+communication+deficits+and+repetitive+behaviors%3A+possible+relevance+to+autism%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Mice genetically depleted of brain serotonin display social impairments, communication deficits and repetitive behaviors: possible relevance to autism.</a> PLoS One. 7, (2012).</li>
<li>Deacon, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+nest+building+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Assessing nest building in mice.</a> Nat. Protoc. 1, 1117-1119 (2006).</li>
<li>Thomas, D. M., Angoa Perez,, Francescutti-Verbeem, D. M., Shah, M. M., Kuhn, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+endogenous+serotonin+in+methamphetamine-induced+neurotoxicity+to+dopamine+nerve+endings+of+the+striatum%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">The role of endogenous serotonin in methamphetamine-induced neurotoxicity to dopamine nerve endings of the striatum.</a> J. Neurochem. 115, 595-605 (2010).</li>
<li>Gyertyan, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+marble+burying+response%3A+marbles+serve+to+measure+digging+rather+than+evoke+burying%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Analysis of the marble burying response: marbles serve to measure digging rather than evoke burying.</a> Behav. Pharmacol. 6, 24-31 (1995).</li>
<li>Thomas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marble+burying+reflects+a+repetitive+and+perseverative+behavior+more+than+novelty-induced+anxiety%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Marble burying reflects a repetitive and perseverative behavior more than novelty-induced anxiety.</a> Psychopharmacology. 204, 361-373 (2009).</li>
<li>Hayashi, E., Kuratani, K., Kinoshita, M., Hara, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacologically+distinctive+behaviors+other+than+burying+marbles+during+the+marble+burying+test+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Pharmacologically distinctive behaviors other than burying marbles during the marble burying test in mice.</a> Pharmacology. 86, 293-296 (2010).</li>
</ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros contrapuestos.

Las pruebas de entierro de mármol y trituración de nidos son buenos ejemplos de métodos conductuales para estudiar comportamientos repetitivos y compulsivos en ratones. Ambas pruebas muestran una excelente validez aparente, de constructo y predictiva para los trastornos humanos que modelan6-11. Estos comportamientos repetitivos son naturales y espontáneos en roedores y su frecuencia e intensidad pueden variar después de modificaciones genéticas, como se muestra actualmente, o después de una lesión en la cabeza...

Los modelos de ratón de comportamientos humanos, y en particular de trastornos psiquiátricos, constituyen enfoques experimentales importantes y esenciales para el estudio de los mecanismos de la enfermedad y para el desarrollo de nuevas terapias. Muchas enfermedades psiquiátricas siguen siendo extremadamente difíciles de modelar en animales (por ejemplo, la esquizofrenia). Sin embargo, los animales exhiben un gran número de comportamientos naturales y distintivos que pueden vincularse fácilmente con comportamientos similares en los humanos. El movimiento o la actividad locomotora es un ejemplo de un comportamiento en los animales que tiene una contraparte en los humanos. Los roedores a menudo se involucran en una variedad de comportamientos repetitivos y los ejemplos incluyen el acicalamiento o la excavación. Una condición psiquiátrica que implica la exhibición de comportamientos recurrentes y no deseados en los seres humanos es el trastorno obsesivo-compulsivo (TOC). Los comportamientos que son muy característicos del TOC incluyen revisar, contar y lavarse o aseo en exceso. El TOC es un trastorno psiquiátrico altamente prevalente (afecta al 1-3% de la población) y debilitante1. Se ha utilizado un gran número de enfoques farmacológicos y conductuales para tratar el TOC. Muchos de ellos no proporcionan un alivio a largo plazo y la recaída es común al final de un régimen de tratamiento2,3. Otra condición psiquiátrica que involucra la expresión de conductas repetitivas es el trastorno del espectro autista (TEA). Los TEA se caracterizan por déficits en la comunicación y la interacción social y comportamientos repetitivos y estereotipados que incluyen girar, mecerse, mover los dedos o aletear y movimientos corporales complejos. Los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades han estimado que aproximadamente 1 de cada 88 niños son diagnosticados con TEA. Las opciones de tratamiento para este trastorno son extremadamente limitadas en número y eficacia4,5. La intensidad y la frecuencia de la aparición de comportamientos repetitivos en el TOC y el TEA pueden llegar a ser lo suficientemente grandes como para desplazar la mayoría de los otros comportamientos normales e interacciones sociales en pacientes con estas afecciones. A la luz de la prevalencia y la naturaleza debilitante de las afecciones psiquiátricas caracterizadas por comportamientos repetitivos, y teniendo en cuenta la escasa comprensión de sus causas y las limitadas opciones de tratamiento, el uso de modelos animales para estudiar estos comportamientos adquiere una urgencia adicional.
En los últimos 30 años se ha desarrollado un gran número de modelos animales de comportamientos repetitivos como se observa en el TOC y el TEA, y se han publicado numerosas reseñas excelentes que describen estos modelos6-14. En general, estos modelos establecidos pueden clasificarse en genéticos, farmacológicos, del neurodesarrollo y conductuales y la mayoría muestran buena cara, validez de constructo y predictiva6,7. Hemos utilizado dos modelos de comportamiento, el entierro de canicas y la trituración de nidos, para evaluar los comportamientos repetitivos en ratones genéticamente depletos de serotonina15,16. Estos métodos tienen numerosas ventajas, entre las que destacan su facilidad de uso, la precisión con la que se pueden puntuar los comportamientos, la exhibición espontánea de estos comportamientos en roedores y su uso en el cribado de alto rendimiento de ratones modificados genéticamente para detectar fenotipos de comportamiento anormales. Además, cada prueba se lleva a cabo en jaulas estándar y conocidas para roedores que contienen el mismo lecho que se usa en las jaulas domésticas de los sujetos, lo que minimiza la necesidad de que los ratones se habituen a nuevas cámaras de prueba. La restricción de alimentos y/o agua no es necesaria para "motivar" a los ratones a rendir. La prueba de enterramiento de mármol aprovecha la propensión de los ratones a cavar en entornos naturales (por ejemplo, madrigueras, túneles de escape) y en el lecho de jaulas estándar, y la prueba de trituración de nidos aprovecha el hecho de que los ratones son animales de anidación por naturaleza que construyen nidos para protegerse a sí mismos y a sus crías contra las condiciones ambientales (p. ej.sonido, luz, temperatura). Utilizando materiales de alojamiento para roedores no especializados y comúnmente disponibles, las tareas de enterramiento de mármol y trituración de nidos son ensayos de comportamiento simples y poderosos de comportamientos repetitivos y compulsivos en ratones.

