El nervio ciático esposar modelo de dolor neuropático en ratones

El objetivo general de este procedimiento es establecer un modelo de ratón de dolor neuropático después de la compresión de los nervios periféricos. Después de preparar al animal para la cirugía, se expone la rama principal del nervio ciático y se inserta un manguito de polietileno alrededor del nervio. Entonces se cierra la herida.

Para probar la sensibilidad de la pata, los ratones se colocan en cajas transparentes sobre una placa de acero perforada. A continuación, se aplican a la pata una serie de filamentos de Von Fray cada vez más grandes hasta que el animal reacciona de forma coherente a la presión. En última instancia, la presencia de una alodinia mecánica que es duradera e ipsilateral a la pata operada se puede observar trazando los umbrales mecánicos obtenidos de la prueba de Von Fray a lo largo del tiempo.

Este modelo puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del dolor, como los mecanismos que subyacen al dolor neuropático. También se puede utilizar para estudiar los tratamientos actuales para probar los agentes neo thepath o para estudiar las consecuencias depresivas del dolor neuropático. Sin embargo, la demostración visual de este método es fundamental, ya que la implantación del manguito es un paso difícil de explicar sin apoyo visual.

Para evaluar el umbral mecánico de extracción de las patas, primero coloque los ratones para que los habiten en cajas individuales transparentes en una placa de acero perforada, se pueden probar hasta 12 animales en paralelo para la prueba. Utilice filamentos de von Frey. Estos pelos de plástico de diámetros calibrados se unen a un aplicador de mano.

Al doblarse, cada filamento ejerce una presión proporcional a su diámetro. En ratones, los filamentos más utilizados oscilan entre el punto 16 y el 10 gramos. Comience con la presión más ligera.

Al medir los umbrales para probar a los ratones, aplique el filamento en la pata trasera izquierda hasta que los filamentos comiencen a doblarse. Evite los bordes laterales de la pata, que pueden ser más sensibles. El animal reacciona a la aplicación del filamento.

Si la pata se estremece o se retira, repita la aplicación dos veces más, y si el animal reacciona a las tres aplicaciones, pruebe la otra pata. De lo contrario, aplique los filamentos un total de cinco veces antes de probar la otra pata. Pruebe cada ratón consecutivamente con el filamento von Frey elegido y, a continuación, repita el proceso con el siguiente filamento.

Si un animal reacciona tres veces al mismo filamento, esto se considera un resultado positivo. Cuando dos filamentos consecutivos obtengan puntuaciones positivas, detenga la prueba en esa pata. El umbral de retiro de la pata es el menor de los dos valores de gramos para un ratón determinado.

Estos valores pueden diferir entre ambas patas. Repita este procedimiento diariamente hasta que al menos tres valores de umbral consecutivos estén estables. A continuación, proceda con la cirugía.

Registre el peso del animal, que debe ser superior a 20 gramos, y anestesiar al animal con ketamina y xilacina. Compruebe la ausencia de reflejos en las patas o en los ojos. Aplique un gel protector en los ojos con un hisopo.

A continuación, afeita la pierna derecha desde la rodilla hasta la cadera. A continuación, coloque al animal con la pata trasera derecha hacia arriba sobre una almohada pequeña y asegúrela con cinta adhesiva. Desinfectar la piel expuesta con clorhexidina y etanol al 70%.

Empieza por palpar para encontrar el fémur. A continuación, haga una incisión de 0,5 centímetros paralela al fémur unos 1,5 milímetros por detrás del fémur. Ahora, usando varillas de autoclave, separe el músculo cerca del fémur, pero no los corte.

La rama principal del nervio ciático debe hacerse visible. Si hay sangrado, asegúrese de limpiarlo con un hisopo para los controles simulados. Esto completa la cirugía para que los ratones sean esposados.

Inserte dos palitos debajo del nervio ciático para exponer la rama principal del nervio. Añade un chorrito de solución salina fisiológica para hidratar el nervio. Ahora agarre un puño dividido con un palo de acero puntiagudo y una abrazadera de bulldog.

Luego inserte el bulldog y gírelo 180 grados para que sostenga el manguito opuesto a la abertura lateral del brazalete. Ahora cierra el bulldog y retira el palo puntiagudo. A continuación, pídele a un asistente que sostenga los dos palos debajo del nervio y sepárelos suavemente.

Para permitir el acceso al nervio, inserte el manguito de dos milímetros alrededor de la rama principal del nervio ciático. Comience insertando la parte del manguito que es distal al bulldog alrededor de la parte del nervio que está proximal a la cadera. A continuación, cierre el brazalete suavemente con unos alicates para asegurarse de que el brazalete está cerrado correctamente.

Dale la vuelta. Ahora, retira los palitos y sutura la piel para cerrarla. Con nudos quirúrgicos, transfiera el ratón a su jaula limpia de casa, colocándolo en su lado izquierdo.

Manténgalo caliente con la lámpara de calor hasta que despierte. Agregue comida y agua adicionales en la jaula para que el ratón pueda alimentarse. Los animales pueden ser examinados para detectar umbrales de retiro deficientes el día después de la cirugía, pero es mejor esperar tres días para disminuir la hipersensibilidad posquirúrgica con este procedimiento.

El manguito a los ratones muestra una alodinia ipsilateral durante más de dos meses en comparación con los controles simulados. Tratamiento de los ratones con cinco miligramos por kilogramo de nortriptilina. Un antidepresivo tricíclico dos veces al día alivia la alodinia neuropática después de unas dos semanas de tratamiento.

Si se interrumpía el tratamiento, los ratones solían recaer en tres o cuatro días. Este modelo también es sensible a otro tratamiento del dolor neuropático: los gabapentinoides. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo averiguar la rama principal del nervio ciático en el nervio anestesiado e insertar una cubierta alrededor de él.

En este modelo de dolor neuropático, la prueba de un solo deshilachado permite evaluar además los umbrales mecánicos y estudiar las respuestas a los fármacos.