Name: Heterotópico Rata auxiliar Trasplante de Hígado Con Flujo regulado Portal Vein Arterialización en aguda Insuficiencia Hepática (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 19 s
Description: Aprende el trasplante hepático auxiliar heterotópico con arterialización de la vena porta en ratas para estudiar la insuficiencia hepática aguda. Esta técnica innovadora evalúa la morfología y función del injerto.

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Este estudio fue financiado por la &quot;Deutsche Forschungsgemeinschaft&quot; (DFG). K. Schleimer fue apoyada por el Lise Meitner de Becas del Ministerio de Ciencia e Investigación de NRW. Nos gustaría dar las gracias a la señora Mary-Joan Blümich por su asistencia en la edición excelente. Dr. Maria Kokozidou se financió con Fresenius 2011_A61.

1. Animales Experimentales <ol><li> Obtenga una aprobación del Comité de Ética local para todos los experimentos que se llevarán a cabo, de conformidad con las directrices de protección animal FELASA (K 40, 17/99). </li><li> Utilice ratas Lewis macho disponible para comprar desde cualquier criador comercial (por ejemplo, Charles River Wiga GmbH, Sulzfeld, Alemania). En este caso, se utilizaron 224 animales (112 donantes, 112 destinatarios) para realizar 112 trasplantes. Los receptores fueron sacrificados a las 6 semanas después de la operación. En el momento de la operación, los animales deben pesar 250 a 350 g. </li><li> Mantener a los animales en las habitaciones climatizadas con acceso libre a comida y agua. </li></ol> 2. Anestesia y Preparación Operativo <ol><li> Coloque la rata en una caja de plexiglás conectado a la máquina de anestesia con una tasa de flujo de oxígeno de 1 L / min, y un vaporizador con gas anestésico isofluorano al 5% para inducir la anestesia. Mantener la anestesia en el 1,5% isofluorano. </li><li> Coloque las ratas endecúbito supino sobre una placa de calentamiento. </li><li> Retire la piel del abdomen con una crema de depilación. </li><li> Preparar un campo quirúrgico estéril de la siguiente manera: Utilice un desinfectante para limpiar la mesa de trabajo. Para la desinfección del sitio de la incisión el uso de clorhexidina primero, segundo alcohol y, finalmente, una solución exfoliante (por ejemplo, clorhexidina y 70% de alcohol isopropílico). Póngase una bata quirúrgica desechable y guantes quirúrgicos. </li><li> Utilizar instrumentos de microcirugía estériles. </li><li> Utilice un microscopio quirúrgico en el porcentaje de 12 a 20 veces. </li></ol> 3. Procedimiento Quirúrgico <ol><li> Donantes de operación Preparación <ol><li> Lleve a cabo una laparotomía media y resección del lóbulo lateral izquierdo y el lóbulo medio del injerto según lo descrito por Higgins. 14 </li><li> A continuación, preparar el ligamento hepatoduodenal. En primer ligar el conducto biliar para inducir congestión y dilatación de la pequeña conducto biliar. Entonces ligar y seccionar el gastroduodevena y arteria nal. Después, aislar el tronco celíaco y la arteria hepática común y seccionar la arteria gástrica izquierda y la arteria esplénica. Incisión en el conducto biliar congestionada, e introducir un stent 20-G en él. El posicionamiento de la endoprótesis debe garantizar el drenaje de todo el sistema de conductos biliares hiliar. Seccionar el conducto biliar distal al stent. </li><li> Aislar el segmento infrahepática de la vena cava derecha por encima de la vena renal derecha. Perfusión </li><li> Después de la ligadura de la aorta por encima del tronco celíaco, sujetar la vena porta y incisión ella. Introducir el catéter de perfusión (14 G) en la vena porta, y realizar la perfusión con 30 ml de-triptófano-cetoglutarato histidina (HTK) solución al (12 cm H2O, 4 ° C). </li><li> Cortar el diafragma y la vena cava suprahepática para permitir que el líquido de perfusión fluya hacia fuera. </li><li> Cortar el tronco celíaco, junto con un parche aórtico y enjuague con solución de histidina-triptófano-cetoglutarato. Explantación </li><li> Seccionar la vena cava infrahepática justo encima de la vena renal derecha. </li><li> Luego, colocar un stent con un diámetro de 0,3 mm en la vena porta y fijarlo con una ligadura. Durante la siguiente operación, la vena porta se arterializada través de la arteria renal derecha. Seccionar la vena porta distal al stent. </li><li> Después de la ligadura de la vena cava suprahepática, seccionar junto con un manguito de diafragma. </li><li> Explante el injerto y almacenarlo en histidina-triptófano-cetoglutarato (HTK) solución al a 4 ° C en una bolsa de plástico con hielo. Suturas Lugar de esquina (8-0 Ethilon) en la vena cava infrahepática. </li></ol></li><li> Operación Receptor <ol><li> Lleve a cabo una laparotomía media y preparar la vena cava infrahepática. Entonces aislar la arteria renal derecha y el uréter, ligar el uréter y seccionar ella. Sujete la arteria renal derecha en su origen, a continuación, ligar la vena renal derecha. Luego, después de la transección de ambos revasos nales, realizan la nefrectomía. Posteriormente, acortar la arteria renal derecha, enjuague con solución salina de heparina (40 UI de heparina solución salina / ml). </li><li> Seccionar la vena renal derecha proximal a la ligadura después de sujeción proximal y distal de la vena cava infrahepática para crear un lumen ovales en la vena cava infrahepática. Enjuague la vena cava con solución salina de heparina. Implante el injerto en la región renal derecha del abdomen del destinatario. </li><li> Anastomose infrahepática extremo a lado de la vena cava del donante a la recipient`s vena cava con una sutura continua 8-0 Ethilon. </li><li> Después de aclarar con solución de heparina / solución salina, introducir el stent en la vena porta en la arteria renal derecha (Figura 3). Conecte la vena porta y la arteria renal con 2 puntos (8-0 Ethilon). Fijar el stent que une en la arteria renal con una ligadura (trenzado de seda negro 7-0). </li><li> Para permitir la reperfusión, primero retire la pinza arterial, entonces ambosabrazaderas venosos (Figura 4). </li><li> Preparar la aorta infrarrenal, luego coloque una proximal y distal y microclamp incidir la aorta justo entre las dos pinzas. Lleve a cabo una anastomosis término-lateral entre la aorta y el tronco celíaco del donante, el uso de un parche de aorta, con una sutura continua 10-0 Ethilon. </li><li> Inserte el conducto biliar en el duodeno: Aplicar una sutura en bolsa de tabaco en la pared duodenal, hacer una pequeña incisión en la pared duodenal justo en el medio de la bolsa de tabaco. Introducir el conducto biliar con stent en el duodeno, y apretar la sutura en bolsa de tabaco. Finalmente, mantenga el duodeno y el conducto biliar firmemente juntos con dos puntos de sutura (Ethilon 8-0) (Figura 5). </li><li> A continuación, realice una resección subtotal del hígado nativo, descrito por primera vez por Emond et al. para imitar la insuficiencia hepática aguda. 7 </li><li> Fijar la vena cava suprahepática del injerto, junto con un manguito de diafragma, a la pared abdominal lateral de la reincipiente con 4-0 Vicryl. Enjuague el abdomen con solución salina (Figura 6). </li><li> Para la capa muscular de usar una sutura continua de Vicryl 4-0 y para la cutánea una sutura continua de Vicryl 3-0. </li></ol></li></ol> 4. Recuperación y Manejo Postoperatorio <ol><li> Deje que los animales se recuperen de la anestesia bajo una lámpara infrarroja calentamiento. </li><li> Inyectar buprenorfina a una dosis de 0,03-0,05 mg / kg BW sc cada 8-12 horas durante 2 días. </li><li> Examine los animales en relación con el estado general y signos de enfermedad o infecciones. </li></ol> 5. Cálculo de la inicial Nativo Peso Hígado Calcular el peso inicial hígado nativo de la siguiente manera: restar el peso de los lóbulos del hígado resecados del peso del hígado completo (2,66% del peso corporal (este valor con una desviación estándar de 0,49% +/- se determinó en experimentos anteriores con n = 80 animales de la misma cepa y unge)). 15

