Name: De imagen no invasivas y Análisis de la isquemia cerebral en ratas vivas utilizando Tomografía por emisión de positrones con 18 F-FDG (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 31 s
Description: Aprende a realizar imagen no invasiva de isquemia cerebral en ratas mediante PET con 18F-FDG. Este método permite evaluar longitudinalmente el metabolismo glucídico cerebral y progresión del ictus.

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Este estudio fue apoyado por una subvención de Bruker Molecular Imaging (a WML) y de los NIH (subvención HL019982 a FJC).

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WML es consultor de Bruker Molecular Imaging

Aquí presentamos una estrategia detallada para carrera de admisión, la PET y el cerebro medición subregión estandarizada de daño tisular en ratas Sprague-Dawley. Obtención de imágenes de modelos de animales pequeños, especialmente en el área de accidente cerebrovascular es beneficioso, como tratamiento para el accidente cerebrovascular para ser eficaz depende de un tiempo extremadamente corto terapéutico. Aquí presentamos un modelo de lesión por reperfusión, en trazo fue inducida a través de una oclusión de la arteria cerebral media, y de imagen realizamos utilizando FDG PET, junto a un CT de rayos X para la referencia anatómica. Fue posible mediciones regimentada de la captación de FDG en sub-regiones del cerebro mediante mapeo preciso de los atlas plantilla VOI en el cerebro de la rata en el software de análisis de imágenes PMOD. Valores Ratiometric FDG se recogieron dividiendo sub-regiones del cerebro correspondiente en hemisferios opuestos, lo que permite una medición directa de daño mientras la normalización de las variaciones en la señal global de FDG PET entre diferentes animales y el tiempo pUNTOS. Estas mediciones son consistentes con el efecto esperado de golpe en el cerebro de rata, lo que demuestra consistentemente, pérdida significativa de tejido cerebral captación de glucosa en ciertas regiones del hemisferio ipsilateral. Esta metodología tiene el potencial para aumentar nuestra capacidad para comparar los conjuntos de datos FDG PET de los animales sometidos a muchos tipos de trauma cerebral, incluyendo el accidente cerebrovascular isquémico. Mediante la estandarización de los volúmenes a ser cuantificado a través de los hemisferios del cerebro ya través de múltiples animales, este método genera mediciones consistentes de disminución de la captación de glucosa en los tejidos. Tenga en cuenta que otros trazadores PET con captación en el cerebro, al igual que 11 C-racloprida por los receptores D2, se puede utilizar con este protocolo, así 21. Por último, se describe un método para visualizar una apoplejía isquémica en un cerebro de rata dentro de su esqueleto con gran precisión anatómica en tres dimensiones. Desde el deterioro fisiológico y funcional inducida por apoplejía puede ser transitoria o permanente, este método no invasivo de imágenespermite a los investigadores para evaluar el daño cerebral en el mismo animal durante un período de tiempo. Proporciona una manera de anotar neurológicamente las ratas, así evaluar los déficits neurológicos a corto y largo plazo en el mismo animal. La función de plantilla del software PMOD permite a los investigadores con una cierta cantidad de precisión para trazar el área lesionada y tal vez se correlacionan con secuelas neurológicas y patrones de comportamiento. Para la cuantificación exacta de daño por apoplejía por subregión cerebro, el paso clave es la alineación de los datos de PET con el atlas de cerebro de rata dentro de PMOD. Las inconsistencias en la alineación pueden conducir a la cuantificación incorrecta de las subregiones del cerebro