Name: Evaluación del Comportamiento del Envejecimiento Ratón Sistema Vestibular (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 30 s
Description: Aprende a evaluar el equilibrio en ratones envejecidos mediante estímulo rotatorio no invasivo. Este método mide cambios en el control motor y la coordinación usando rotor rod y balance beam.

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Los autores desean expresar su agradecimiento a la Fundación Conmemorativa Garnett Passe y Rodney Williams y al Centro de Comportamiento Animal del Instituto Bosch.

1. Animales <ol><li> Los ratones (C57/BL6) de edades 1, 9, y 13 meses de edad se obtuvieron del Centro de Recursos Animales (Perth, Australia). Estos ratones fueron alojados en jaulas estándar de ratón en el Fondo para el Bosch de roedores en la Universidad de Sydney en un 12/12 horas de luz / oscuridad ciclo con acceso a alimentos y agua ad libitum. Los procedimientos que se describen a continuación fueron aprobados por la Universidad de Comité de Ética Animal Sydney. </li><li> Traiga jaulas de ratón en la sala de pruebas antes de cada prueba durante 10 minutos para permitir ratones para aclimatarse al entorno de pruebas. </li></ol> 2. De Rotarod <ol><li> La instalación del equipo rotarod (Figura 1): <ol><li> Instale las espigas en cada carril del rodillo giratorio. Nota: En este ejemplo, la rata tacos (70 mm de diámetro) se utilizan en lugar de las clavijas de ratón (32 mm de diámetro) para desalentar a los ratones de aferrarse a la espiga y la realización de &quot;rotaciones pasivos&quot; 10. </li><li> Postularion las plataformas de aterrizaje magnéticos en el cable situado en la parte inferior de cada carril de la rotarod asegurarse de que no están inclinando a tocar el suelo del rodillo giratorio y se colocan lo más cerca posible a la pared de la derecha magnética de cada carril sin tocarse. Nota: Durante los ratones de prueba se requieren rotarod a caminar en una dirección hacia adelante para permanecer en los pasadores de rotación y aceleración. Cuando un ratón ya no es capaz de permanecer en la clavija, caen y se desplazan a la plataforma de aterrizaje que posteriormente se activa un sensor magnético. El tiempo necesario para caer de la espiga giratoria, las rpm del pasador en el momento de la caída y la distancia recorrida se calcula automáticamente para cada ratón y grabada en la pantalla de visualización en la parte delantera de la varilla rotatoria. </li><li> Deslice 2 paneles de plástico transparente en la parte frontal de cada carril rotarod con los paneles más cortos en la parte inferior y los paneles más largos por encima. </li><li> Introduzca los parámetros de la prueba utilizando el teclado situado en la parte delantera del cilindro giratorio. Siga ªeps 2.1.4.1 a 2.1.4.6 para los parámetros de la prueba rotarod aceleración y pasos 2.1.4.7 a 2.1.4.12 para los parámetros de la prueba de velocidad fija rotarod. <ol><li> Establezca la duración máxima de la prueba a 60 segundos. </li><li> Establecer el número de carriles que se utilizará (o el número de ratones que ser probado). </li><li> Ajuste la velocidad de inicio de la prueba a 5 rpm. </li><li> Ajuste la velocidad máxima de la prueba a 44 rpm. </li><li> Ajuste la velocidad de rampa de la prueba a 60 segundos. </li><li> Ajuste el tamaño de las clavijas elegidos y el sentido de giro a clavijas de rata que giran en una dirección hacia adelante. </li><li> Establezca la duración máxima de la prueba a 240 seg. </li><li> Establecer el número de carriles que se utilizarán en 1 como los ratones se prueban individualmente. </li><li> Ajuste la velocidad de inicio de la prueba a 15 rpm. </li><li> Ajuste la velocidad máxima de la prueba a 15 rpm. </li><li> Ajuste la velocidad de rampa de la prueba a 0 seg. </li><li> Ajuste el tamaño de la espiga elegido y la dirección de rotación a una espiga de rata gire en un forwadirección rd. Nota: Los ajustes anteriores pueden ser modificados para adaptarse a las necesidades de los diferentes experimentos. </li></ol></li><li> Coloque una cámara en frente del rodillo giratorio para la prueba de rotarod de velocidad fija, de modo que el comportamiento del ratón durante los ensayos puede ser grabado y los videos utilizados para el análisis posterior para determinar la duración de tiempo que los ratones eran capaces de permanecer