<ol><li>Boudjema, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+for+fulminant+and+subfulminant+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation for fulminant and subfulminant hepatic failure.</a> Transplantation. 59, 218-223 (1995).</li>
<li>Boudjema, K., Jaeck, D., Siméoni, U., Bientz, J., Chenard, M. P., Brunot, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporary+auxiliary+liver+transplantation+for+subacute+liver+failure+in+a+child%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Temporary auxiliary liver transplantation for subacute liver failure in a child.</a> The Lancet. 342, 778-779 (1993).</li>
<li>Chenard-Neu, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation%3A+Regeneration+of+the+native+liver+and+outcome+in+30+patients+with+fulminant+hepatic+failure+-+a+multicenter+European+study%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation: Regeneration of the native liver and outcome in 30 patients with fulminant hepatic failure - a multicenter European study.</a> Hepatology. 23, 1119-1127 (1996).</li>
<li>Gubernatis, G., Pichlmayr, R., Kemnitz, J., Gratz, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+partial+orthotopic+liver%E2%80%93transplantation+%28APOLT%29+for+fulminant+hepatic+failure%3A+first+successful+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Auxiliary partial orthotopic liver–transplantation (APOLT) for fulminant hepatic failure: first successful case report.</a> World J Surg. 15, 660-666 (1991).</li>
<li>Erhard, J., Lange, R., Giebler, R., Rauen, U., de Groot, H., Eigler, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arterialization+of+the+portal+vein+in+orthotopic+and+auxiliary+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Arterialization of the portal vein in orthotopic and auxiliary liver transplantation.</a> Transplantation. 60, 877-879 (1995).</li>
<li>Erhard, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+with+arterialization+of+the+portal+vein+for+acute+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl+Int%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation with arterialization of the portal vein for acute hepatic failure.</a> Transpl Int. 11, 266-271 (1998).</li>
<li>Emond, J., Capron-Laudereau, M., Meriggi, F., Bernuau, J., Reynes, M., Houssin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extent+of+Hepatectomy+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Extent of Hepatectomy in the rat.</a> Eur Surg Res. 21, 251-259 (1989).</li>
<li>Mas, A., Rode`s, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fulminant+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Fulminant hepatic failure.</a> Lancet. 349, 1081-1085 (1997).</li>
<li>Terpstra, O. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+grafting%3A+a+new+concept+in+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver grafting: a new concept in liver transplantation.</a> The Lancet. 342, 758(1993).</li>
<li>Terpstra, O. T., Reuvers, C. B., Schalm, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+heterotopic+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Auxiliary heterotopic liver transplantation.</a> Transplantation. 45, 1003-1007 (1988).</li>
<li>Schleimer, K., Lange, R., Rauen, U., Erhard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+in+acute+liver+failure+in+the+rat+-+an+illustrated+description+of+a+new+surgical+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation in acute liver failure in the rat - an illustrated description of a new surgical approach.</a> Langenbecks Arch Surg. 384 (2), 204-208 (1999).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiologic+microcirculation+of+the+heterotopically+transplanted+rat+liver+with+portal+vein+arterialization+depending+on+optimal+stent+diameter%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci+Monit%22%5BJournal%5D)">Physiologic microcirculation of the heterotopically transplanted rat liver with portal vein arterialization depending on optimal stent diameter.</a> Med Sci Monit. 28 (BR140-145), (2006).</li>
<li>Hong, H. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+portal+arterialization+with+auxiliary+liver+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hiroshima+J.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Study of portal arterialization with auxiliary liver in rats.</a> Hiroshima J. Med. Sci. 40, 29-33 (1991).</li>
<li>Higgins, G. M., Anderson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+pathology+of+the+liver.+I--Restoration+of+the+liver+of+the+white+rat+following+partial+surgical+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Path%22%5BJournal%5D)">Experimental pathology of the liver. I--Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal.</a> Arch. Path. 12, 186-202 (1931).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+with+flow-regulated+portal+vein+arterialization+offers+a+successful+therapeutic+option+in+acute+hepatic+failure--investigations+in+heterotopic+auxiliary+rat+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl+Int%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation with flow-regulated portal vein arterialization offers a successful therapeutic option in acute hepatic failure--investigations in heterotopic auxiliary rat liver transplantation.</a> Transpl Int. 19 (7), 581-588 (2006).</li>
<li>Lee, S., Edgington, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Surg.+Forum%22%5BJournal%5D)">Liver transplantation in the rat.</a> Surg. Forum. 17, 220-222 (1966).</li>
<li>Hess, F., Willemen, A., Jerusalem, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+in+the+rat%2C+influence+of+the+condition+of+the+recipient%27s+liver+on+the+fate+of+the+graft%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation in the rat, influence of the condition of the recipient's liver on the fate of the graft.</a> Eur. Surg. Res. 9, 270-279 (1977).</li>
<li>Aguirrezabalaga, J., Arnal, F., Marini, M., Centeno, A., Fernandez-Selles, C., Rey, I., Gomez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+with+portal+arterialization+in+the+rat%3A+description+of+a+new+model%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation with portal arterialization in the rat: description of a new model.</a> Microsurgery. 22, 21-26 (2002).</li>
<li>Palmes, D., Dietl, K. H., Drews, G., Holzen, J. P., Spiegel, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+partial+orthotopic+liver+transplantation%3A+treatment+of+acute+liver+failure+in+a+new+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Auxiliary partial orthotopic liver transplantation: treatment of acute liver failure in a new rat model.</a> Langenbecks Arch Surg. (386), 534-541 (2002).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+microcirculation+of+a+liver+graft+by+controlled+portal+vein+arterialization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Improved microcirculation of a liver graft by controlled portal vein arterialization.</a> J Surg Res. 116 (2), 202-210 (2004).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Portal+hyperperfusion+causes+disturbance+of+microcirculation+and+increased+rate+of+hepatocellular+apoptosis%3A+investigations+in+heterotopic+rat+liver+transplantation+with+portal+vein+arterialization%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Portal hyperperfusion causes disturbance of microcirculation and increased rate of hepatocellular apoptosis: investigations in heterotopic rat liver transplantation with portal vein arterialization.</a> Transplant Proc. 38 (3), 725-729 (2006).</li>
</ol>