afectadas por la isquemia. Como se describe en la etapa de protocolo 4.1.7, es posible utilizar las glándulas de Harder como puntos de referencia para la alineación de los atlas del cerebro con los datos experimentales de PET. Efectos de volumen parcial (PVE) son una preocupación durante este tipo de análisis, y limitarán la resolución general de la estructura del cerebro quepuede ser fotografiado. Desbordamiento de la señal puede ocurrir entre los volúmenes adyacentes, o el propio VOI podría ser demasiado pequeña en relación con la resolución del instrumento, reduciendo así la exactitud cuantitativa del método 22. El sistema Albira PET usado en estos estudios está equipado con tres anillos de detectores y produce una resolución de 1,1 mm, que evolucionó a partir correspondiente sistema de un solo anillo que logra 1,5 mm 23. Buvat y colaboradores en cuenta que PVE afectará a las mediciones de los tumores con un diámetro de menos de 2-3 veces la resolución del sistema a plena anchura media max (FWHM), lo que correspondería a un volumen esférico de 5,6 a 18,9 mm 3 para el 3- anillo Albira. Casteels et al. Declarado recientemente que los volúmenes mayores de 8 mm 3 tendrán efectos de volumen parcial mínimos para modernos escáneres PET pre-clínicos con resolución en el rango de 1.1 a 1.3 mm 24. El atlas Schiffer se ha construido cuidadosamente con estos parámetros en mente, y utiliza 58 VOI, de los cuales 13 están por debajo del umbral de 8 mm 3. Estos incluyen el VOI para hemisferios derecho e izquierdo de la corteza prefrontal medial (6,3 mm 3, R / L), el Par Un Corteza (7,6 mm 3, R / L), el colículo superior (7,1 mm 3, R / L) , el VTA (5,5 mm 3, R / L), colículo inferior (5.7 mm 3, R / L), la glándula pituitaria (5,9 mm 3), y el flujo de sangre CB (5,1 mm 3). Además, las mediciones de la corteza frontal (1,4 mm 3 R / L) serán los más susceptibles a PvE debido a su pequeño tamaño. Los estudios en animales más grandes, como las ratas, que tienen un correspondiente aumento en el tamaño de la anatomía, tendrán un mayor número de sub-regiones del cerebro que pueden ser cuantificados de forma fiable en comparación con los ratones. Sin embargo, estos métodos son aplicables a imágenes del cerebro en ratones, que tienen su propia atlas cerebral disponible en PMOD que se compone de 18 subregiones que sondimensionada para minimizar PVE. Además, el uso de PET para identificar regiones cerebrales más pequeños que los que se describe en este estudio puede requerir el uso de una metodología alternativa. El método aquí descrito permite la cuantificación reglamentada y eficiente de daño en el tejido cerebral con el tiempo, segmentado por subregión cerebro, en ratas vivas. Lesión por isquemia se demuestra aquí como un ejemplo, pero la metodología presentada para la cuantificación de los cambios en la actividad cerebral se puede aplicar a cualquier otra condición que afecta al cerebro de rata. En conclusión, los datos FDG-PET-CT de animales pequeños pueden ser adquiridos de una manera no invasiva y económica, y se pueden utilizar convenientemente para formación de imágenes de pequeños animales de una manera cuantitativa. Utilizando la herramienta de plantilla Schiffer del programa PMOD, áreas isquémicas del cerebro pueden ser delineadas y se miden los datos de PET. Esta es una poderosa herramienta para el estudio futuro de la reorganización del cerebro, la reparación y la neurogénesis después de la isquemia cerebral que promoverá desarrollnt de neuro-terapias de los pacientes con ictus con discapacidad. Esta visualización también será particularmente útil en la evaluación de otros casos de trauma cerebral, donde el daño a los tejidos se puede alinear de modalidades de imágenes separadas.