en el rotarod. </li></ol></li><li> Siga los pasos 2.2.1 al 2.2.4 para el test rotarod aceleración: <ol><li> Coloque un ratón en cada espiga estacionaria durante 5 min para permitir que los ratones se aclimaten a la rotarod. </li><li> Empujar suavemente los ratones para hacer frente a la parte posterior del cilindro giratorio y empezar la prueba de rotarod cuando todos los sujetos se enfrentan en esta dirección (véase la Figura 1B). </li><li> Volver a todos los ratones a sus jaulas cuando han caído de los pasadores de rotación y dejarlos en reposo durante 10 minutos con el acceso a alimentos y agua. </li><li> Repita los pasos 2.2.1 al 2.2.3 para completar un total de 8 pruebas, asegurándose de limpiarlas clavijas, carriles, y las plataformas de aterrizaje de la rotarod para la orina y las heces, y mover las plataformas de aterrizaje de vuelta a su posición inicial Transcurrirá cada ensayo. Nota: Los primeros 3-5 ensayos se utilizan como pruebas de entrenamiento para permitir que los ratones se familiaricen con la tarea. La hora a la baja, la distancia recorrida y las rpm del extremo de la espiga en el momento de la caída de cada ensayo posterior se registra para su posterior análisis (Figura 2). </li></ol></li><li> Siga los pasos 2.3.1 al 2.3.8 para el test rotarod velocidad fija: <ol><li> Coloque un ratón en una espiga durante 5 minutos para permitir que se aclimate a la rotarod. Devuelva el ratón de nuevo a su jaula. </li><li> Inicie la grabación de vídeo en la cámara y pulse Inicio en el cilindro giratorio. A continuación, coloque el ratón en la espiga giratoria asegurar que se enfrenta a la parte posterior del cilindro giratorio. </li><li> Detenga la grabación de vídeo de la cámara cuando el ratón se cae de las espigas giratorias, y devolver el ratón para sus jaulas durante 10 minutos con el acceso a alimentos y agua. </li><li> Repita los pasos 2.3.2 y 2.3.3 hasta que se adquirió un total de 8 pruebas, asegurándose de limpiar las clavijas, carriles, y las plataformas de aterrizaje de la rotarod de las heces y la orina, y mover las plataformas de aterrizaje de vuelta a su posición de partida entre cada ensayo . </li><li> Encienda el rotador costumbre construido a 3 Hz durante 20 segundos para permitir que los ratones se familiaricen con el sonido. Detenga el rotador tras 20 seg apagando el taladro y coloque una mano a cada lado de la rueda para correr a evitar que continúe a girar más allá del 20 seg inicial. Nota: El rotador en sí consta de una rueda de roedor funcionamiento asegurado a un taladro (Figura 3A). En el centro de la rueda de funcionamiento es una pequeña cámara con una tapa de malla en el que el ratón se coloca (Figura 3B). El rotador gira en sentido contrario a las agujas del reloj alrededor del eje vertical. La magnitud del estímulo está en línea con los estudios anteriores que muestran estimulaciones giratorios que van de 0,2 a 3 Hz son suficientes para generarcomió respuestas VOR y VCR 4,11,12. </li><li> Coloque el ratón dentro de la cámara en el centro del rotor y reemplazar la tapa. </li><li> Encienda el rotador en la posición mínima de 3 Hz durante 20 s. Inicie el rotarod y empezar a grabar vídeo en la cámara durante este tiempo en la preparación para el próximo juicio. Desconecte el taladro al final de los 20 segundos y coloque una mano a cada lado de la rueda de correr para que deje de girar. Vuelva a probar el ratón sobre el rodillo giratorio inmediatamente después transfiriéndola lo más rápido posible a la clavija giratoria. </li><li> Detenga la grabación de vídeo de la cámara cuando el ratón se cae de la espiga y devolver el ratón a su jaula. </li></ol></li><li> Limpiar los paneles de plástico transparente con una mezcla de detergente suave / agua y las espigas cilíndricas, carriles y plataformas de aterrizaje de metal de la varilla rotatoria con etanol al 70% cuando todos los ratones han sido probados. </li></ol> 3. Barra de equilibrio con vestibular Desafío <ol><li> Configurar el baaparato de haz de la lanza como se ve en la Figura 4A. Nota: El aparato de barra de equilibrio fue adaptado de un aparato descrito en Carter et al (2001) 13.. Para esta prueba, los ratones a pie desde el extremo inferior de la viga, que es 52,5 cm por encima del suelo, a una caja oscurecida objetivo (13 x 22 cm, con una puerta 5 cm x 6) situada 60 cm por encima del