Todos los autores declaran intereses en conflicto.

La primera heterotópico auxiliar trasplante de hígado de rata fue descrito por Lee et al., 16 en 1966 seguido por Hess. 17 La vena porta del injerto se anastomosa con la vena porta del receptor. Durante este procedimiento, se ve comprometido el suministro de sangre venosa portal al hígado nativo. En 1991 Hong realiza HALT con PVA a través de la arteria ilíaca del destinatario. 13 Sin regulación del flujo sanguíneo portal masiva y se produjo congestio...

Insuficiencia hepática aguda plantea un problema grave en la medicina clínica que lleva a una tasa de mortalidad del 60-80%. 8 En la insuficiencia hepática aguda, el trasplante hepático auxiliar es una terapia alternativa prometedora para superar la fase aguda. El hígado nativo se deja de regenerarse y siguiendo a la regeneración de los medicamentos inmunosupresores pueden ser descontinuados. Como consecuencia, el injerto se convertirá atrófica. Sin embargo aún se discute la técnica quirúrgica de trasplante hepático auxiliar. 1.3 En este contexto, Terpstra informó la falta de espacio para el injerto, la sangre portal robar fenómeno y el problema de la congestión venosa y drenaje. 9-10 vena porta del donante fue anastomosada extremo a un lado a la vena porta del receptor. Esto dio lugar a la competencia flujo portal entre el injerto y el hígado nativo y en la trombosis de la vena porta. La mayoría de los problemas técnicos se pueden evitar con el uso del método APOLT (orthotopic implantación de segmentos auxiliares). 4 Sin embargo, este método requiere resecciones extensas tanto del hígado nativo y el. injerto 4 En 1998, Erhard y su equipo desarrollaron el trasplante heterotópico auxiliar hígado (HALT) utilizando arterialización de la vena porta (PVA) (Figura 1 ). El hilio y la vena porta del hígado nativo se respetan con el uso de este método. Esto ahorra el destinatario de los efectos secundarios no deseados, como la trombosis de la vena porta y de la sangre portal fenómeno de robo, lo que podría perturbar la recuperación del hígado nativo. Además, no se requieren extensas resecciones hepáticas del hígado nativo y del injerto para este método, por consiguiente, con menos sangrado y más masa total del parénquima hepático restante para puentear (injerto) y la regeneración (hígado nativo). Esta técnica mostró prometedores resultados clínicos iniciales. 5-6 El objetivo de este trabajo experimental fue el desarrollo de una técnica HALT con arterialización vena porta enla rata para fines de investigación (Figura 2). En los experimentos preliminares no tomamos en cuenta la regulación del flujo sanguíneo de la vena portal arterializada, que dio lugar a la congestión del injerto trasplantado después de la reperfusión y sangrado masivo de la cápsula hepática. 11 Desde entonces, el flujo de sangre en la vena porta arterializada se reguló en un stent con un diámetro interior de 0,3 mm y una longitud de 8 mm. Experimentos piloto había demostrado que un diámetro del stent de 0,3 mm produce un flujo promedio de sangre en la vena porta arterializada que está dentro del intervalo fisiológico superior (1.7 +/- 0,4 ml / min / g de peso de hígado). 12 Nuestros resultados sin regulación del flujo sanguíneo correlacionar con los resultados de Hong, que realizó HALT con PVA a través de la arteria ilíaca del destinatario. 13 En sus experimentos sin regulación del flujo sanguíneo portal masiva y se produjo congestiones sinusoide. El objetivo de nuestro video es demonstrate paso a paso esta técnica quirúrgica experimental ne.w en la rata. A largo plazo, la técnica propuesta puede ser utilizada en los estudios sobre la regeneración del hígado y de la competencia inter-hígado y arterialización vena porta, hiperperfusión vena porta y la regulación del flujo sanguíneo portal.