<table><tbody><tr><td>Canicas de juguete de vidrio</td><td>juguetería local N</td><td>/A</td> estilos <td>variados, colores, transparentes y opacos</td></tr><tr><td>Nestlets</td> Jaula de ratón de la serie <td>Ancare</td><td>NES3600</td><td></td></tr><tr><td>N10</td><td>Jaula estándar para roedores Ancare</td><td></td><td>N10HT</td> con tapa de alambre</tr><tr><td>Jaula para ratas de la serie R20</td><td>Ancare</td><td>R20</td><td>jaula estándar para roedores con tapa de alambre</td></tr><tr><td>Bed-o'Cobs</td><td>Los Andersons</td><td>8B</td><td>Lecho estándar para roedores a granel, 1/8 pulg</td></tr></tbody></table>

enterrar mármol y nestlet trituración como pruebas de conductas repetitivas, compulsivo-como en ratones

Marble Burying and Nestlet Shredding as Tests of Repetitive, Compulsive-like Behaviors in Mice

El trastorno obsesivo-compulsivo (TOC) y los trastornos del espectro autista (TEA) son afecciones psiquiátricas graves y debilitantes, y cada una constituye un importante problema de salud pública, especialmente en los niños. Ambas condiciones se destacan por la expresión repetida de comportamientos sin sentido. Las personas con TOC a menudo muestran controles, lavado frecuente de manos y conteo. Los niños con TEA también realizan golpecitos repetitivos, aleteo de brazos o manos y mecedores. Estos comportamientos pueden variar ampliamente en intensidad y frecuencia de expresión. Las formas más intensas de comportamientos repetitivos pueden incluso provocar lesiones (por ejemplo, aseo excesivo, lavado de manos y autoestimulación). Por lo tanto, estos comportamientos son muy perturbadores y dificultan el discurso social normal. Las opciones de tratamiento para las conductas repetitivas en el TOC y los TEA son algo limitadas y existe un gran interés en desarrollar terapias más efectivas para cada condición. En las últimas tres décadas se han desarrollado numerosos modelos animales para evaluar comportamientos similares a los compulsivos. Quizás los modelos animales con mayor validez y facilidad de uso son la prueba de enterramiento de mármol y la prueba de trituración de nidos. Ambas pruebas aprovechan el hecho de que los comportamientos objetivo ocurren espontáneamente en ratones. En la prueba de entierro de mármol, se colocan 20 canicas sobre la superficie de un lecho limpio. El número de canicas enterradas en una sesión de 30 minutos es calificado por investigadores ciegos al tratamiento o al estado de los sujetos. En la prueba de trituración de nidos, se pesa previamente un nido compuesto de fibra de algodón en pulpa y se coloca encima de la cama de la jaula y se determina la cantidad de nido que permanece intacta después de una sesión de prueba de 30 minutos. A continuación, describimos los protocolos y mostramos la documentación cinematográfica del entierro de mármol y la trituración de nidos. Ambas pruebas se puntúan de forma fácil y precisa, y cada una es sensible a pequeños cambios en la expresión de comportamientos compulsivos que resultan de manipulaciones genéticas, enfermedades o lesiones en la cabeza.

