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DOI: 10.3791/51135-v
Zoltan Cseresnyes*1,2, Laura Oehme*3, Volker Andresen4, Anje Sporbert2, Anja E. Hauser*3,5, Raluca Niesner*1
1Biophysical Analytics, German Rheumatism Research Center,Leibniz Institute, 2Microscopy Core Facility,Max-Delbrück Center for Molecular Medicine, 3Immunodynamics, German Rheumatism Research Center,Leibniz Institute, 4LaVision Biotec GmbH, 5Immunodynamics and Intravital Imaging,Charité - University of Medicine
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De alta resolución de imagen intravital con mejor contraste de hasta 120 m de profundidad en los ganglios linfáticos de ratones adultos se consigue modular espacialmente el patrón de excitación de un multi-focal del microscopio de dos fotones. En 100 m de profundidad se midió resoluciones de 487 nm (laterales) y 551 nm (axial), eludiendo así los límites de dispersión y difracción.
El objetivo general de este procedimiento es preparar un microscopio estándar de dos fotones para la obtención de imágenes intravitales de alta resolución. Esto se logra alineando primero el microscopio, lo que incluye el ajuste de los láseres. A continuación, el multiplexor de haz se alinea para lograr una forma de haz perfecta y una disposición iluminada por el haz.
En el caso del escaneo multihaz, las imágenes en bruto se adquieren escaneando la muestra con el patrón de iluminación rayado. Finalmente, se aplica un algoritmo para calcular la imagen final de alta resolución. En última instancia, la microscopía de iluminación rayada se utiliza para mostrar detalles del comportamiento del sistema inmunitario dentro de los centros germinales de los ganglios linfáticos de ratones, anteriormente inaccesibles a la microscopía intravital.
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