<table><tbody><tr><td>Seda trenzada negro 7-0&nbsp;</td><td>Productos Ethicon</td><td>892100</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 3-0</td><td>Productos Ethicon</td><td>J285G</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 4-0</td><td>Productos Ethicon</td><td>J284G</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 8-0</td><td>Productos Ethicon</td><td>1714G</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 10-0</td><td>Productos Ethicon</td><td>7770G</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix seguridad 14G</td><td>B Braun</td><td>2758853</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix seguridad 20G</td><td>B Braun</td><td>2758818</td><td></td></tr><tr><td>2 catéter de poliuretano francés (0,012"/0,3 mm de diámetro interno x 0,025"/0,6 mm de diámetro exterior) x 24"/60 cm</td><td>Access technologies, una división de Norfolk Medical, Inc., Illinois, EE. UU.</td><td>Solución CNC-2P</td><td></td></tr><tr><td>HTK, Custodiol</td><td>Dr. Franz K&ouml; hler Chemie GmbH, Alsbach-H&auml; hnlein, Alemania</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isofluorano 5 %</td><td></td><td></td><td>Cualquier</td></tr><tr><td>genérico Heparina</td><td></td><td></td><td>Cualquier genericon</td></tr><tr><td>0,9% solución salina</td><td></td><td></td><td>Cualquier genérico</td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td></td><td></td><td>Cualquier genérico</td></tr></tbody></table>

heterotópico rata auxiliar trasplante de hígado con flujo regulado portal vein arterialización en aguda insuficiencia hepática

Heterotopic Auxiliary Rat Liver Transplantation With Flow-regulated Portal Vein Arterialization in Acute Hepatic Failure

En la insuficiencia hepática aguda del trasplante hepático auxiliar es un enfoque alternativo interesante. El objetivo es proporcionar un soporte temporal hasta que el hígado nativo no se ha regenerado. 1-3 El APOLT-método, el implante ortotópico de segmentos- auxiliar evita la mayoría de los problemas técnicos. Sin embargo este método requiere de resecciones extensas tanto en el hígado nativo y el. Injerto 4 En 1998, Erhard desarrolló el trasplante heterotópico auxiliar hígado (HALT) utilizando arterialización de la vena porta (PVA) (Figura 1). Esta técnica mostró prometedores resultados clínicos iniciales. 5-6 Hemos desarrollado una técnica HALT-con-regulada flujo de PVA en la rata para examinar la influencia de PVA-flujo regulado en la morfología y función (Figura 2) injerto. Un injerto de hígado reducido a un 30% de su tamaño original, se implantó heterotópicamente en la región renal derecha del receptor después de la explantación del riñón derecho.60; La vena cava infra-hepática del injerto se anastomosa con la vena cava infrahepática del destinatario. El arterialización de la vena porta del donante se llevó a cabo a través de la arteria renal derecha del destinatario con la técnica de stent. La regulación del flujo sanguíneo de la vena porta arterializada se logró con el uso de un stent con un diámetro interno de 0,3 mm. El tronco celíaco del injerto fue implantado era de extremo a lado anastomosa con la aorta del receptor y el conducto biliar en el duodeno. Una resección subtotal del hígado nativo se realizó para inducir insuficiencia hepática aguda. 7 De esta manera se realizaron 112 trasplantes. La tasa de supervivencia perioperatoria fue del 90% y la tasa de supervivencia de 6 semanas fue del 80%. Seis semanas después de la operación, el hígado regenerado nativo, mostrando un aumento de peso de 2,3 ± 0,8 g a 9,8 ± 1 g. En este momento, el peso del injerto disminuyó de 3,3 ± 0,8 g a 2,3 ± 0,8 g. </p&gt; Hemos sido capaces de obtener resultados prometedores a largo plazo en términos de morfología y función del injerto. HALT con flujo regulado PVA tiende un puente fiable insuficiencia hepática aguda hasta que regenera el hígado nativo.

La duración media del trasplante fue de alrededor de 150 min. El tiempo de isquemia fría fue de 64 +/- 7 min, el tiempo de isquemia caliente fue de menos de 25 min. La tasa de supervivencia perioperatoria fue del 90% y la tasa de supervivencia de 6 semanas fue del 80%. La pérdida de 20% se debió a una peritonitis debido a la dislocación del stent y la fuga biliar (cuatro animales) durante la primera semana postoperatoria y debido a la neumonía, absceso intraabdominal e íleo (siete animales) ...

Trasplante hepático auxiliar proporciona un soporte temporal en la insuficiencia hepática aguda, hasta que la regeneración del hígado no. El trasplante heterotópico auxiliar hígado (HALT) con arterialización vena porta (PVA) hace una función hepática suficiente. Hemos desarrollado una técnica análoga en la rata, para examinar la influencia de la arterialización de la vena porta en la morfología y la función del injerto.

Heterotópico Rata auxiliar Trasplante de Hígado Con Flujo regulado Portal Vein Arterialización en aguda Insuficiencia Hepática

In acute hepatic failure auxiliary liver transplantation is an interesting alternative approach. The aim is to provide a temporary support until the ...