El accidente cerebrovascular es una de las principales causas de muerte en los países desarrollados, y es directamente responsable de la muerte de 1 de cada 19 estadounidenses 1. Se ha estimado que alrededor de 795.000 estadounidenses sufren ictus cada año, de los cuales 87% son de naturaleza isquémica 5. Durante un evento isquémico, suministro continuo de oxígeno y glucosa a las neuronas corticales se ve gravemente afectada inducir un ambiente hipóxico, lo que conduce a una disminución de la función celular en las regiones cerebrales afectadas. Dependiendo de la gravedad del accidente cerebrovascular, el flujo sanguíneo cerebral y la captación de glucosa varía espacial y temporalmente. Los daños debidos a un accidente cerebrovascular puede ser identificado a través de métodos no invasivos, como la 18 F-FDG (FDG) Tomografía por Emisión de Positrones 6. FDG es un análogo de la glucosa en el que el grupo hidroxilo en la posición 2 &#39;ha sido reemplazado por el emisor de positrones 18 F de isótopos. 18 F es advantageous debido a su largo, la vida media de 110 minutos, lo que le permite ser utilizado para detectar el consumo de glucosa en el cerebro. FDG PET produce un mapa de alta resolución cuantitativa de consumo de desoxiglucosa en el cerebro 7 como 18 F tiende a acumularse en las regiones de alto consumo de glucosa, lo que indica que tales tejidos son metabólicamente muy activa 8. El 18 F núcleo sufre desintegración beta, liberando un positrón, que aniquila rápidamente con un electrón de cerca, la producción de rayos gamma, que son detectadas por el instrumento. PET con FDG se pueden repetir en el mismo individuo con al menos 10 18 F vidas medias, o alrededor de 18 horas, entre las gammagrafías, proporcionando así una manera de estudiar los cambios en la actividad cerebral a través del tiempo en el mismo individuo. Modelos animales preclínicos, como las ratas, a menudo se utilizan para evaluar los efectos de los accidentes cerebrovasculares y la efectividad de los tratamientos para el accidente cerebrovascular. Desde FDG PET es no invasivo, que puede ser utilizado para medirlos efectos del derrame cerebral en el tiempo sin alterar la fisiología del animal. Dependiendo de la ubicación del evento de carrera, las diferentes regiones del cerebro pueden verse afectados. Sin embargo, con pequeños animales como ratas, que define de forma manual y la cuantificación de la actividad en regiones específicas del cerebro de la rata puede ser un reto. Con el fin de comparar la actividad metabólica de la glucosa en regiones específicas del cerebro de rata con el tiempo, los volúmenes de interés (VOI) para cuantificar deben ser delineadas consistentemente. Un atlas precisas del cerebro de rata ha sido desarrollado para aliviar este problema 9, y se ha convertido en forma digital para su uso en la cuantificación de los datos FDG-PET preclínicos. Aquí presentamos un método para clasificar el daño tisular accidente cerebrovascular en una, manera metódica consistente. El método se detalla el procedimiento quirúrgico para iniciar la isquemia cerebral en un modelo animal, la cuantificación de sub-regiones específicas del cerebro afectadas por el accidente cerebrovascular, y producir una visualización tridimensional de la extensión y localización de accidente cerebrovasculardaño a los tejidos utilizando las técnicas y herramientas apropiadas. Utilizando la metodología descrita en este estudio, los investigadores pueden iniciar consistentemente isquemia cerebral en ratas, realizar imágenes de PET, y cuantificar los cambios en la captación de FDG utilizando regiones cerebrales definidas en modelos preclínicos de accidente cerebrovascular en el tiempo.

