Name: Construcción de cámaras de vapor utiliza para exponer los ratones al alcohol durante el equivalente de los tres trimestres del Desarrollo Humano (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 27 s
Description: Aprende a construir cámaras de vapor de alcohol para exponer ratones durante los tres trimestres del desarrollo humano. Este modelo permite estudiar los efectos del alcohol fetal en neurociencia y biología del desarrollo.

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Apoyada por los Institutos Nacionales de Salud subvenciones R01-AA015614, R01-AA014973, AA014127 y T32-K12-GM088021. Los autores agradecen a Samantha L. Blomquist para la asistencia técnica y los Dres. Kevin Caldwell y Donald Partridge para evaluar críticamente el manuscrito y video.

Todos los animales procedimientos fueron aprobados por la Universidad de Nuevo México-Ciencias de la Salud Animal del Centro de Atención Institucional y el empleo Comisión. 1. Vapor Asamblea Cámara <ol><li> Hojas de corte de policarbonato con una sierra circular o sierra de calar a las dimensiones previstas en el video de arriba, abajo, delante, detrás, a los lados, y la puerta (Figura 1 y Tabla 1). </li><li> Con una sierra circular o sierra de calar, cortar una abertura 8 pulgadas de alto por 16 pulgadas de ancho en el medio del panel frontal. </li><li> Mida y marque los agujeros para la bisagra de piano en el de 18 pulgadas por 10 pulgadas de hoja de policarbonato que se convertirá en la puerta de la cámara. </li><li> En la puerta, taladre agujeros del fregadero del contador con un poco de 5/16 de pulgada de perforación, y con un poco de 3/16 de pulgada de perforación, perforar el agujero para los tornillos. Asegúrese de perforar agujeros del fregadero de venta libre en el interior de la puerta para que las cabezas de los tornillos. </li><li> Preparar las láminas de policarbonato para la soldadura. </li><li> Ensamble front, paneles traseros y laterales en el panel inferior utilizando para soldar # 16. </li><li> Selle todos los espacios entre los paneles con autógena-en # 16. </li><li> Coloque el panel superior con autógena-en # 16. </li><li> Utilice abrazaderas de barra o libros de texto pesados ​​para mantener todo en su lugar, mientras que las soldaduras curan. </li><li> Adjuntar un 1 pulgada de una pieza de 12 pulgadas de policarbonato en la parte frontal del panel 1 pulgada por debajo de la abertura para la fijación de la bisagra de la puerta. </li><li> Deje por lo menos 24 horas para soldar de curar. </li><li> Corte 2 pedazos de tubería PEX 12 pulgadas de largo y 1 trozo de tubo PEX largo de 1 pulgada. </li><li> Con una broca de 5/16, perforar un agujero en cada uno de la tubería de PEX 12 pulgadas aproximadamente 1 a 2 pulgadas de un extremo. </li><li> Adjuntar 2 x 12 pulgadas tubería de PEX a un conector en T 3/8 pulgadas con los agujeros situados fuera del conector. </li><li> Tape los extremos abiertos de la tubería de PEX con 3/8 pulgadas tapones. </li><li> Fije la bisagra al panel frontal y la puerta usando tornillos 4-40 y tuercas. </li><li> Uso de la puerta como una guía, marca de los agujeros necesarios para la bisagra de piano sobre el espaciador de 1 pulgada en el panel frontal de la cámara. </li><li> Con una broca de 3/16 pulg pulgadas, perfore los agujeros en el panel frontal de la bisagra de piano. </li><li> Coloque la puerta y bisagra al panel frontal mediante tornillos 4-40 y tuercas. </li><li> Montar las abrazaderas de palanca como se muestra en el vídeo con una arandela y una tuerca en cada lado del brazo lateral. </li><li> Marque y perfore orificios de 3/16 pulgadas para el SUJETADORES en el panel frontal y se adhieren basculante abrazaderas con tornillos 4-40 y tuercas. </li><li> Añadir juntas de bulbo de caucho de 3/8 pulgadas a la parte interior de la puerta. </li><li> Con una broca de perforación 5/8 de pulgada, perforar un agujero en el centro del panel superior para el puerto de entrada. </li><li> Perforar un agujero de 1/2 pulgada de la parte inferior / centro del panel posterior de la boca de salida. </li><li> Montar el puerto de salida empujando la parte roscada de 3/8 pulgadas a través de la pared a través de los adaptadores de la pared posterior de la cámara de vapor en el orificio del puerto de salida. Coloque la tuerca delinterior de la cámara para mantenerlo en su lugar. </li><li> Quite la cubierta protectora de láminas de policarbonato. </li><li> Coloque la pieza de 1 pulgada de tubería PEX para el conector en T y forzar la tubería PEX a través del agujero en la parte superior de la cámara desde