La insuficiencia hepática aguda representa un problema grave en la medicina clínica, con una tasa de mortalidad del 60 al 80 % en casos de insuficiencia hepática aguda. El trasplante hepático auxiliar es una terapia alternativa prometedora. Tras la regeneración del hígado nativo, la inmunosupresión puede interrumpirse y el injerto hepático puede extraerse o dejarse para que atrofie.Sin embargo, la técnica operatoria para el trasplante hepático auxiliar es controvertida. El método APOL, que consiste en el implante ortotópico de segmentos auxiliares, evita la mayoría de los problemas técnicos que podrían surgir. No obstante, este método requiere resecciones extensas tanto del hígado nativo como del injerto.En 1998, Erhart y su equipo iniciaron el trasplante hepático auxiliar heterotópico denominado halt. Al utilizar la arteria de la vena porta llamada PVA, esta técnica mostró resultados clínicos iniciales prometedores. Hemos desarrollado una técnica halt con flujo regulado de la arteria de la vena porta en la rata para fines de investigación. Este video ilustra en detalle esta nueva técnica experimental. Se operaron 224 ratas macho syngen Louis frats con un peso de 250 a 350 gramos.Las operaciones en el donante y el receptor se realizaron bajo anestesia inhalatoria. La anestesia general de los animales se indujo con fluoruro de isoflurano en una caja de plexiglás conectada al equipo de anestesia con un flujo de oxígeno de un litro por minuto. El vaporizador tenía una concentración del 5% de isoflurano.La anestesia se mantuvo en un 1.5 %. Se obtuvo la aprobación del comité ético local para todos los experimentos, que se realizaron de acuerdo con las directrices de protección animal de phia. Durante la operación siguiente, la vena porta se arteriliza mediante la arteria renal derecha.El flujo sanguíneo en la vena porta arterializada está regulado por un stent con un diámetro interno de 0,3 milímetros y una longitud de ocho milímetros. Experimentos piloto habían mostrado que un diámetro de stent de 0,3 milímetros produce un flujo sanguíneo promedio en la vena porta arterializada que se encuentra dentro del rango fisiológico superior.La microcirculación hepática se visualiza mediante imágenes OPS, una técnica de espectroscopía de reflexión que permite la observación en tiempo real de la microcirculación hepática in vivo. Sin utilizar agentes de contraste y bajo inmersión de solución salina fisiológica, la sonda se coloca suavemente sobre la superficie del lóbulo hepático derecho. Aquí es importante no comprimir el parénquima hepático.La operación del donante se demuestra primero tras una laparotomía mediana. El lóbulo lateral izquierdo y el lóbulo mediano del injerto se resecan según lo descrito por Higgins. Aquí se observa la preparación del ligamento hepátoduodenal.Primero se liga el conducto biliar para inducir congestión y dilatación del conducto biliar pequeño. Se ligana y seccionan la vena y la arteria gastroduodenales. Luego se aíslan el tronco CIC, la arteria hepática común, la arteria gástrica izquierda y la arteria esplénica posteriormente.Se seccionan la arteria gástrica izquierda y la arteria esplénica. Aquí se observa el tronco CIC y aquí la arteria hepática común. Se realiza una incisión en el conducto biliar congestionado y se introduce un stent de calibre 20 en él.La colocación del stent debe garantizar el drenaje de todo el sistema de conductos biliares hepáticos. El conducto biliar se secciona distalmente al stent. El segmento infrahepático de la vena cava se aísla justo por encima de la vena renal derecha.Aquí se observan los tejidos tras la preparación, tras la ligadura de la aorta por encima del tronco celíaco. Se pinza y se realiza una incisión en la vena porta. Ahora se introduce el catéter de perfusión y se lleva a cabo la perfusión con 30 mililitros de solución de histidina-triptófano-ceto-glutamato.El diafragma y la vena cava suprahepática se cortan para permitir que el purato fluya. El tronco CIC junto con un parche aórtico se extirpa y se enjuaga con solución de histidina, triptófano y alfa-cetoglutarato. La vena cava infrahepática se secciona justo por encima de la vena renal derecha.Luego se coloca un stent con un diámetro de 0,3 milímetros en la vena porta y se fija con la ligadura. La vena porta se secciona distalmente al stent. Aquí se observa el conducto biliar, la vena porta, el tronco celíaco y la vena cava infrahepática.Después de la ligadura de la vena cava suprahepática, se secciona junto con un colgajo de diafragma. El injerto se extrae y se almacena en solución de histidina, triptófano y cetoglutarato a cuatro grados Celsius en una bolsa de plástico sobre hielo. A continuación, se colocan suturas en la vena cava infrahepática. Se muestra la siguiente operación en el receptor.Tras la laparotomía y la preparación, se aísla primero la vena cava infrahepática y la arteria renal derecha. A continuación, se liga y se secciona el uréter. Una vez que se ha clampado la arteria renal derecha en su origen, se liga la vena renal derecha.Luego de la sección de ambos vasos renales, se realiza la nefrectomía. Posteriormente, se acorta la arteria renal derecha y se enjuaga con solución salina heparinizada tras el pinzamiento proximal y distal de la vena cava infrahepática. La vena renal derecha se secciona proximalmente a la ligadura.De esta manera, se crea una luz ovalada en la vena cava infrahepática. El injerto se coloca por debajo