suelo (Figura 4A ). Los ratones naturalmente buscan la oscuridad y la protección de la caja de meta a favor de la viga expuesta y se anima más que atravesar el haz por la ligera inclinación que explota su mecanismo de escape natural para correr en una dirección hacia arriba 14. La viga en sí es 1 m de longitud y tiene una sección transversal circular con un diámetro de 14 mm. Una gama adaptada de diámetros de haz se puede utilizar que permite que el experimentador para ajustar la sensibilidad de la prueba o acomodar los sujetos más grandes. En el extremo inferior de la barra de equilibrio de una línea blanca indica la línea de salida. Otra línea ha sidodibujado 60 cm de la línea de salida en el extremo superior de la viga para indicar la línea de meta (Figura 4). <ol><li> Posición 2 cámaras, una a cada lado de la barra de equilibrio, en el extremo inferior de la barra de equilibrio (Figura 4B). Nota: Estas cámaras deben estar en ángulo para capturar toda la longitud de la barra de equilibrio y asegurar que las líneas de salida y llegada marcadas en la barra de equilibrio son claramente visibles. Estas cámaras se utilizan para grabar vídeo el comportamiento de los ratones a medida que atraviesan la barra de equilibrio, con los vídeos resultantes se utilizan para el análisis posterior. </li><li> Cubra el piso de la caja de la meta con una toalla de papel, para permitir una fácil limpieza de la orina y las heces después de probar cada ratón, y colocar el domo de la carcasa de la caja temas casa dentro del área chica. </li><li> Coloque espuma adecuada u otro material de relleno debajo de la viga elevada a proteger a los sujetos que caen desde el aparato. Los ratones que caen serán recogidos inmediatamente por el experimentoer y colocado dentro del área chica para descansar. </li></ol></li><li> Coloque un ratón en el área chica durante 2 minutos para que se familiarice con este entorno. Cubra la apertura al área chica con una mano enguantada durante 5 segundos si el ratón trata de caminar sobre la viga durante este tiempo para desalentar este comportamiento. </li><li> Capacitar al ratón, colocándolo en la viga a las afueras de la abertura de la caja de la meta y lo que le permite caminar en el área chica. Continuar entrenando el ratón, colocándolo en la viga progresivamente más lejos de la caja de la meta hasta que el ratón es capaz de caminar desde la línea de salida de la caja de la meta sin ayuda y la vacilación mínima. Deja el ratón para descansar en el área chica durante 1 minuto después de cada carrera. </li><li> Comience evaluando el ratón cuando la formación se ha completado. <ol><li> Inicie la grabación de vídeo en cámaras. </li><li> Coloque el ratón en la línea de salida de la viga y espere mientras se atraviesa el haz en la dirección del área chica. </li><li> Detenga la grabación de vídeo en cameras cuando el ratón llega a la caja. </li><li> Deja el ratón para descansar en el área chica durante 1 min. Retire cualquier resto de orina o de las heces que pueden haber sido depositados durante el juicio a la espera. </li><li> Repita los pasos 3.4.1 a 3.4.4 hasta que se han completado un total de 5 ensayos. </li></ol></li><li> Encienda el rotador costumbre construido a 3 Hz durante 20 segundos (como en la prueba rotarod velocidad fija) para permitir que los ratones se familiaricen con el sonido. Detenga el rotador tras 20 seg apagando el taladro y coloque una mano a cada lado de la rueda de correr para que deje de girar. </li><li> Coloque el ratón dentro de la cámara en el centro del rotor y reemplazar la tapa. </li><li> Encienda el rotador en la posición mínima de 3 Hz durante 20 s. Inicie la grabación de vídeo de las cámaras durante este tiempo, en preparación para el próximo juicio. Desconecte el taladro al final de los 20 segundos y coloque una mano a cada lado de la rueda para correr para evitar que continúe a girar más allá del 20 seg inicial. Transfer el ratón para el inicio de la barra de equilibrio lo más rápido posible y espere mientras el ratón atraviesa el haz hacia la caja de la meta. </li><li> Detenga la grabación de vídeo en cámaras cuando el ratón llega al área chica y devolver el ratón a su jaula. </li><li> Limpie el aparato de barra de equilibrio con 70% de etanol y cambiar la toalla de papel en el área chica después de cada ratón se ha probado. </li></ol>

