Pruebas Drosophila El olfato con un ensayo del laberinto

El objetivo general de este procedimiento es proporcionar un ensayo de laberinto en Y simple para probar el olfato en el melón Drosophila Gaster. Esto se logra primero matando a las moscas hambrientas durante 16 a 18 horas, por lo que están motivadas para explorar nuevos entornos con estímulos volátiles. El segundo paso del procedimiento es ensamblar la configuración del laberinto en Y que contiene las fuentes de olor en el papel de filtro, como el ácido acético en el solvente frente al solvente solo.

El tercer paso es introducir rápida y suavemente las moscas en el vial de carga. Después de varias horas, el paso final es marcar la ubicación de las moscas en el laberinto. En última instancia, los resultados pueden mostrar una respuesta hacia el odorante a partir de los datos obtenidos con el laberinto Y.

La idea de este método fue cuando decidimos tener un método sencillo y económico para probar la respuesta olfativa de los filos. Una ventaja de esta técnica sobre otras opciones es que permite a las moscas tomar una decisión sobre si demasiado estrés Demostrando el procedimiento será Megan Simon, una estudiante de doctorado de mi laboratorio Para este protocolo tenemos lista una línea de mosca ISO inizada con fenotipos de comportamiento estables y robustos. Cualquiera de estas cepas servirá como control de referencia para la prueba olfativa, para que cada cepa genética que se utilice para el experimento vuelva a cruzar la cepa con la cepa de referencia durante cinco generaciones.

Empareje hembras de una sola cepa experimental con unos pocos machos isogénicos para cada cruzamiento posterior. Para experimentos olfativos, mantenga la drosophila en un medio estándar de harina de maíz con un antibiótico bajo el ciclo de luz 1212. Y a 25 grados centígrados.

Los experimentos siempre deben ejecutarse a 25 grados centígrados y bajo luz en los espectros rojos lejanos, no visibles para la drosophila. También debe ser posible ventilar completamente la habitación entre experimentos antes de realizar el ensayo a la mañana siguiente. Al final del día, transfiera cohortes de 10 a 20 líneas experimentales a viales de vidrio con la humedad proporcionada por una toalla húmeda.

Las moscas deben ser examinadas en 16 a 18 horas, o podrían morir debido a la inanición o inanición al día siguiente. Ensambla el laberinto Y. Comience uniendo el conector en forma de Y a dos viales de vidrio usando conectores de espuma con puntas de pipeta recortadas, que hacen que los conductos tengan su forma cónica y estos pasajes unidireccionales.

La tercera rama de la Y está unida a un tubo de carga hecho de la gran parte de la punta de una pipeta y permite el paso desde el vial de carga hasta el punto de elección del laberinto. Más allá de cada túnel de conicidad hay un frasco de vidrio, uno de los cuales debe estar cargado con una carga de odorante. Estos como bolos de 40 microlitros empapados en cuadrados de 28 milímetros de papel de seda.

Cuál de los dos contiene el odorante debe alternarse al azar para realizar la prueba primero. Fresco. Las moscas en el hielo brevemente, por lo que las moscas se ralentizan. Esto debe ser bajo la luz roja lejana de las bombillas LED y, a 25 grados centígrados, deje caer suavemente la cohorte de moscas en el vial de carga y cargue el laberinto Y con las moscas de prueba.

No use anestesia gaseosa. Es muy importante transferir las moscas al vial de carga de forma rápida y suave. En realidad, es el paso más difícil de este experimento porque las moscas tienen que despertarse rápidamente antes de la difusión de otras en la masa Y.

Se debe permitir que las moscas exploren el laberinto durante 24 horas, de modo que un número máximo de moscas se mueva a uno u otro frasco de vidrio. El número de moscas presentes en los diferentes tubos sirve para calcular el índice olfativo. Se deben aplicar métodos estadísticos estándar a este valor obtenido del comportamiento de hasta 10 moscas.

Si 10 cohortes de moscas no proporcionan resultados consistentes, los ensayos se pueden realizar con 20 cohortes de moscas. Para limpiar los componentes del laberinto, sumérjalos desmontados en RBS 35 MD durante la noche. Siga esto con enjuagues con agua del grifo y un enjuague final con agua desionizada antes de secar al aire.

Respuestas estándar a un odorante. El uso del laberinto en Y incluye la atracción, la indiferencia o la evitación. Por ejemplo, las moscas de Cantones evitan fuertemente el ácido acético al 10%, mientras que no evitan el ácido fenoacético al 10%.

Al intentar este procedimiento, es importante recordar que este ensayo de onda representa un entorno artificial para las moscas. Siguiendo este procedimiento, como un método, se pueden realizar ensayos internos o de arena cumplidos para confirmar las respuestas olfativas de las moscas y las diferentes condiciones. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo probar simplemente las respuestas olfativas del gastado filano usando el ensayo SW.