<table><tbody><tr><td>Albira PET SPECT CT</td><td>Bruker</td><td></td><td>Equipo de imagen molecular 3D</td></tr><tr><td>Sprague Dawley Rats</td><td>Charles River Laboratories</td><td>400</td><td>Sujetos Animales</td></tr><tr><td>18-F-D-Glucose</td><td>Spectron</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PET compuesto micro pinza</td><td>FST</td><td>18055-03</td><td>oclusor de pinza arterial</td></tr><tr><td>#4037</td><td>Doccol Corp.</td><td>403712PK10</td><td>inducción quirúrgica de ictus</td></tr></tbody></table>

de imagen no invasivas y análisis de la isquemia cerebral en ratas vivas utilizando tomografía por emisión de positrones con<sup&gt; 18</sup&gt; f-fdg

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

El accidente cerebrovascular es la tercera causa principal de muerte entre los estadounidenses de 65 años de edad o más, 1. La calidad de vida de los pacientes que sufren de un derrame cerebral no vuelve a la normalidad en una gran mayoría de los pacientes 2, que se debe principalmente a la actual falta de tratamiento clínico para el accidente cerebrovascular agudo. Esto requiere la comprensión de los efectos fisiológicos de la isquemia cerebral en el tejido cerebral con el tiempo y es una importante área de investigación activa. Con este fin, se ha avanzado experimental con ratas como modelo preclínico para el accidente cerebrovascular, en particular, el uso de métodos no invasivos como la 18 F-FDG (FDG), junto con Tomografía por Emisión de Positrones (PET) 3,10,17. Aquí presentamos una estrategia para inducir isquemia cerebral en ratas mediante la oclusión de la arteria cerebral media (MCAO) que imita la isquemia cerebral focal en los seres humanos, y la formación de imágenes de sus efectos sobre las 24 horas usando FDG-PET junto con la tomografía computarizada de rayos X (CT) con un Albira PInstrumento ET-CT. A VOI atlas plantilla fue posteriormente fusionados con los datos de ratas cerebrales para permitir un análisis imparcial del cerebro y sus subregiones 4. Además, se presenta un método para la visualización 3D de la evolución en el tiempo FDG-PET-CT. En resumen, presentamos un protocolo detallado para iniciar, cuantificar y visualizar un evento ictus isquémico inducido en una rata viva Sprague-Dawley en tres dimensiones utilizando FDG-PET.