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</ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros contrapuestos.

Pasos críticos en el Protocolo El trabajo previo ha demostrado que es fácil de overtrain ratones tanto en el cilindro giratorio y el aparato de barra de equilibrio y como consecuencia, la adquisición de mediciones precisas puede ser un reto 15. Por ejemplo, el sobreentrenamiento en el cilindro giratorio puede dar lugar a ratones intencionalmente saltar de los tacos durante los períodos de aclimatación y de ensayo, mientras que el sobreentrenamiento en la barra de equilibrio puede con...

Nuestro sentido del equilibrio es tal vez uno de los componentes vitales aún más olvidadas de incluso las actividades motoras más básicos como el senderismo y el torneado. Balanza está influenciada por numerosos factores, incluyendo la fuerza muscular, coordinación motora y la función vestibular, y es sólo en la presencia de neuropatías vestibulares o durante el envejecimiento normal que se aprecia la importancia de un sistema de equilibrio pleno funcionamiento. Alteraciones en el sistema vestibular son frecuentemente asociados con experiencias de vértigo o mareo y el desequilibrio que resulta en un mayor riesgo de caídas y lesiones posteriores 1. Esto es particularmente crítico en las poblaciones de más edad, donde las caídas son una de las principales causas de lesiones 2. Pruebas de la función vestibular se basan comúnmente en los reflejos vestibulares, en particular, el vestíbulo-ocular (VOR) o el reflejo vestíbulo-Collic (VCR). El VOR y VCR son esenciales para la estabilización de imágenes enla posición de la retina y la cabeza durante los movimientos de la cabeza y el cuerpo, respectivamente. Comúnmente, las mediciones VOR requieren la implantación invasivo de bobinas de búsqueda para medir los movimientos oculares o de seguimiento de vídeo de movimiento de los ojos 3. Este es un reto en ratones debido a la pequeña naturaleza del ojo del ratón y la dificultad en la detección de la pupila para el análisis de vídeo 3. Como una alternativa, el VCR ha sido utilizado para medir la estabilización de la cabeza en respuesta a los movimientos del cuerpo en ratones sin la necesidad de cirugía invasiva 4. A pesar de esto, pocos estudios se centran específicamente en cómo el sistema vestibular funciona como un todo y lo más importante cómo cambia durante el envejecimiento. Para evaluar el desempeño global de la balanza de manera sencilla y no invasiva modificamos dos pruebas de comportamiento de uso común. Las pruebas de barra de equilibrio y rotarod inclinadas evaluar diferentes aspectos del rendimiento del motor en los roedores y en los estudios anteriores se han utilizado en una batería de pruebas para adquirir una completael perfil de la capacidad del motor. Esta capacidad puede ser afectado por la enfermedad o la modificación genética, y también es sensible a los procesos asociados con el desarrollo normal y el envejecimiento 5-7. A principios de trabajo utilizando el rotarod ha demostrado que la coordinación motora en ratones disminuye después de 3 meses de edad 8. Además, las ratas muestran déficits de la balanza notable con la edad en la prueba de barra de equilibrio 9. En este trabajo se describe el uso de las pruebas rotarod y barra de equilibrio, en relación con un estímulo vestibular con el fin de desafiar el sistema vestibular y caracterizar el consiguiente impacto sobre el equilibrio en ratones jóvenes y mayores. Mientras que los métodos simples y no invasivos descritos no están diseñados como medidas independientes de la función vestibular periférica, que proporcionan una medida del comportamiento útil y simple para comparar los cambios celulares y subcelulares en múltiples etapas de procesamiento vestibular durante el envejecimiento normal en ratones.

