La mielina glicoproteína del oligodendrocito (MOG 35-55) Inducida por la encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) en ratones C57BL / 6 ratones

El objetivo general de este procedimiento es inducir un modelo animal de encefalomielitis autoinmune experimental que imite las características clínicas y fisiopatológicas de la esclerosis múltiple. Esto se logra preparando primero el antígeno y el adyuvante y la toxina de la tos ferina. El segundo paso es inyectar el antígeno y la emulsión de CFA por vía subcutánea y la toxina de la tos ferina por vía intraperitoneal.

Dos días después, se vuelve a inyectar la toxina de la tos ferina por vía intraperitoneal. A continuación, se pesa a los animales y se evalúa diariamente su puntuación clínica. En última instancia, los signos clínicos de encefalomielitis autoinmune experimental generalmente se pueden observar entre el día nueve y el 14 después de la vacunación.

La principal ventaja de esta técnica de los protocolos existentes, que involucran, por ejemplo, agentes tóxicos como la rizona o diferentes variantes de EIE, es que todos imitan características de la EM que difieren enormemente en las características patológicas subyacentes, como la afectación del sistema inmune adaptativo. Por lo general, las personas nuevas en este método tendrán dificultades debido al difícil manejo de la inmunización. Es absolutamente necesario reducir el estrés de los animales y garantizar una inmunización óptima después de su desarrollo.

Este modelo allanó el camino para que los investigadores en el campo de la neuroinmunología caracterizaran a los animales knockout. Para identificar nuevos objetivos moleculares de fármacos o probar candidatos a fármacos prometedores: Para preparar la solución peptídica, comience diluyendo el péptido MOG 35 a 55 liofilizado en agua bidestilada hasta una concentración final de dos miligramos por mililitro. Se necesitan 100 microlitros de esta solución por ratón y se pierde algo de volumen durante la preparación.

Por lo tanto, haga de 1,5 a dos veces la cantidad de solución necesaria. Almacene la solución peptídica a menos 20 grados centígrados para hacer frons completas adyuvantes o CFA coloque 100 miligramos de micobacterias desecadas a la tuberculosis. H 37 RA en un mortero y molerlo con un mortero para obtener un polvo fino.

A continuación, añada 10 mililitros de adyuvante de frons incompleto para obtener una solución de calcetín CFA de 10 miligramos por mililitro. Las existencias de CFA se pueden almacenar a cuatro grados centígrados hasta que se necesiten el día de la inmunización. Diluya la solución madre de CFA con un adyuvante incompleto hasta una concentración final de dos miligramos por mililitro, mezcle bien para resuspender el material particulado y colocarlo en hielo.

Después de descongelar una alícuota de la solución peptídica MOG 35 a 55. Colócalo sobre hielo. Utilice una jeringa de dos mililitros y una cánula de calibre 27 para extraer un mililitro del CFA.

A continuación, utilice una segunda jeringa de dos mililitros y una cánula de calibre 20 para extraer un mililitro de la solución de MOG 35 a 55. Retire las burbujas de aire y conecte ambas jeringas con una válvula de tres vías. Con la válvula de tres vías casi cerrada, empuje la emulsión de una jeringa a la otra y vuelva a mezclar bien durante al menos 10 minutos.

Al terminar, la solución debe ser blanca, rígida y viscosa, sin separación de fases. Ahora deje reposar la emulsión durante al menos 30 minutos o hasta varios días antes de la inmunización. Verifique que aún esté emulsionada. El día de la vacunación, extraiga la solución en una de las dos jeringas y conecte una cánula de calibre 27.

Reconstituir 50 microgramos de toxina pertussis en 500 microlitros de agua bidestilada. Para una solución madre de 100 microgramos por mililitro, almacene la solución madre a cuatro grados centígrados hasta que la necesite. El día de la vacunación, diluya la solución madre de tos ferina uno a 50.

Con PBS, prepare una jeringa con 200 microlitros de la solución inyectable diluida para la tos ferina, que contiene 400 nanogramos de toxina de la tos ferina y extraiga 100 microlitros adicionales para el espacio muerto del cubo de la aguja. Después de anestesiar a un ratón con iso flúor, evalúe el nivel de anestesia con un pellizco en el dedo del pie. Inyecte 100 microlitros de la emulsión de antígeno CFA por vía subcutánea en dos sitios diferentes en cada flanco posterior.

Después de la inyección, se debe formar una masa bulbosa debajo de la piel, que debe persistir durante todo el experimento. A continuación, inyecte la jeringa preparada que contiene 200 microlitros de toxina de la tos ferina intraperitoneal. Asegúrese de que los ratones individuales puedan identificarse fácilmente para su evaluación diaria.

Por ejemplo, por marcas de color en la base de la cola.