Evaluación del Comportamiento del Envejecimiento Ratón Sistema Vestibular

El objetivo general del siguiente experimento es identificar cambios para equilibrar el rendimiento en un modelo de ratón de envejecimiento. Esto se logra entrenando primero a los ratones en un aparato para permitir que los ratones se aclimaten a él, así como aprender la tarea como segundo paso. Los ratones se prueban en el aparato para evaluar su coordinación motora y equilibrio.

Luego, los ratones son desafiados con el estímulo vestibular y se vuelven a probar en el aparato. Una vez más, los resultados mostrarán cambios en el equilibrio con la edad en función de los datos de la varilla del rotor y la barra de equilibrio. La principal ventaja de esta técnica sobre los métodos existentes, como la prueba del reflejo ocular vestibular, que rastrea los movimientos oculares, es que se trata de un método sencillo y no invasivo para medir el rendimiento del equilibrio.

Aunque este método puede proporcionar información sobre los cambios relacionados con la edad para equilibrar el rendimiento en ratones, también se puede aplicar a otros sistemas, como los trastornos neuromusculares y de ERY. Demostrando esos procedimientos estará Victoria Tongue, candidata a doctorado en mi laboratorio. Edward Dabney, asistente de investigación en el laboratorio, y Thomas Burton, gerente del Centro de Comportamiento Animal del Instituto Bosch de la Universidad de Sydney.

En la prueba de la varilla del rotor, los ratones deben caminar girando y acelerando las clavijas. Cuando pierden el equilibrio, activan un sensor magnético. Los parámetros marcados son registrados por el aparato de biela del rotor.

Comience instalando clavijas en cada carril del rotor. Barra. Se proporcionan tacos de diferentes tamaños para ratones y ratas. Sin embargo, el uso de las clavijas para ratas para ratones funciona bien y evita que los ratones se aferren a las clavijas en lugar de caerse.

A continuación, coloque las plataformas de aterrizaje magnéticas en el cable debajo de cada carril de la varilla del rotor. Asegúrese de que las plataformas no estén inclinadas para tocar el suelo y que estén lo más cerca posible de la pared magnética del lado derecho sin tocarla. Por último, la diapositiva dos.

Paneles de plástico transparente delante de cada carril de la varilla del rotor. El panel más corto se coloca debajo y el panel más largo se coloca arriba. Lleve las jaulas de ratones a la sala de pruebas 10 minutos antes de comenzar las pruebas mientras los ratones se aclimatan.

Introduzca los parámetros de prueba para la prueba de la biela del rotor de aceleración. En primer lugar, establezca la duración máxima de la prueba en 60 segundos. A continuación, establezca el número de carriles que se utilizarán o el número de ratones que se van a probar.

A continuación, ajuste las velocidades. Configure la prueba para que comience a cinco RPM y establezca el máximo en 44 RPM. Haz que la velocidad aumente durante 60 segundos.

Por último, configure los parámetros de la clavija para el uso de clavijas de rata que giran hacia adelante. Cuando los ratones estén listos, coloque el primer grupo que se va a probar en las clavijas estacionarias durante cinco minutos, permitiéndoles aclimatarse. A continuación, empuje suavemente a los ratones para que miren hacia la parte posterior de la varilla del rotor y comience la prueba cuando todos los ratones estén mirando en la dirección correcta.

Montaje, después de que los ratones hayan caído, devuélvalos a sus jaulas durante 10 minutos con libre acceso a comida y agua entre ensayos mientras los ratones descansan, limpie los desechos animales de los carriles de clavijas y plataformas de aterrizaje. También reinicie las plataformas de aterrizaje para la próxima prueba. Repita el proceso para un total de ocho intentos por ratón.

Las primeras tres a cinco pruebas se utilizan como pruebas de entrenamiento. Después de las ocho pruebas, limpie a fondo los carriles de clavijas y las plataformas de aterrizaje de la varilla del rotor con etanol al 70% y limpie los paneles de plástico transparente con un detergente suave. En esta prueba, los ratones caminan por una viga expuesta de un metro de largo y 14 milímetros de diámetro a lo largo de una ligera pendiente hasta su objetivo.

