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DOI: 10.3791/51158-v
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This manuscript describes a protocol for isolating exosomes from human urine using a modified precipitation technique. The method aims to provide a quick, scalable, and effective alternative for exosome isolation.
Este manuscrito describe un protocolo para aislar exosomas de la orina humana utilizando una técnica de precipitación modificada.
El objetivo general de este procedimiento es diseñar un método de precipitación de exosomas modificado que ofrezca una alternativa rápida, escalable y eficaz para el aislamiento de exosomas de la orina. Esto se logra eliminando primero las células muertas grandes y los restos celulares de la muestra de orina por centrifugación, y el snat que contiene los exosomas urinarios se transfiere a un tubo nuevo. En el segundo paso, el pellet se disuelve en una solución aislada que contiene DTT para eliminar la proteína de caída de caballo TAM.
Luego, después de una centrifugación adicional, el sobrenadante libre de TP se incuba con un reactivo TC exo rápido durante la noche para precipitar los exosomas al día siguiente. Las muestras tratadas con reactivo exo quick TC se centrifugan por última vez para obtener el pellet de exosoma. En última instancia, los procesos posteriores, como la Western blot y la QPCR en tiempo real, se pueden realizar en los exosomas para identificar los biomarcadores de interés.
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