Una ventaja principal de las pruebas de enterramiento de canicas y desmenuzamiento de nidos es que cada una depende de comportamientos naturales y espontáneos de los ratones que pueden cuantificarse tras la finalización de la prueba, lo que permite que un solo investigador prepare un experimento y permanezca fuera de la sala de pruebas hasta que finalicen las sesiones. Un componente crítico de la prueba de enterramiento de canicas es la extracción cuidadosa del sujeto de la jaula tras la prueba. Los ratones suelen intent...

Las enfermedades, las lesiones en la cabeza, las modificaciones genéticas y el tratamiento de ratones con medicamentos pueden tener efectos profundos en el comportamiento. Utilizando enfoques bien caracterizados y validados, como el entierro de mármol y la trituración de nidos, los comportamientos compulsivos se pueden documentar con precisión en ratones como modelos del trastorno obsesivo-compulsivo humano y el trastorno del espectro autista.

Enterrar Mármol y Nestlet Trituración como pruebas de Conductas repetitivas, compulsivo-como en ratones

Obsessive-compulsive disorder (OCD) and autism spectrum disorders (ASD) are serious and debilitating psychiatric conditions and each constitutes a ...

El objetivo general de este procedimiento es mostrar la sencillez del enterramiento de canicas y la destrucción de nidos como paradigmas confiables para evaluar y demostrar comportamientos repetitivos y compulsivos. En roedores, para la prueba de enterramiento de canicas, se prepara una jaula con 20 canicas colocadas uniformemente sobre la superficie del material de enriquecimiento. Luego se introduce al ratón en la jaula y se deja sin perturbar con las canicas durante 30 minutos.Después de este tiempo, se retira al ratón y se cuenta el número de canicas enterradas para la prueba del Nestle. Un Nestle intacto se coloca en la jaula antes de introducir al ratón. Después de 30 minutos, se retira al ratón y se deja secar el Nestle durante la noche antes de calcular el porcentaje de Nestle desmenuzado.En última instancia, se pueden observar diferencias en el comportamiento de búsqueda de canicas, enterramiento y desgarramiento de nidos entre ratones knockout y de tipo silvestre. Las demostraciones del procedimiento estarán a cargo de Denise Briggs, estudiante de posgrado, Mariana Ango Perez, posdoctoranda y Dean of Francescutti, asociada de investigación de mi laboratorio. Todos los animales se mantienen en un ciclo de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad con acceso libre a alimento y agua.Para obtener los mejores resultados, manipule cada ratón suavemente una vez al día durante tres a cinco días antes de la prueba. Cuando los animales estén listos para ser evaluados, transporte las jaulas a la sala de pruebas 60 minutos antes de comenzar la primera prueba.Para la prueba de rodamiento de canicas, utilice jaulas estándar de policarbonato para ratas con tapas filtrantes ajustadas. Añada material fresco y sin aroma para cama de ratón a cada jaula hasta una profundidad de cinco centímetros y nivele la superficie del material de cama insertando otra jaula del mismo tamaño. Esto tiene la ventaja adicional de imprimir una plantilla de líneas paralelas sobre la superficie del material de cama. Lave.Lave exhaustivamente canicas de vidrio estándar con un detergente suave de laboratorio, enjuague con agua destilada ionizada y seque antes de cada uso. Cuando esté listo, presione suavemente las canicas en la superficie del material de cama. Prepare cronómetros o temporizadores para medir las sesiones, organizando cinco filas de cuatro canicas cada una.Para comenzar la prueba, coloque al ratón mirando hacia la esquina de la jaula lo más alejada posible de las canicas. Coloque la tapa con filtro sobre la jaula y deje al ratón sin interrupciones con las canicas durante 30 minutos. Al final del período de prueba, retire al ratón y devuélvalo a su jaula de origen.Tenga extrema precaución para no mover ni desalojar las canicas durante el proceso de retirar al sujeto de la jaula. De dos a tres investigadores que desconozcan las condiciones del tratamiento deben evaluar entonces la cantidad de canicas enterradas. Se considera que una canica está enterrada.Si dos tercios de su superficie están