del hígado nativo. La vena cava infrahepática del donante se anastomosa de extremo a lado con la vena cava del receptor mediante una sutura continua de etileno 8-0.Después de enjuagar con solución salina de heparina, el stent en la vena porta se introduce en la arteria renal derecha. La vena porta y la arteria renal se conectan con dos puntos de sutura. El uso de un stent con un diámetro interno de 0,3 milímetros y una longitud de ocho milímetros permite una anastomosis arteriovenosa con caudales de entrada estandarizados y regulados.El stent de enlace se fija en la arteria renal con una ligadura para permitir la reperfusión. Primero se retira la pinza arterial, seguida de ambas pinzas venosas. Ahora se observa la microcirculación en el momento de la reperfusión, que comienza en los vasos interlobulillares, continúa a lo largo de los sinusoides y llega a la vena central del lobulillo hepático.Aquí se observa ahora el injerto reperfundido, la vena porta arterialized y el conducto biliar. Se prepara la aorta infrarrenal, luego se pinza y se incide. Se realiza una anastomosis término-lateral entre la aorta y el tronco celíaco utilizando un parche aórtico con una sutura continua de etileno 10-0.Después de aplicar una sutura en bolsa de tabaco, se realiza una pequeña incisión en la pared duodenal. Luego, se introduce el conducto biliar con stent en el duodeno y se aprieta la sutura en bolsa de tabaco. Finalmente, el duodeno y el conducto biliar se mantienen firmemente juntos con dos puntos de sutura.Aquí se observa el injerto reperfundido y el hígado nativo que había sido resecado subtotalmente para simular una insuficiencia hepática aguda. Los animales recibieron inyecciones postoperatorias de buprenorfina por vía subcutánea cada ocho a doce horas durante dos días.La tasa de supervivencia perioperatoria fue del 90 % y la tasa de supervivencia a las seis semanas fue del 80 %. Durante la primera semana posoperatoria, cuatro ratas murieron de peritonitis debido a un desplazamiento del stent y fuga biliar. Además, siete ratas murieron de neumonía, absceso intraabdominal o íleo. Los animales sobrevivientes se encontraban en excelente estado general.Seis semanas después de la operación, los parámetros de síntesis hepática se encontraban dentro del rango normal. Aquí se observa a los científicos seis semanas después del trasplante heterotópico auxiliar de hígado de rata con arteria de la vena porta. Seis semanas después de la operación, el hígado nativo se regeneró, mostrando un aumento en el peso de 2,3 ± 0,8 gramos a 9,8 ± 1 gramo.En este momento, el GRAT estaba atrófico y el peso del hígado disminuyó de 3,3 ± 0,8 gramos a 2,3 ± 0,8 gramos. El peso total de ambos hígados se encontraba dentro de la proporción fisiológica de peso hepático respecto al peso corporal en la tinción histopatológica con hematoxilina-eosina a las seis semanas tras la interrupción. Se observaron hepatocitos normales sin edema ni degeneración grasa.Todos los gráficos mostraron una ligera proliferación de bilis, conducto ductular y colangitis debido a la formación de lodo. Solo en dos gráficos se pudo observar una necrosis hepatocelular de bajo grado en los CTU interper. El uso de un stent con un diámetro interno de 0,3 milímetros y una longitud de ocho milímetros produce un flujo sanguíneo portal promedio tras la reperfusión de la vena porta arterialized, que se encuentra dentro del rango fisiológico superior.El drenaje biliar es el talón de Aquiles del trasplante hepático. En el trasplante hepático en ratas, los receptores a menudo mueren dentro de los primeros días posoperatorios debido a la fuga biliar y la peritonitis. Realizamos la colodohoostomía utilizando un stent, una sutura con hilo permanente y dos puntos adicionales que la aseguran contra fugas y desconexión.Con esta técnica, las complicaciones biliares se redujeron al 4 %. En este estudio actual, se realizó una resección subtotal del hígado nativo. Utilizamos este método descrito inicialmente por amond para inducir insuficiencia hepática aguda. En contraste con la aplicación de agentes hepatotóxicos, este método es estandarizado y no presenta efectos secundarios sobre otros sistemas orgánicos ni sobre el injerto.A diferencia del trasplante hepático ortotópico, no existe una fase hepática terminal. Durante el trasplante hepático heterotópico, la anastomosis puede realizarse sin ninguna presión de tiempo. Además, en la posición heterotópica, no hay interferencia por el diafragma en movimiento.Además, la vena porta del receptor no se pinza, evitando así la congestión venosa del intestino delgado, bazo, páncreas y estómago. Con esta técnica, pudimos obtener resultados prometedores a largo plazo en cuanto a morfología, función e injerto, en trasplantes heterotópicos auxiliares de hígado en ratas con flujo regulado en la vena porta. La arteria de la vena es una técnica innovadora que presenta pocos inconvenientes y es fácil de aprender.Esta técnica es adecuada para investigar el efecto de la hipervascularización portal y arterial hepática, así como de la regulación del flujo sanguíneo, sobre la función y la morfología de la microcirculación hepática. Este modelo permite futuros estudios sobre la regeneración hepática en la competencia inter hepática.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Se presenta una revisión fácil de establecer de la clásica banda de dos técnicas para el trasplante ortotópico de hígado en ratas.