La isquemia cerebral se inició en vivo ratas Sprague-Dawley a través de la oclusión de la arteria cerebral media, con imágenes nucleares posterior realiza para detectar sus efectos. Ratas vivas fueron imágenes de 24 horas antes de tiempo de admisión, así como 1,5 horas y 24 horas de post isquemia, cada uno con inyecciones independientes de aproximadamente 500 Ci de 18 F-FDG que se desintegra por completo dentro de 18 horas. El sistema de anillo de tres Albira detector utilizado para estos estudios tiene una sensibilidad del 9%, por lo que 500 Ci una dosis razonable para las ratas. Datos de imagen representativos para PET y TC de rayos X se muestran para una rata en la pre-24 hr y 24 hr puntos de tiempo post-reperfusión en la Figura 1, la parte superior y filas inferiores respectivamente. El transversales (paneles A y E), sagital (paneles B y F) y coronal (paneles C y G) rebanadas para cada exploración se presentan con datos FDG-PET de colores en un &amp; #8220; escala de intensidad del arco iris &quot;, y superpuesta a la TC en escala de grises. Tenga en cuenta que CT se utilizó para co-registro anatómica de los datos de PET dentro del cráneo animal, y no se observaron cambios en el tejido cerebral radiodensidad durante estos experimentos. A las 24 h se produjo un descenso dramático en la captación de glucosa en el hemisferio ipsilateral, sugiriendo daño tisular generalizada debido al accidente cerebrovascular isquémico inducido. Una representación 3D de la superposición de datos se presenta en la Figura 1D y H. Cuando se gira en la pantalla, estos datos prestados proporcionan una mayor visualización de la disminución inducida por golpes en la captación de FDG. Con el fin de cuantificar las alteraciones en la absorción de la glucosa cerebral debido a un accidente cerebrovascular de una manera espacio-temporal, un atlas cerebral VOI se aplicó a pre-accidente cerebrovascular basal, 1,5 horas, y 24 horas (post-reperfusión) para cada exploración. Esto se logró utilizando el paquete de software PMOD en conjunción con la W. Schiffer plantilla de cerebro de rata y atlas. En primer lugar, PMOD se utilizó para transformar cada uno de los conjuntos de datos de PET de cerebro de rata para el espacio y la geometría adecuada a través de co-registro manual mediante el movimiento y las herramientas Rotar bajo la etiqueta Reslicing. Tenga en cuenta que la herramienta de escala también está disponible para ajustar el tamaño total del cerebro, si es necesario. Mientras que el uso de los atlas Schiffer es superior a la elaboración manualmente VOI dentro del espacio del cerebro, puede haber error experimental inducida de la fusión cerebro incorrecto. Así, en algunos casos puede ser necesario un aumento en el número de animales para alcanzar significación estadística. A continuación, los atlas del cerebro W. Schiffer VOI se aplican automáticamente para medir la acumulación de FDG, en unidades de captación estándar, dentro de sub-regiones definidas del cerebro de rata (Figura 2). El atlas cerebral VOI también se pueden utilizar de forma iterativa con el modelo del cerebro estándar para optimizar aún más la fusión manual de los datos experimentales. Como el evento Stoke fue aislado en el hemisferio derecho del cerebro en cada animal, el daño to cada región se cuantificó mediante el cálculo de una relación de la actividad de captación de glucosa entre las regiones contralateral (Figura 2). El uso de estas relaciones proporciona una normalización conveniente entre los hemisferios derecho e izquierdo, y elimina la variabilidad que se puede encontrar al comparar los valores de intensidad de señal de PET a través de diferentes análisis. En 1,5 horas después del accidente cerebrovascular, 18 captaciones F-FDG no se vieron afectados en el área isquémica. Por lo tanto, no se observaron cambios cuantitativos en la captación de glucosa entre los hemisferios ipsilateral y contralateral (Figura 3, azules y barras verdes). Esto podría ser debido a la hiper-captación de glucosa por la región peri-isquémica o el aumento del metabolismo de la glucosa en este punto de tiempo para compensar la pérdida de ATP celular 10,11. Sin embargo, se observó disminución significativa en la captación de glucosa en regiones específicas del hemisferio ipsilateral a través de múltiples animales (n = 5) a las 24 h post-reperfusión (Figura 3, barras rojas). Othregiones er cerebrales muestran poco o ningún daño en el hemisferio ipsilateral. En concreto, las regiones del hemisferio ipsilateral que consistentemente exhibió captaciones de FDG disminuidas fueron: amígdala, putamen caudado, el auditorio, el lóbulo entorrinal, insular, paracorteza, y las regiones de la corteza somatosensorial. Las lesiones corticales causados ​​por ictus se asocia con la pérdida de conexiones neuronales y mapas funcionales alterados. Las anomalías estructurales en la amígdala debido a golpes de ventaja a la