el interior. </li><li> Adjuntar un 3/8 pulgadas 90 codazo en la parte superior de la tubería PEX de 1 pulgada desde el exterior. NOTA: Realice un orificio de 1/2 pulgada de la puerta e inserte un sello septos 1/2 pulgada en el agujero. </li><li> Repita los pasos 1 a 22 para el aire de control sólo de la cámara. </li></ol> 2. Bastidor y Asamblea Air Delivery <ol><li> Si la colocación de las cámaras en la cesta / bastidor mencionado en la lista de materiales, montar la cesta de acuerdo con las instrucciones del fabricante. </li><li> Con tuercas y tornillos de repuesto, coloque un trozo de policarbonato a la cremallera para sujetar los reguladores de flujo de aire. </li><li> En cualquier lugar en el trozo de policarbonato, marque y taladre agujeros de 3/4 pulgadas para los reguladores de flujo de aire y conecte los reguladores con las tuercasproporcionado. </li><li> Adjuntar 3/8 pulgadas a través de la pared del adaptador a los puertos de entrada y salida de los reguladores de flujo de aire. </li><li> Montar el frasco de etanol con la piedra de aireación, # 8 tapón y cierre rápido en la línea de conectores. </li><li> Uso de tubo Tygon de 3/8 pulgadas, conectar los reguladores de flujo a la bomba de aire y matraz de etanol como se muestra en la Figura 1. </li><li> Para la única cámara de aire, conectar el puerto de salida del regulador de flujo de aire a la entrada 3/8 de pulgada 90 codo con tubo Tygon de 3/8 pulgadas, como se muestra en la Figura 1. </li></ol><img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51839/51839fig1highres.jpg" width="500"> Figura 1. Representación esquemática de la configuración de las cámaras de vapor. Un conector en T está unido a la bomba de aire de bajo ruido. Un lado del conector en T está conectado directamente a un regulador de flujo de aire para la única cámara de vapor de aire. Los otros sIDE se divide de nuevo y se fija a 2 reguladores de flujo de aire diferentes, una para el aire y uno para el etanol. La cámara de aire está conectado directamente al regulador como se muestra. Para la cámara de vapor de etanol, un regulador de flujo de aire está conectado a la piedra aireador sumergido en etanol líquido en el matraz de filtración. El puerto de brazo lateral del matraz de filtro se conecta con la salida del regulador de aire, como se indica. El vapor de etanol fusionado y aire se conecta entonces a la entrada de la cámara de vapor de etanol. Los tubos de salida (no mostrados) están conectados a una salida de ventilación en la sala. 3. Prueba de Cámaras y ajustar los niveles de vapor de etanol <ol><li> Añadir 600 ml de 190 pruebas de etanol al matraz de filtro, inserte la piedra de aireación, y conectar a la entrada del tubo al brazo lateral del matraz. </li><li> Cierre las puertas de la cámara y encienda la bomba de aire. </li><li> Ajuste los reguladores de flujo de aire de manera que aproximadamente la mitad de la cantidad de aire fluye a través del líquido de alcohol como el aire que se mezcla con. Adjust el aire sólo el flujo de aire para el flujo combinado del alcohol y el aire de la cámara de etanol. </li><li> Permitir a cámaras de equilibrar durante al menos 30 min antes de medir la concentración de etanol de aire. </li><li> Medir la concentración de etanol de aire mediante la extracción de 5 ml de aire con una aguja 18G y una jeringa de 60 ml a través del septo. Diluir la muestra con el aire de la habitación dibujando el émbolo hacia atrás hasta 60 ml (dilución 1:12). Mida el nivel de etanol aire utilizando un alcoholímetro de conformidad con las instrucciones del fabricante. Es necesaria la dilución de la cámara de aire para lograr los niveles de vapor de alcohol dentro del rango de detección del alcoholímetro. NOTA: Si utiliza diferentes niveles de la exposición al alcohol puede necesitar la dilución que ser ajustada. </li><li> Como punto de partida, ajuste los reguladores de flujo de aire según sea necesario para lograr una concentración de alcohol de aire de aproximadamente 4,5 a 5 g / dl (gramos de alcohol vaporizado por dl de aire). </li></ol> 4. Reproducción Animal <ol><li> Las mujeres de la casa Grupo C578BL / 6 ratones (2-3 meses de edad) durante al menos 1 semana para sincronizar los ciclos ováricos. </li><li> Albergar Individualmente masculinos C57BL / 6 ratones (2-5 meses de edad) durante al menos 2 semanas. </li><li> Después de sincronizar, colocar una sola hembra con un macho durante 5 días para permitir el apareamiento. </li><li> Después del apareamiento, los machos y eliminar de forma individual las hembras de las casas y colocarlos en cámaras. </li></ol> 5. Pre y post-natal Exposición Ethanol Vapor <ol><li> La exposicion presas embarazadas a vapor de etanol durante 4 horas al día, comenzando a las 10 horas durante el ciclo de luz (luces de 06 a.m.