cubiertos con material para enriquecimiento, promedie las puntuaciones del número de canicas enterradas para cada ratón. Por último, recupere las 20 canicas y deseche el material para enriquecimiento. Utilice jaulas estándar de policarbonato para ratones con tapas filtrantes ajustadas.Para la prueba de desmenuzado Nestle, agregue material fresco e inodoro para camas de ratón a cada jaula hasta una profundidad de 0,5 centímetros y compacte la cama como se mostró anteriormente. A continuación, pese los nidos de fibra de algodón disponibles comercialmente y coloque un Nestle encima de la cama. En cada jaula de prueba, prepare cronómetros o temporizadores para medir la sesión.Cuando esté listo, coloque un ratón en una esquina de la jaula orientado hacia la pared. Coloque la tapa con filtro sobre la jaula y deje al ratón sin molestar junto al nido durante 30 minutos. Después de este tiempo, retire al ratón y devuélvalo a su jaula de origen.Retire el material de nido intacto restante de la jaula y déjelo secar durante la noche. Al día siguiente, pese el nido no desmenuzado y divida este peso por el peso inicial para calcular el porcentaje de desmenuzamiento del material de nido.Por último, deseche el material restante de nido desmenuzado y la cama. Aquí se muestran jaulas representativas antes y después de la prueba de enterramiento de canicas. Pocas canicas fueron enterradas o desplazadas de su ubicación inicial al evaluar ratones de tipo silvestre.Sin embargo, el ratón con doble eliminación de TPH enterró 17 de las 20 canicas. Las canicas restantes que permanecen sin enterrar se indican con flechas. Esta vista lateral demuestra los cambios en la superficie del material de enriquecimiento.Después de la prueba, compare la superficie relativamente intacta de las jaulas de tipo salvaje con la superficie irregular que presenta grandes depresiones y picos en los animales knockout. A continuación se resume el rendimiento típico en la prueba de enterramiento de canicas. Ratones knockout del TPH2 enterraron significativamente más canicas en comparación con ratones de tipo salvaje.Estas fotografías muestran nidos representativos después de ser desmenuzados. Aquí, los nidos de ratones de tipo silvestre muestran cantidades mínimas de desmenuzado en comparación con los nidos de las jaulas de ratones knockout para TPH dos. Este gráfico muestra el desempeño típico de ratones de tipo silvestre y ratones knockout para TPH dos en la prueba de desmenuzado de nidos.Los ratones con doble eliminación de TPH desmenuzan significativamente más material Nestle que los ratones de tipo silvestre. Una vez dominadas, estas técnicas pueden realizarse en dos horas si se llevan a cabo adecuadamente. Al intentar este procedimiento, es importante recordar mantener la consistencia con los criterios para definir si una canica está enterrada, y retirar los trozos desmenuzados de Nestle del resto seco y sin desmenuzar.Tras seguir este procedimiento, se pueden inyectar a los ratones fármacos utilizados para tratar trastornos obsesivo-compulsivos en humanos, como los ISRS, con el fin de determinar si estos fármacos reducen los comportamientos similares a los compulsivos en los ratones.

marble-burying-nestlet-shredding-as-tests-repetitive-compulsive-like

Research

Investigación

JoVE Journal

Behavior

Comportamiento

Madrigueras, nidos y el acaparamiento son las actividades típicas de la especie que los ratones que fácilmente realizan en el laboratorio. En este artículo se describe cómo se pueden sencilla ya buen precio evaluado. Estos protocolos son extremadamente sensibles a la cepa de ratón, las lesiones cerebrales y las enfermedades. Por otra parte, constituyen el "enriquecimiento ambiental" para los ratones, e incorporan el "refinamiento" aspecto de la "3 erres" 18.

La evaluación de madriguera, la construcción del nido, y el acaparamiento en ratones

Inchworming es un movimiento sincrónico de excavación muy repetitivas mostrada por BTBR T + ITPR 3TF / J (BTBR) ratones cuando se coloca en una jaula de prueba con suficiente ropa de cama de aserrín. El procedimiento es una modificación del protocolo de interacción social de menores y se utiliza aquí para evaluar estereotipias motoras repetitivas relacionadas con Trastorno del Espectro Autista.

