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DOI: 10.3791/51341-v
Donna Cvetković*1, Cameron Glenn-Franklin Goertzen*1, Moshmi Bhattacharya1,2,3
1Department of Physiology and Pharmacology, Schulich School of Medicine and Dentistry,University of Western Ontario, 2Department of Oncology, Schulich School of Medicine and Dentistry,University of Western Ontario, 3Lawson Health Research Institute
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Este artículo proporciona metodologías detalladas para el uso de ensayos (3D) en tres dimensiones para cuantificar la invasión de células de cáncer de mama. En concreto, se discuten los procedimientos necesarios para configurar este tipo de ensayos, la cuantificación y el análisis de datos, así como los métodos para examinar la pérdida de integridad de la membrana que se produce cuando las células invaden.
El objetivo general del siguiente procedimiento es evaluar la capacidad invasiva de las células cancerosas mediante un ensayo de invasión tridimensional. Esto se logra cultivando primero células cancerosas en una matriz de membrana basal. A continuación, se observa la invasión celular de la matriz durante cinco o más días mediante microscopía óptica.
En el paso final, las células se marcan con anticuerpos fluorescentes para la localización de las proteínas de interés. En última instancia, la tasa de invasión de células cancerosas y los cambios resultantes en la expresión de proteínas se pueden analizar mediante microscopía inmunofluorescente. La principal ventaja de esta técnica sobre las técnicas existentes, como el ensayo de invasión en cámara de Transwell, es que el ensayo de invasión de gel mayor en 3D imita mejor el entorno in vivo que resuelve el cáncer al crecer.
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