-6 p.m.), excepto el día del nacimiento para prevenir la muerte cachorro. </li><li> Pesar represas en días de gestación (G) 5, G13-G14, y G18-G20 para vigilar embarazos; ropa de cama fue cambiado el día que las hembras se pesaron para reducir al mínimo la manipulación. </li><li> Cada día reemplazar la comida para los grupos de etanol expuesta para evitar el consumo de gránulos con cualquier etanol absorbido en ellos. </li><li> En el día denacimiento no exponga animales. Después del nacimiento exponer las presas y cachorros durante 4 horas al día, comenzando a las 10 am de P1-P12. </li><li> Pesar cachorros en P2, P8, P12, y P25; y cambiar la ropa de cama en P8 y P12 a minimizar la manipulación adicional. </li><li> Inmediatamente después de la última exposición (P12), la transferencia de las jaulas a una habitación estándar albergar a los animales. </li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

A continuación, describimos en detalle los métodos para la construcción de cámaras de inhalación de vapores. Los materiales y las herramientas requeridas para construir las cámaras están fácilmente disponibles a partir de un número de proveedores comerciales y los pasos para la construcción de las cámaras son relativamente sencillos. El sistema que se describe aquí no contiene válvulas de retención en línea para evitar el reflujo y la mezcla. No fue posible medir cualquier etanol detectable en el aire sólo cámaras que s...

Beber alcohol durante el embarazo puede dañar al feto, causando alteraciones persistentes en muchos órganos y sistemas que disminuyen significativamente la calidad de vida de las personas afectadas y sus familias. Se estima que aproximadamente el 10-30% de las mujeres beben durante el embarazo en los EE.UU., con 1-8% de beber en un 1,2 patrón de atracones. El rango de los efectos producidos por la exposición al etanol durante el desarrollo fetal se conoce colectivamente como trastornos del espectro alcohólico fetal (TEAF). Estimaciones recientes indican que TEAF son un importante problema de salud pública con una prevalencia de hasta el 2-5% en los EE.UU. 3. Cuanto más grave manifestación de TEAF es el Síndrome de Alcohol Fetal (FAS), que se caracteriza por retraso del crecimiento, anomalías craneofaciales, y los déficits neuroconductuales, incluyendo problemas de aprendizaje. La prevalencia de la FAS ha sido estimada en 0,2-0,7% en los EE.UU. 3. Los tratamientos actualmente disponibles para los FASD son sólo parcialmente eficacesy el desarrollo de tratamientos más eficaces se ve limitada por la falta de comprensión de las bases celulares y moleculares de este complejo espectro de trastornos. Datos de los Defectos de Nacimiento Nacionales Prevention Study (NBDPS) indican que las mujeres embarazadas con más frecuencia beben durante el 1 º trimestre del embarazo, antes de que el embarazo ha sido detectado, seguido de la abstinencia durante las últimas etapas de gestación 2. El NBDPS también encontró que el segundo patrón más común de consumo de etanol durante la gestación implica beber a través de todos los trimestres del embarazo 2. Las razones de esto son la falta de conciencia acerca de los efectos potencialmente nocivos de la exposición fetal etanol (incluso a dosis bajas), el acceso limitado a la atención prenatal, la historia positiva de los trastornos neuropsiquiátricos, y abuso o dependencia de etanol 4. Curiosamente, el NBDPS informó de que el tercer patrón más común de consumo involucrado abstinencia durante la 1 <sup&gt; ª y 2 ª trimestres seguidos de consumo durante el 3er trimestre, cuando a menudo se supone que la bebida es seguro porque la organogénesis se ha completado en su mayoría. Sin embargo, el 3 º trimestre es un período de alta susceptibilidad a daños en el sistema nervioso inducido por etanol porque se trata de un período en que los circuitos neuronales sufren profunda refinamiento 2. El NBDPS también identificó otros patrones menos frecuentes de consumo de alcohol que se producen durante el embarazo, incluyendo el consumo a lo largo de la 1 ª y 2 ª trimestres seguidos de abstinencia durante el 3 º trimestre 2. En un intento de modelar los diferentes patrones de consumo de etanol observados en mujeres embarazadas, un número de paradigmas de desarrollo de exposición etanol haber establecido mediante diversas especies animales, con ratas y ratones que son 