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DOI: 10.3791/51149-v
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Este protocolo explora los últimos avances en la realización de análisis de Western blot. Estas nuevas modificaciones emplean un sistema de gel Bis-Tris con una electroforesis en tiempo de ejecución 35 min, un sistema de transferencia Blot seco 7 min, y detección de la proteína fluorescente en el infrarrojo y formación de imágenes que genera una resolución más alta, la calidad, la sensibilidad, y la mejora de la precisión de los datos occidentales.
El objetivo general de este procedimiento es identificar las mejoras clave de la técnica clásica de Western blot para producir una mejor resolución, calidad, sensibilidad y precisión de los datos occidentales. Esto se logra primero mediante la preparación de muestras con un tampón que contiene sulfato ESAL de litio para proporcionar la condición óptima para la reducción y alquilación de proteínas, al tiempo que se preserva la integridad de las proteínas. El segundo paso es separar las proteínas utilizando el sistema de gel BIS tris que completa la electroforesis en 35 minutos.
A continuación, se utiliza el sistema de transferencia seca de eye blot para transferir proteínas a la membrana en siete minutos. El paso final es detectar proteínas mediante imágenes fluorescentes infrarrojas que utilizan tintes infrarrojos cercanos en dos canales fluorescentes diferentes para visualizar simultáneamente dos antígenos diferentes en la misma membrana. En última instancia, estas novedosas modificaciones del método tradicional de Western blot dan como resultado datos cualitativos y cuantitativos más precisos, al tiempo que reducen en gran medida el tiempo de rendimiento de esta técnica.
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