psicopatología y la disfunción cognitiva 12. No es sorprendente que la región caudado-putamen se vio afectada por la captación de FDG como el flujo sanguíneo cerebral en la parte lateral de esta región es suministrada por la arteria cerebral media 13 ocluida. La patología en esta región del cerebro de roedores conduce a problemas de aprendizaje discriminar, el procesamiento cognitivo, y las funciones no motores 14. Incapacidad para asumir FDG también se observó en el una corteza entorrinald corteza auditiva en el lóbulo temporal medial del hemisferio isquémico. En 2001, Davis et al. Informó que los daños corteza entorrinal en ratas conduce a la integración sensorial alterada y el aprendizaje espacial persistente deificits 15. Disfunción auditiva se sabe que ocurre en el accidente cerebrovascular en los seres humanos, aunque con poca frecuencia 16. Sin embargo, la captación de FDG por el colículo inferior que es una de las principales vías auditivas no se vio afectada por un accidente cerebrovascular en nuestro modelo. Se ha demostrado que las ratas con accidente cerebrovascular inducida por MCAO aumentan la epinefrina, norepinefrina, y la actividad del nervio simpático, debido a infarto en el córtex insular, una de las regiones en nuestro modelo que mostraron pobres captación de FDG 17. Esto podría resultar en cambios en la función autonómica que afectan al sistema cardíaco. Poor captación de FDG también se observó en el área somatosensorial de la corteza frontoparietal. Infarto isquémico en esta área se ha reportado que causa anormalidades estructurales y pérdida de conexiones tálamo18. Limited captación de FDG también se observó en la corteza visual, lo que podría conducir a la alteración de la plasticidad dominancia ocular, como se informa en neonatos de rata sometidos a isquemia hipóxica 19. Sin embargo, la disminución de la captación de FDG no se observó en el colículo superior un área que está involucrada en 20 orientación motor visual. La captación de FDG en la zona del hipocampo también se vio afectada, un área que es importante en la memoria espacial y la navegación. Se observó consistentemente que sub-regiones del cerebro medio, como el colículo superior y el inferior, el área tegmental ventral (VTA), así como el bulbo olfatorio del cerebro anterior, y el tálamo profunda no se vieron afectados por la oclusión de la arteria carótida media (Figura 3). Tomados en conjunto, estos resultados demuestran que la FDG-PET con CT proporciona una estrategia de formación de imágenes viable, reproducible, y no invasiva con la que para controlar la isquemia cerebral en ratas de una manera longitudinal. <pclass = &quot;jove_content&quot; fo: keep-together.within-page = &quot;always&quot;&gt; <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/51495/51495fig1.jpg" /> Figura 1:. PET-CT Datos de ratas antes y después de la isquemia cerebral Cada fila muestra la transversal correspondiente (A, E), sagital (B, F), coronal (C, G), y 3D prestados (D, H) PET datos -CT de una rata de 24 horas antes (fila superior) y 24 horas después de la reperfusión (o 26 horas después de la inducción de la isquemia cerebral, la parte inferior). Las flechas blancas indican la ubicación de la disminución de la captación de FDG debido al daño por apoplejía. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51495/51495fig1large.jpg" target="_blank">Por favor, haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/51495/51495fig2.jpg" /> Figura 2: Datos de PET alineados con el atlas del cerebro W. Schiffer rata utilizando PMOD Los datos FDG-PET de.una rata de 24 horas después de la reperfusión (o isquemia cerebral post-26 hr; fila superior) se fusiona con los VOI atlas plantilla cerebro para el análisis (fila inferior). Los colores indican la VOI separada del atlas de la plantilla del cerebro. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51495/51495fig2large.jpg" target="_blank">Por favor, haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/51495/51495fig3.jpg" /> . Figura 3: Representante Análisis cuantitativo de la captación de glucosa en el cerebro de rata por la Sección Ratios de derecho a hemisferio izquierdo señal FDG PET en la captación de unidades estándar de cada región del cerebro Atlas W. Schiffer Rata reportó para las exploraciones tomadas antes isquémica evento accidente cerebrovascular (pre; azul), 1,5 hr (verde) y 24 h (rojo) post-reperfusión (o 26 horas después de la reperfusión). Las barras de error representan el error estándar para eventos infarto cerebral n = 5 de rata, en cada punto de tiempo. ** P ≤ 0,01, * p≤ 0,05 (prueba t pareada). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51495/51495fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/51495/51495fig4.jpg" /> Figura 4:. Ilustración de Cirugía MCAO La línea roja es el oclusor que se inserta en la arteria carótida externa. El óvalo azul representa el área del cerebro.