5,6 más común. La duración de la gestación en estos animales normalmente lasct aproximadamente 3 semanas, lo que corresponde a la 1 ª y 2 ª trimestre del embarazo humano. Muchos estudios en roedores han evaluado el impacto de diferentes dosis y pautas de exposición a etanol durante este período. Los ejemplos de los métodos utilizados frecuentemente para administrar etanol a ratones y ratas preñadas incluyen la administración a través de dietas líquidas 7,8, adición de etanol al agua de bebida 9,10, beber voluntaria de soluciones sacarina endulzadas con 11, sonda gástrica 12, la inhalación de vapor 13 , y la inyección subcutánea o intraperitoneal 14. Los resultados de estos estudios han recapitulado varias de las deficiencias observadas en los seres humanos con TEAF, lo que demuestra que la exposición durante las primeras etapas del embarazo es suficiente para dañar los circuitos neuronales a través del cerebro (revisado en 6,15). Los experimentos con roedores también han demostrado que la exposición durante el equivalente a la 3 ª </sup&gt; Trimestre del embarazo humano, lo que corresponde aproximadamente a las primeras 1-2 semanas de vida postnatal en ratas y ratones, puede afectar de manera significativa el desarrollo del cerebro. La exposición durante este período se ha modelado mediante la administración de etanol a ratas o ratones neonatales. El etanol se ha administrado a estos animales usando una variedad de métodos, incluyendo la alimentación por gastrostomía en animales criados artificialmente-16-18, intubación intragástrica 19, la inyección subcutánea 20, y la inhalación de vapor de 21,22. Estos estudios han demostrado de forma convincente que la aceleración del crecimiento del cerebro es un período de gran vulnerabilidad a los efectos del desarrollo de etanol 6. Como se mencionó anteriormente, el consumo durante todos los trimestres del embarazo es un patrón común de consumo de etanol en las mujeres 2. Sin embargo, relativamente pocos estudios han evaluado el impacto de este modelo de exposición utilizando modelos animales. Algunos de estos estudios han tenido advantagE de grandes animales donde se produce la 3 ª trimestre equivalente en el útero en lugar de el período neonatal como en el caso de ratas y ratones. Estos modelos animales incluyen primates no humanos 23,24 y ovejas 25-27. Sin embargo, estos modelos animales no han sido ampliamente utilizado en la investigación FASD, en parte, debido al alto costo y la necesidad de instalaciones de atención especializada. Los roedores se han utilizado más comúnmente para caracterizar el efecto de la exposición de etanol todos trimestre sobre el desarrollo fetal 5. Los conejillos de indias han sido particularmente ventajoso a este respecto dado su desarrollo prenatal extensa y similitudes en la maduración del cerebro a la de los seres humanos 28,29. Con los conejillos de indias, que ha sido posible caracterizar el efecto de la exposición de etanol en el útero que incluye el período de desarrollo equivalente de la humana 3 ª trimestre. El comparativamente alto coste de estos animales, así como la duración relativamente larga de su embarazo(~ 67 días), ha limitado su uso a unos pocos laboratorios que trabajan en la investigación TEAF. Debido a su uso rentabilidad y amplia en la investigación biomédica, los investigadores han utilizado ratas para modelar la exposición al etanol durante todos los trimestres del embarazo. En los estudios iniciales, las ratas fueron expuestas durante el embarazo a través de dietas líquidas seguidas por la administración de etanol a través de gastrostomía para criar artificialmente a los recién nacidos (día postnatal (P) 1-10) resulta en niveles de etanol en sangre de pico (BEC) en los embalses de 0,08 g / dl y en las crías de 0,16 g / dl. Este paradigma causó alteraciones duraderas en la mielinización del nervio óptico y redujo el número de fibras de glía de Bergmann en el cerebelo 30-32. Del mismo modo, Maier y colaboradores utilizando condiciones de cría artificial administrados etanol para ratas madres embarazadas de manera compulsiva, como a través de la intubación intragástrica seguido de la administración neonatal durante parte del 3er trimestre equivalente (P4-9) 33,34. PBEC maternas y las crías EAK fueron 0,3 g / dl en dos días de gestación 20 y P6. Este paradigma de la exposición todos trimestre resultó en el retraso del crecimiento que fue significativamente mayor que la observada en cachorros expuestos durante períodos seleccionados de gestación 33. Además, las ratas expuestas a etanol durante el equivalente