Trasplante ortotópico de hígado en ratas

Trasplante ortotópico de hígado en ratas es un modelo experimental indispensable para la investigación biomédica. A continuación les presentamos nuestros procedimientos quirúrgicos de trasplante ortotópico de hígado de rata con la reconstrucción arterial hepática mediante un injerto parcial del 50%.

Procedimientos Quirúrgicos para un modelo de rata de trasplante hepático ortotópico parcial con reconstrucción arterial hepática

La investigación con animales de experimentación desempeña un papel fundamental en el desarrollo de la práctica clínica del trasplante. El modelo de trasplante de hígado ortotópico porcino (OLTx) se asemeja mucho a las condiciones humanas y se utiliza con frecuencia en la investigación clínica. El siguiente protocolo contiene toda la información para un modelo OLTx porcino fiable que utilice una derivación porto-cava-yugular activa.

Técnica de Adquisiciones de hígado porcino y trasplante ortotópico usando un Active Porto-Caval derivación

Describimos una nueva técnica para el trasplante heterotópico abdominal de corazón-pulmón (HAHLT) en ratas. La configuración del trasplante da como resultado una circulación del injerto parcialmente cargada, lo que permite una evaluación funcional directa. Este modelo puede emplearse para estudios agudos o crónicos de la función y el estado inmunológico del injerto trasplantado.

Rata heterotópico abdominal Corazón / Trasplante de un solo pulmón en una configuración de volumen cargado

Aquí, se presenta un protocolo de trasplante hepático parcial rata vuelva a arterializada. Específicamente, hígado 70% fue resecado en vivo mediante el uso de una técnica actualizada de hepatectomía orientada al buque. La arteria hepática fue reconstruida de manera final a otro. La técnica del manguito fue modificada para acortar el tiempo de anastomosis de la cava de infrahepatic.

Volver a arterializada rata parcial trasplante del hígado con una en vivo orientada al barco 70% hepatectomía

La reconstrucción de la cava suprahepática (SHVC) sigue siendo un paso difícil en el trasplante orthotopic del hígado de rata. En este artículo, se muestra un protocolo paso a paso para la reconstrucción de SHVC en ratas usando una técnica de anastomosis magnética novela.

Un modelo de rata de Orthotopic trasplante del hígado usando una técnica de Anastomosis magnética novela para la reconstrucción de la Vena Cava suprahepática

El objetivo de este estudio es modificar el modelo de trasplante de hígado ortotópico de rata para representar mejor el trasplante de hígado humano y mejorar la supervivencia del receptor. El método presentado restablece la entrada arterial hepática conectando la arteria hepática común del hígado del donante con la arteria hepática adecuada del hígado receptor.

Reducción de las complicaciones después de la reconexión arterial en un modelo de rata de trasplante hepático ortotópico

Este trabajo proporciona una descripción detallada de cómo construir un modelo animal de la fase anhepática (isquemia hepática) en ratas para facilitar la investigación básica sobre lesiones por isquemia-reperfusión después del trasplante de hígado.

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El protocolo de trasplante hepático auxiliar heterotópico en ratas descrito aquí ofrece una herramienta práctica de investigación para explorar los mecanismos de rechazo del aloinjerto hepático. Este modelo ayuda a aliviar los obstáculos quirúrgicos y el estrés animal del trasplante ortotópico de hígado en ratas.

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Murino heterotópico Corazón Trasplante Técnica

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Heterotópico Rata auxiliar Trasplante de Hígado Con Flujo regulado Portal Vein Arterialización en aguda Insuficiencia Hepática

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