Inchworming: A Novel Motor estereotipias en el BTBR<em&gt; T<sup&gt; +</sup&gt; Itpr3<sup&gt; Tf</sup</em&gt; / J Modelo de ratón de autismo

Los comportamientos restringidos y repetitivos de orden superior (RRB) perturban la vida de las personas afectadas.  Estos comportamientos son difíciles de modelar en roedores, lo que dificulta la investigación biomédica básica sobre posibles tratamientos o intervenciones para los RRB.  Aquí describimos la exploración de nuevos objetos como un ensayo potencial para RRB de orden superior en ratones.

Exploración de objetos novela como un ensayo de potencial de mayor orden repetitivo Comportamientos en ratones

Se describe aquí un enfoque de detección de comportamiento escalonado que puede usarse para detectar compuestos que exhiben eficacia in vivo en comportamientos motores cognitivos y funcionales en modelos de ratón transgénicos de  beta - amiloidosis y tauopatía. Estos métodos se optimizan para examinar los compuestos para la actividad en tareas de memoria de trabajo y de corto plazo.

Evaluación de la Alternancia Espontánea, el Reconocimiento de Objetos Novelos y la Clasificación de Miembros en Modelos de Ratón Transgénico de la Neuropatología Amiloide-β y Tau

Este protocolo mide aprendizaje espacial y memoria con el laberinto de Barnes. Un nuevo paradigma de Damsel en señal de socorro se utiliza para evaluar la actividad locomotriz y conducta prosocial en ratones.

Analizar el aprendizaje espacial y el comportamiento Prosocial en los ratones con el laberinto de Barnes y paradigmas de la damisela en peligro

Una batería de pruebas de comportamiento integral de las habilidades motoras, estado de ánimo, incluyendo la interacción social, depresión y ansiedad — y cognición está diseñada para la evaluación repetida de cambios de comportamiento relacionados con la neurodegeneración en ratones.

Una batería de pruebas de comportamiento para la evaluación repetida de la motricidad, humor y cognición en ratones

Aquí, presentamos un protocolo para cuantificar el comportamiento de la construcción de nidos en ratones, que se sabe que está deteriorado en varios trastornos neurológicos y enfermedades. Este protocolo examina la utilidad de cuatro materiales y ofrece la oportunidad de cuantificar el acuerdo de tarifador en puntuación, mejorando la validez y fiabilidad del ensayo.

Comportamiento de la construcción de nidos como un indicador temprano de los déficits conductuales en ratones

Este manuscrito presenta un conjunto de pruebas conductuales altamente reproducibles para validar un modelo de ratón con síndrome de Angelman.

Caracterización conductual de un modelo de ratón con síndrome de Angelman

Los modelos de roedores son herramientas valiosas para estudiar los comportamientos básicos relacionados con el trastorno del espectro autista (TEA). En este artículo, exponemos dos pruebas de comportamiento para modelar las características principales del TEA en ratones: el autoacicalamiento, que evalúa el comportamiento repetitivo, y la prueba de interacción social de tres cámaras, que documenta las deficiencias sociales.

Estrategias para evaluar comportamientos similares al autismo en ratones

Se estableció un modelo de atracones en ratones utilizando el acceso intermitente a M&amp;M's (un alimento altamente palatable hecho de grasa y azúcar). Los ratones con acceso intermitente a este alimento rico en grasas y azúcares mostraron comportamientos similares al estrés, una mayor ingesta calórica y una preferencia por ese alimento sobre la comida estándar en comparación con los ratones con acceso continuo o nulo a la comida.

Modelo de ingesta de atracones intermitentes en ratones

Aquí, presentamos un protocolo para inducir hipoxia en ratones neonatos administrándolos en ambientes controlados con diferentes concentraciones de oxígeno. Los modelos de ratón sometidos a variaciones de oxígeno al nacer han variado de forma duradera la expresión de miRNAs implicados en la inducción de cambios fenotípicos del comportamiento como el autismo.

La hipoxia altera los niveles de miRNAs implicados en la herencia no mendeliana del trastorno del espectro autista en ratones

Aprende a evaluar comportamientos compulsivos en ratones mediante los tests de enterrar mármoles y triturar nidos. Estos métodos cuantifican conductas repetitivas para modelar trastornos psiquiátricos humanos como el TOC.

Enterrar Mármol y Nestlet Trituración como pruebas de Conductas repetitivas, compulsivo-como en ratones

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