<table><tbody><tr><td>Rotarod</td><td>IITC Ciencias de la Vida Inc.</td><td>#755</td><td>"Tacos para ratas" = 70 mm de diámetro. No permita que el etanol entre en contacto con el metacrilato.</td></tr><tr><td>iPhone</td><td>Apple</td><td></td><td>Puede usar cualquier tipo de cámara. Velcro fijado a la superficie posterior para la fijación al brazo articulado 3D.</td></tr><tr><td>Brazo articulado 3D</td><td>Fisso/Baitella</td><td>Classic 3300-28</td><td>Cualquier tipo de soporte vertical estable sería adecuado. El velcro se fija al extremo apical del brazo para la fijación del iPhone.</td></tr><tr><td>Viga móvil de madera: tira de madera lisa de 1 m de largo con una sección transversal circular de 14 mm de diámetro</td><td></td><td></td><td>Se puede utilizar una gama de diámetros y formas de sección transversal para adaptarse a los parámetros experimentales</td></tr><tr><td>Caja de portería de madera (130 x 140 x 220 mm) hecha de tablas</td><td></td><td></td><td></td>de 11 mm de espesor</tr><tr><td>Soporte de soporte de vigas de 41 x 41 mm: 2 vigas verticales de 525 y 590 mm desde el suelo en el inicio y en el final de la portería respectivamente; Viga horizontal de 803 mm que corre a lo largo del suelo directamente debajo de la viga móvil; dos vigas de 20 mm de longitud actúan como "pies", uniendo las vigas horizontales y verticales en cada extremo; un bloque de 21 x 21 x 36 mm tallado en el extremo apical de la viga vertical "inicial"; Una abertura de 13 x 13 mm recortada en el centro de este bloque, formando un túnel que corre perpendicular a la viga móvil.</td><td></td><td></td><td>Sujete todas las uniones con pequeños soportes de acero.</td></tr><tr><td>Pintura negra (a base de agua)</td><td>Handycan</td><td>Acrílico Negro</td><td>Mate 2-3 capas para todas las superficies de madera del aparato de barra de equilibrio</td></tr><tr><td>Acabado transparente</td><td>Zarzo Estapol</td><td>Poliuretano Mate</td><td>Monocapa para todas las vigas. Doble capa para todas las demás superficies del aparato de barra de equilibrio</td></tr><tr><td>Espuma, material</td><td></td><td></td><td>de embalaje Para amortiguar cualquier caída de la barra de equilibrio</td></tr><tr><td>70% Etanol, toallas de</td><td></td><td></td> papel <td>Barra limpia y caja de portería entre cada animal.</td></tr><tr><td>Almohadillas de gasa/toallas de</td><td></td><td></td> papel <td>Para forrar el suelo de la portería</td></tr><tr><td>Casita del ratón (de la jaula de casa)</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

evaluación del comportamiento del envejecimiento ratón sistema vestibular

Behavioral Assessment of the Aging Mouse Vestibular System

Declive relacionado con la edad en el rendimiento balanza se asocia con el deterioro de la fuerza muscular, la coordinación motora y la función vestibular. Mientras que un número de estudios muestran cambios en el fenotipo equilibrio con la edad en los roedores, muy pocos aislar la contribución vestibular para equilibrar tanto en condiciones normales o durante la senescencia. Utilizamos dos pruebas de comportamiento estándar para caracterizar el desempeño equilibrio de los ratones en los puntos de edad definidos durante la vida útil: la prueba rotarod y la prueba de barra de equilibrio inclinado. Es importante destacar, sin embargo, un rotador hecha a la medida también se usa para estimular el sistema vestibular de los ratones (sin inducir signos manifiestos de la enfermedad de movimiento). Estas dos pruebas se han usado para mostrar que los cambios en el rendimiento vestibular-equilibrio mediada están presentes durante la vida útil murino. Los resultados preliminares muestran que tanto la prueba de rotarod y la prueba de barra de equilibrio modificada se pueden usar para identificar cambios en el rendimiento de equilibrio durante el envejecimiento como alternativa a la más diffictécnicas ult e invasivos tales como (VOR) mediciones vestíbulo-ocular.

Rotarod El rendimiento del motor de los ratones fue descrito como el tiempo para quedarse (TTF) registrados para cada ratón sobre 8 ensayos. Usando estas mediciones de RSA, curvas de formación para cada ratón se pueden trazar. Figura 2 muestra ejemplos de la actuación del motor de un ratón 1 mes de edad, y uno 9 meses de edad, puntero del ratón sobre el curso de 8 ensayos. Estas curvas de formación muestran un aumento en TTF durante los primeros 3-5 ensayos seguido de una meset...

Control del motor y el rendimiento balanza se conocen a deteriorarse con la edad. Este artículo presenta una serie de pruebas de comportamiento no invasivas estándar con la adición de un estímulo rotatorio sencillo para desafiar al sistema y mostrar los cambios en el rendimiento vestibulares equilibrio en un modelo murino de envejecimiento.