El daño cerebral resultante de la isquemia cerebral puede ser visualizado y estudiado de forma no invasiva en ratas utilizando tomografía preclínica por emisión de positrones junto con la sonda radiactiva inyectable, 18F-fluorodesoxiglucosa. Además, el uso de herramientas de software modernas que incluyen plantillas cerebrales de volumen de interés (VOI) aumenta drásticamente la información cuantitativa obtenida de estos estudios.

De imagen no invasivas y Análisis de la isquemia cerebral en ratas vivas utilizando Tomografía por emisión de positrones con<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to ...

El objetivo general de este proyecto colaborativo consiste en obtener imágenes de los cambios en la distribución cerebral de una sonda de glucosa radiactiva en ratas antes y después de un accidente cerebrovascular. Esto se logra induciendo isquemia cerebral en ratas mediante un procedimiento de oclusión de la arteria cerebral media. El siguiente paso es inyectar el radiotrazador Fluor desoxiglucosa y adquirir imágenes de tomografía por emisión de positrones.El paso final consiste en analizar los datos utilizando una plantilla de volumen cerebral de interés que esté anatómicamente coregistrada con el cerebro de rata. En última instancia, la imagenología por TEP en ratas que presentan isquemia cerebral puede utilizarse para medir diferencias regionales en la captación cerebral de radiofármacos como la fluorodesoxiglucosa durante estudios longitudinales de la progresión de la enfermedad. La principal ventaja de esta técnica frente a métodos existentes como la necropsia y la histología es que la imagenología por TEP es no invasiva y puede emplearse de forma longitudinal para estudiar tratamientos y la progresión lineal del accidente cerebrovascular.Por lo general, las personas nuevas en este método tendrán dificultades para establecer el modelo de accidente cerebrovascular en animales. El uso de referencias anatómicas como las arterias carótidas interna y externa facilitará considerablemente el procedimiento. La demostración visual de este método es fundamental para realizar el análisis de VOI que permite combinar el atlas de la plantilla cerebral de PMOD con los datos de tomografía por emisión de positrones cerebrales del espécimen en estudio.El cirujano debe cambiarse a guantes estériles limpios después de preparar el área y utilizar instrumentos estériles. Para este estudio, utilice ratas Sprague-Dawley macho que pesen entre 220 y 270 gramos y comience obteniendo una tomografía por emisión de positrones (PET) y una tomografía computarizada (CT) previas a la cirugía. Para obtener una línea base de la captación de F 18 FDG, anestesie las ratas con 2,5 % de isoflurano utilizando un cono nasal.Luego, coloque al animal en posición recostada dorsal sobre una almohadilla calefactora y asegúrese de que el animal esté completamente anestesiado mediante una compresión en la pata. A continuación, sujete las patas delanteras. Después, afeite la superficie dorsal del cuello del animal y prepare el área afeitada con etanol al 70 %, seguido de una solución de povidona yodada al 10 %.Ahora, utilizando tijeras, realice una incisión de dos a 2,5 centímetros a 0,5 centímetros a la derecha y paralela a la tráquea. Luego, mediante disección romo, localice la arteria carótida y utilice retractoras para ayudar a visualizar el vaso. Una vez identificada, coloque una pinza microvascular sobre la arteria carótida común. A continuación, localice el primer punto de bifurcación, que será la arteria carótida externa o ECA, así como la arteria carótida interna o ICA. Cauterice las ramas más pequeñas unidas a la carótida externa, como la arteria occipital.Luego, ligue la ECA cerca de la bifurcación con la arteria tiroidea mediante una sutura de seda 4-0, dejando longitud adicional para permitir que las pinzas hemostáticas sujeten la sutura en su lugar. Para fijar las suturas con las pinzas hemostáticas, tire suavemente del tronco de la ECA y esta quedará paralela a la carótida común. A continuación, cauterice la ECA por encima de la sutura.A continuación, localice la AIC y use otro clamp micro para ocluir esta arteria. Luego, haga un pequeño orificio en la AEC utilizando tijeras pequeñas de resorte. Inserte el oclusor y ate una sutura alrededor para evitar el flujo sanguíneo.Ahora, retire la pinza microquirúrgica de la arteria carótida interna y avance el oclusor hasta sentir resistencia. Asegúrese de que el oclusor avance hacia la carótida interna y no hacia la arteria tegopalatina. A continuación, retire la pinza microquirúrgica de la carótida común y corte cualquier exceso de oclusor o sutura.Luego, utilice clips de herida de nueve milímetros para cerrar la incisión en la piel. Retire al animal de la anestesia y permita que despierte. A continuación, realice una tomografía computarizada con PET 1,5 horas después del procedimiento de accidente cerebrovascular, transcurridas dos horas.Nuevamente, anestesie completamente la rata con isoflurano y retire los clips de la herida. Luego, localice el extremo del oclusor y retírelo de la arteria cerebral media tirando suavemente de él hasta que la punta blanca del oclusor entre en contacto con los puntos de sutura. Sin embargo, no lo saque completamente, ya que esto provocaría sangrado.Finalmente, coloque nuevamente