Una cámara oscura que contiene la cúpula de la carcasa del sujeto: Dos cámaras están colocadas a cada lado de la barra de equilibrio. Cada uno de ellos está inclinado para capturar toda la longitud del haz. Las grabaciones de video documentan las pruebas debajo de la viga.

El suelo está cubierto con material acolchado. Los ratones que caen deben ser recogidos inmediatamente y colocados dentro del área de la portería para recuperarse. El interior de la caja de la portería está forrado con una toalla de papel para eliminar fácilmente los desechos animales entre las pruebas.

La caja es lo suficientemente grande como para que quepa una cúpula de carcasa dentro de ella. Antes de probar un mouse, colóquelo en la caja de la portería durante dos minutos. Si un ratón intenta salir del área de la portería, cubra la abertura de la viga durante cinco segundos con una mano enguantada para disuadirlo de volver a salir.

A continuación, se debe entrenar el mouse para la tarea. Colócalo en la viga justo fuera del área de la portería y deja que camine hasta el área de la portería. Luego déjalo reposar durante un minuto, luego colócalo más abajo en la viga y déjalo subir de nuevo.

Dale siempre al ratón un minuto en la caja de gol entre las pruebas de entrenamiento. Mantenga el ratón cada vez más abajo de la viga hasta que suba desde la línea de salida sin ayuda. Ahora, para realizar una prueba, inicie la grabación y luego coloque el mouse en la línea de inicio.

Detenga la grabación cuando el ratón llegue a la caja o cuando el ratón se caiga de la viga entre intentos. Deje que el mouse descanse durante un minuto en el área de la portería y, mientras tanto, limpie la orina o las heces del haz y la espuma subyacente. Cada ratón debe ser probado cinco veces de esta manera.

Para añadir un desafío vestibular adicional a esta prueba, aplique primero el rotador, aclimate a los ratones al sonido del rotador a tres hercios. Utilícelo durante 20 segundos. A continuación, transfiera el ratón a la cámara del rotador.

Si tiene problemas para bajar el mouse a la cámara, dele al mouse un objeto para que se agarre antes de bajar ambos a la cámara. Una vez que el mouse esté en la cámara, retire el objeto, vuelva a colocar la tapa y haga funcionar el rotador durante 20 segundos. A tres hercios, inicie las grabaciones de video mientras gira.

Después de 20 segundos, apague el rotor y detenga manualmente la rueda lo más rápido posible. A continuación, mueva inmediatamente el ratón a la línea de salida y permita que complete la prueba. Como de costumbre, esta prueba se puede realizar de una a tres veces antes de que los ratones dejen de cooperar.

Nunca olvide limpiar la barra de equilibrio y cambiar la toalla de papel entre ratones por la varilla del rotor. Pruebe el tiempo para enamorarse de uno. Los ratones de un mes y uno de nueve meses aumentaron de manera constante durante los ensayos del uno al cinco y, por lo tanto, se consideraron ensayos de entrenamiento.

Para el análisis de los datos se utilizaron los datos a partir de los cuales se estabiliza la puntuación, mostrados por una línea discontinua. Los ratones de un mes de edad fueron capaces de permanecer en la clavija giratoria significativamente más tiempo que los ratones de nueve meses. Los datos de un tamaño de muestra pequeño se representan como la media más o menos una desviación estándar.

El impacto de la estimulación vestibular en el rendimiento del equilibrio también fue mayor con la edad. Un giro número 22 a tres hercios antes de la prueba aumenta el tiempo necesario para atravesar la barra de equilibrio entre las líneas de salida y llegada en ratones de nueve y 13 meses de edad, pero no en ratones jóvenes. La significación se evaluó mediante medidas repetidas en Nova con una prueba post hoc de TUI.

Al realizar esta tarea, es importante recordar transferir al animal del desafío vestibular al aparato lo antes posible para minimizar la posibilidad de que el animal se recupere del estímulo antes de completar la tarea siguiendo este procedimiento. Otras técnicas como la PCR, las imágenes de calcio y la electrofisiología con pinza de parche se pueden utilizar para responder preguntas adicionales, como si los cambios en el rendimiento motor y del equilibrio pueden correlacionarse con los cambios en la función de las células ciliadas vestibulares.