Evaluación del Comportamiento del Envejecimiento Ratón Sistema Vestibular

Age related decline in balance performance is associated with deteriorating muscle strength, motor coordination and vestibular function. While a number of ...

El objetivo general del siguiente experimento es identificar los cambios en el rendimiento del equilibrio en un modelo murino de envejecimiento. Esto se logra primero entrenando a los ratones en un aparato para permitirles aclimatarse al mismo, y como segundo paso, aprender la tarea. Los ratones son evaluados en el aparato para analizar su coordinación motora y equilibrio.Luego, los ratones se someten a un estímulo vestibular y se vuelven a evaluar en el aparato. Nuevamente, los resultados mostrarán cambios en el equilibrio con la edad, basados en los datos del rotor-rod y de la viga de equilibrio. La principal ventaja de esta técnica frente a métodos existentes como la prueba del reflejo vestibuloocular, que rastrea los movimientos oculares, es que se trata de un método sencillo y no invasivo para medir el rendimiento del equilibrio.Aunque este método puede proporcionar información sobre los cambios relacionados con la edad en el desempeño del equilibrio en ratones, también puede aplicarse a otros sistemas, como trastornos oculares y neuromusculares. La demostración de los procedimientos estará a cargo de Victoria Tongue, candidata al doctorado en mi laboratorio. Edward Dabney, asistente de investigación en el laboratorio, y Thomas Burton, encargado de la Instalación de Comportamiento Animal del Instituto Bosch de la Universidad de Sydney.En la prueba de la barra rotatoria, los ratones deben caminar sobre varillas que giran y aceleran. Cuando pierden el equilibrio, activan un sensor magnético. Los parámetros evaluados son registrados por el aparato de la barra rotatoria.Comience instalando espárragos en cada carril del rotor. Se proporcionan espárragos de diferentes tamaños para ratones y ratas. Sin embargo, el uso de espárragos para ratas en ratones funciona bien y evita que los ratones se aferran a los espárragos en lugar de caer.A continuación, coloque las plataformas magnéticas de aterrizaje sobre el alambre debajo de cada carril de la varilla rotor. Asegúrese de que las plataformas no estén inclinadas ni toquen el suelo, y de que estén lo más cerca posible de la pared magnética del lado derecho sin tocarla. Finalmente, deslice dos.Paneles de plástico transparente delante de cada carril de la varilla del rotor. El panel más corto se coloca debajo y el panel más largo se coloca encima. Introduzca las jaulas de los ratones en la sala de pruebas 10 minutos antes de comenzar los ensayos, mientras los ratones se adaptan.Introduzca los parámetros del test de barra rotatoria aceleradora. Primero, establezca la duración máxima del test en 60 segundos. A continuación, configure el número de carriles a utilizar o el número de ratones a probar.Luego configure las velocidades. Establezca que la prueba comience a cinco RPM y fije el máximo en 44 RPM. Aumente la velocidad progresivamente durante 60 segundos.Por último, configure los parámetros del eje para el uso de ejes para ratas que giran en dirección hacia adelante. Cuando los ratones estén listos, coloque el primer grupo que se probará sobre los ejes estacionarios durante cinco minutos, permitiéndoles aclimatarse. Luego, empuje suavemente a los ratones para que enfrenten la parte trasera de la barra rotatoria e inicie la prueba cuando todos los ratones estén orientados en la dirección correcta.Después de que los ratones hayan caído, devuélvalos a sus jaulas durante 10 minutos con acceso libre a alimento y agua entre ensayos mientras descansan. Limpie los excrementos de los animales de las pistas de varillas y las plataformas de aterrizaje. Además, restablezca las plataformas de aterrizaje para la siguiente prueba. Repita el proceso para un total de ocho ensayos por ratón.Los primeros tres a cinco ensayos se utilizan como ensayos de entrenamiento. Después de los ocho ensayos, limpie minuciosamente los carriles de los pasadores y las plataformas de aterrizaje del eje rotatorio con etanol al 70 % y limpie los paneles de plástico transparente con un detergente suave. En esta prueba, los ratones caminan por una viga expuesta de un metro de largo y catorce milímetros de diámetro, siguiendo una ligera pendiente hacia su objetivo.Una cámara oscura que contiene la cúpula de alojamiento del sujeto. Dos cámaras están colocadas a ambos lados de la viga de equilibrio. Cada una está orientada para capturar toda la longitud de la viga. Las