las pinzas de la herida. Luego retire al animal de la anestesia y permita que despierte. A continuación, vuelva a escanear al animal, 24 horas después de la reperfusión.Para cuantificar el daño en el tejido cerebral debido a la lesión por accidente cerebrovascular. Como se mencionó anteriormente, el animal debe ser escaneado antes de inducir el accidente cerebrovascular. Luego, 1,5 horas después del accidente cerebrovascular y, finalmente, 26 horas después del evento.Para cuantificar el daño en el tejido cerebral debido a una lesión por accidente cerebrovascular antes del estudio de imágenes, anestesie la rata con gas isoflurano al 2,5 % en una cámara de anestesia. Luego, inyecte aproximadamente 500 microcurios de fluordesoxiglucosa en la vena de la cola. Permita que la rata se recupere después de una hora.Luego, reanestesie para la adquisición de imágenes. Coloque la rata anestesiada sobre una camilla estándar para rata con una cono nasal para anestesia con fluoruro de isoflurano. Mida la distancia en milímetros entre la nariz de la rata y el borde de la camilla y registre este valor como el desplazamiento horizontal.A continuación, coloque el animal en el escáner y configure el estudio, incluyendo el peso del animal, el desplazamiento horizontal, la inyección del compuesto, la dosis, la hora y la fecha. Luego, haga clic en el botón de inicio del estudio para comenzar la adquisición de la imagen y reconstruir los datos una vez que se haya completado el escaneo. Realice el análisis de imágenes descrito aquí utilizando el software de análisis PMOD junto con el atlas cerebral de W Schiffer.Comience navegando hasta la pestaña de co-registro manual en la parte superior de la pantalla. Luego, seleccione la pestaña de corte. A continuación, utilice el rectángulo blanco vacío para rotar las tomografías micro PET y el rectángulo blanco relleno.Para mover las escaneos de microPET, alinee los dos escaneos localizando puntos de referencia como las glándulas duras y las características cerebrales superiores y posteriores, que pueden utilizarse para hacer coincidir el escaneo de microPET con el modelo cerebral. Luego, ajuste el escaneo de microPET hasta que se alinee con el atlas cerebral. Si es necesario, gire el escaneo de microPET 180 grados en la vista coronal y eleve significativamente el escaneo en la vista sagital, junto con otros pequeños ajustes de orientación.A continuación, acceda a la pestaña de fusión en pantalla completa. Seleccione la fuente A en la parte superior derecha de la pantalla. Luego, diríjase al atlas de plantilla.En la parte inferior de la página, seleccione rat en el menú desplegable. Opcionalmente, regrese a la pestaña de co-registro manual, donde el atlas debería aparecer superpuesto sobre un atlas cerebral. El atlas puede utilizarse para ayudar a alinear la exploración micro PET y el atlas cerebral tras el alineamiento.Regrese a la pestaña de fusión de pantalla completa. Aparecerá una plantilla sobre el cerebro que indica qué secciones del cerebro se medirán para las estadísticas de VOI. Ahora seleccione la fuente B en la parte superior derecha de la pantalla.Luego seleccione el botón de estadísticas de VOI. Guarde la hoja de cálculo que aparece seleccionando guardar y luego guardar en el sistema de archivos. Escriba el nombre de archivo deseado en el campo de nombre de archivo.A continuación, se puede realizar el análisis de imágenes utilizando estos datos para visualizarlos y crear secuencias de imágenes mediante el software de imagen vol view. Consulte el manuscrito que acompaña a este video para obtener detalles sobre los pasos de análisis y visualización. Aquí se muestran datos representativos de imágenes de tomografía por emisión de positrones (PET) y de tomografía computarizada (TC) de rayos X en una rata en los puntos temporales de 24 horas previas y 24 horas posteriores a la reperfusión; en las 24 horas, se observó una disminución drástica en la captación de glucosa en el hemisferio ipsilateral, lo que sugiere un daño tisular generalizado debido al accidente cerebrovascular isquémico inducido.Las flechas blancas indican la ubicación de la disminución en la captación de FDG debido al daño provocado por el accidente cerebrovascular. Aquí observamos los datos de PET con FDG de una rata 24 horas después de la perfusión, fusionados con el atlas de la plantilla del cerebro VOI. Para el análisis, los colores cruzados indican las VOI separadas del atlas de la plantilla del cerebro.Finalmente, aquí observamos las relaciones entre la señal de PET con FDG del hemisferio derecho e izquierdo y las unidades de captación estándar de cada región del Atlas cerebral de ratas W Schiffer, reportadas para escáneres realizados antes del evento de accidente cerebrovascular isquémico, a las 1,5 horas y a las 24 horas posteriores a la reperfusión. Tras ver este video, deberías tener una comprensión sólida de cómo establecer un modelo de isquemia cerebral en ratas, así como de cómo realizar imágenes con PET-FDG en los animales y utilizar un atlas cerebral de referencia para llevar a cabo un análisis riguroso de volúmenes de interés (VOI) de los datos.

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Investigación

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Medicina

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