grabaciones de video documentan los ensayos debajo de la viga.El suelo está cubierto con material amortiguador. Los ratones que caigan deben recogerse inmediatamente y colocarse dentro de la caja objetivo para que se recuperen. El interior de la caja objetivo está forrado con una toalla de papel para facilitar la eliminación de los desechos animales entre las pruebas.La caja es lo suficientemente grande como para que dentro de ella quepa una cúpula de alojamiento. Antes de probar un ratón, colóquelo en la caja objetivo durante dos minutos. Si un ratón intenta salir de la caja objetivo, cubra la abertura hacia el haz durante cinco segundos con una mano enguantada para disuadirlo de salir nuevamente.A continuación, debe entrenarse al ratón para la tarea. Colóquelo sobre la viga justo fuera de la caja objetivo y permita que camine hasta la caja objetivo. Luego, déjelo descansar un minuto, colóquelo más abajo en la viga y permita que camine hacia arriba nuevamente.Siempre déle al ratón un minuto en la caja objetivo entre los ensayos de entrenamiento. Mantenga al ratón cada vez más alejado del extremo de la viga hasta que camine desde la línea de partida sin ayuda. Para realizar una prueba, inicie la grabación y luego coloque al ratón sobre la línea de partida.Detenga la grabación cuando el ratón llegue a la caja o cuando caiga de la viga entre ensayos. Deje que el ratón descanse un minuto en la caja objetivo, y mientras tanto, limpie cualquier orina o heces de la viga y la espuma subyacente. Cada ratón debe probarse cinco veces de esta manera.Para agregar un desafío vestibular adicional a esta prueba, aplique primero el rotador, acostumbre a los ratones al sonido del rotador a tres hercios. Oprérelo durante 20 segundos. Luego transfiera al ratón a la cámara sobre el rotador.Si tiene dificultades para bajar el ratón dentro de la cámara, ofrézcale al ratón un objeto para que se afirme antes de bajar ambos dentro de la cámara. Una vez que el ratón esté dentro de la cámara, retire el objeto, coloque la tapa y active el rotador durante 20 segundos. A tres hercios, comience las grabaciones de video mientras gira.Después de 20 segundos, apague el rotador y detenga manualmente la rueda lo más rápido posible. Luego, mueva inmediatamente el ratón hasta la línea de inicio y permita que complete la prueba. Como es habitual, esta prueba puede realizarse de una a tres veces antes de que los ratones dejen de cooperar.Nunca olvide limpiar la balanza y cambiar la toalla de papel entre cada ratón para la prueba del rotor rod. Evalúe el tiempo de caída para cada uno. Un ratón de un mes y un ratón de nueve meses aumentaron de forma constante durante los ensayos uno a cinco y, por lo tanto, se consideraron ensayos de entrenamiento.Los datos de donde la puntuación se estabiliza, indicados por una línea punteada, se utilizaron para el análisis de datos. Los ratones de un mes de edad pudieron permanecer sobre el vástago giratorio significativamente más tiempo que los ratones de nueve meses de edad. Los datos provenientes de una muestra pequeña se representan como la media más o menos una desviación estándar.El impacto de la estimulación vestibular sobre el rendimiento en el equilibrio también fue mayor con la edad. Un giro número 22 a tres hercios antes del ensayo aumentó el tiempo necesario para atravesar la viga de equilibrio entre las líneas de inicio y finalización en ratones de nueve y trece meses de edad, pero no en ratones jóvenes. La significancia se evaluó utilizando medidas repetidas en Nova con una prueba post hoc TUI.Al realizar esta tarea, es importante recordar transferir al animal del desafío vestibular al aparato lo más pronto posible para minimizar la posibilidad de que el animal se recupere del estímulo antes de completar la tarea siguiendo este procedimiento. Otras técnicas como la PCR, la imagen de calcio y la electrofisiología mediante registro con micropipeta pueden utilizarse para responder preguntas adicionales, como si los cambios en el desempeño motor y el equilibrio pueden correlacionarse con alteraciones en la función de las células ciliadas vestibulares.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Behavior

Comportamiento

En las enfermedades y trastornos del movimiento de Parkinson en general, los ensayos de comportamiento sensibles y fiables son esenciales para probar nuevas terapias potenciales. A continuación, describimos una batería manejable de pruebas sensoriomotoras de ratones que son sensibles a los diferentes grados de lesión en el sistema nigroestriatal y útil para los estudios preclínicos.

Evaluación de la función sensoriomotora en modelos de ratón de la enfermedad de Parkinson

Análisis de la función de las células ciliadas vestibulares se complica por su ubicación en lo profundo de la parte más dura del cráneo, hueso temporal pétreo. La mayoría de los estudios de células pilosas funcionales han utilizado intensamente células ciliadas aislados. A continuación se describe una preparación semi-intacta de ratón epitelio vestibular para estudios electrofisiológicos y de microscopía de dos fotones.

Una preparación semi-intacta aislada del ratón epitelio sensorial vestibular de Electrofisiología y de alta resolución de la microscopía de dos fotones

Pruebas de comportamiento se utilizan en ensayos pre-clínicos para evaluar los efectos fenotípicos de una enfermedad o tratamiento sobre el bienestar de los animales. Para evaluar globalmente el funcionamiento motor, seleccionamos pruebas de locomoción general, fuerza muscular y coordinación: prueba de campo abierto, la malla y la prueba del rotarod, respectivamente.

Batería de comportamiento pruebas evaluación General locomoción, fuerza Muscular y la coordinación en ratones

Este protocolo describe el labyrinthectomy quirúrgica de una rata, que es un método útil para el estudio del sistema vestibular.

Labyrinthectomy quirúrgica de la rata para el estudio del sistema Vestibular

En este estudio, se demuestra el uso del análisis cinemático de la marcha en plano ventral de imágenes para monitorear los cambios sutiles en la coordinación motora, así como la progresión de la neurodegeneración con edad en modelos de ratón (por ejemplo, endophilin mutante avanzada base líneas de ratón).

Análisis de la marcha de deficiencias motoras dependientes de la edad en ratones con neurodegeneración

El protocolo presentado produce un persistente conflicto sensorial para los experimentos destinados al estudio de aprendizaje a largo plazo. Con el uso de un dispositivo fijo permanentemente sobre sus cabezas, ratones están continuamente expuestos a un desajuste sensorial entre entradas visuales y vestibulares mientras se mueven libremente en jaulas de la casa.

A largo plazo conflicto sensorial en comportarse libremente ratones

Se presentan protocolos para evaluar los efectos autónomos y conductuales del movimiento pasivo en roedores utilizando el movimiento vertical del ascensor y la rotación de la noria.

Evaluación de los efectos autónomos y conductuales del movimiento pasivo en ratas mediante el movimiento vertical del ascensor y la rotación de la noria

Aquí se presenta un protocolo para el modelo de fragmentación crónica del sueño (LCR) logrado por un rotor orbital controlado eléctricamente, que podría inducir déficit cognitivo confirmado y comportamiento similar a la ansiedad en ratones jóvenes de tipo salvaje. Este modelo se puede aplicar para explorar la patogénesis de la alteración crónica del sueño y trastornos relacionados.

Un modelo crónico de fragmentación del sueño usando rotor orbital vibratorio para inducir déficit cognitivo y comportamiento similar a la ansiedad en ratones jóvenes de tipo salvaje

El objetivo del presente protocolo es proporcionar instrucciones y pautas para evaluar la fragilidad física en ratones de laboratorio C57Bl / 6x129J. Se explican detalles específicos sobre cada medida utilizada en el índice de fragilidad física. También se presentan varios métodos para informar los resultados de fragilidad.

Evaluación de la fragilidad en un modelo de ratón envejecido

Los microARNs tienen funciones importantes en la estructura y función del cerebro. Aquí se describe un método para hacer cumplir miRNA hipocampo sobreexpresión mediante inyección estereotáxica de un lentivirus que expresan los genes miARN ingeniería. Este enfoque puede servir como una manera relativamente rápida para evaluar...

Inyección estereotáctica de microARN que expresan lentivirus al ratón hipocampo CA1 Región y evaluación de los resultados del comportamiento

Aprende a evaluar el equilibrio en ratones envejecidos mediante estímulo rotatorio no invasivo. Este método mide cambios en el control motor y la coordinación usando rotor rod y balance beam.

Evaluación del Comportamiento del Envejecimiento Ratón Sistema Vestibular

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