a todos los trimestres mostraron una reducción en el número de células granulares que fue mayor que el observado en los animales expuestos durante otros períodos 34 de Purkinje del cerebelo y. Las reducciones en el número de células del hipocampo También se informó con este paradigma, pero estos efectos parecen ser principalmente una consecuencia de la exposición durante el tercer trimestre 3-equivalente 35. Un método que consiste en la administración de etanol a través de sonda intragástrica a ratas embarazadas y ratones recién nacidos también se ha utilizado para modelar toda la exposición trimestre 36. Este método, que cedió BEC de 0,13 g / dl en los embalses (día gestacional 17) y 0,24 g / dl en las crías P6, lon inducidaalteraciones g duración de los niveles de neurotransmisores de monoamina en el hipocampo y el hipotálamo, y el aumento de expresión de DNA methyltransferases y metil CpG proteína 2 de unión en el hipocampo 37,38. El uso de un paradigma exposición similar (BEC = 0,14 a 0,2 g / dl en presas y 0,2 g / dl en cachorros), Gil-Mohapel et al. 39 detecta un aumento en el número de nuevas neuronas inmaduras en el giro dentado de ratas adultas que puede representar un mecanismo compensatorio al daño neuronal inducido por etanol o una alteración en la maduración de las neuronas adultas-nacido. Asimismo, los investigadores han tratado de modelar toda la exposición de etanol trimestre mediante la exposición de las presas a través de dietas líquidas o agua potable durante el embarazo y la lactancia 9,40. Sin embargo, la utilidad de la exposición de las crías a través de la leche de su madre es limitada, ya que normalmente se traduce en BEC bajos cachorros (por ejemplo, ,002-,05 g / dl; 41,42). Los ratones también se han utilizado extensIVELY para caracterizar los efectos de la exposición del desarrollo de etanol. Este modelo animal comparte muchas de las ventajas descritas anteriormente para el modelo animal de rata, con la ventaja adicional de que muchas cepas de ratón genéticamente modificados están disponibles 5. Los ratones se han utilizado con éxito para caracterizar los efectos del etanol durante la 1 ª, 2 ª o 3 ª trimestre del embarazo 43,44. Sin embargo, el impacto de toda la exposición trimestre en estos animales no ha sido bien caracterizado porque es técnicamente más difícil de exponer a los ratones durante el equivalente a todos los trimestres de embarazo humano. Por ejemplo, la cría artificial y sonda gástrica, que se han utilizado con éxito en ratas, requieren procedimientos más especializados en ratones 45. A lo mejor de nuestro conocimiento, sólo un estudio hasta la fecha ha tratado de estudiar el efecto de toda la exposición de etanol trimestre utilizando ratones; estos animales fueron expuestos a una solución de etanol en agua potable during embarazo y la lactancia 46. BEC maternas fueron 0,07 g / dl y las crías BEC no fueron determinadas, pero espera que sea una fracción de los de las presas. Aquí se describe un nuevo modelo para la exposición de etanol toda trimestre de los ratones en el que se administró alcohol a ambas presas embarazadas y los recién nacidos a través de cámaras de inhalación de vapores. Cámaras de vapor fueron construidas sobre la base de un diseño previo 47. Proporcionamos instrucciones detalladas sobre la forma de construir las cámaras de inhalación y llevar a cabo los procedimientos de exposición. También ofrecemos información sobre las CEBs que se pueden lograr y los efectos de la exposición sobre la supervivencia de las crías y el crecimiento.

<table><tbody><tr><td>Policarbonato 1/4" transparente 48" x 24"</td> <td>McMaster-Carr</td><td>8574K23</td><td>10</td></tr><tr><td>Sello de bulbo de goma espuma 3/8" de ancho x 7/32" de alto</td><td>McMaster-Carr</td><td>93085K67</td><td>10 pies</td></tr><tr><td>Soldado #16</td><td>McMaster-Carr</td><td>7515A11</td><td>3</td></tr><tr><td>Bisagra de piano de 12" de largo</td><td>McMaster-Carr</td><td>1658A11</td><td>2 x 1 pie</td></tr><tr><td>Abrazaderas de palanca de sujeción estándar</td><td>McMaster-Carr</td><td>5126A26</td><td>8 Tubo</td></tr><tr><td>PEX de 1/2"</td> <td>McMaster-Carr</td><td>51275K88</td><td>Racor</td>de</tr><tr><td>tubo en T con púas de 10 pies (Negro) Paquete 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K608</td><td>1</td></tr><tr><td>Racor de tapón de púas (Negro) Paquete 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5462K79</td><td>1</td></tr><tr><td>Accesorio de tubo de codo de púas (Negro) Paquete 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K596</td><td>1</td></tr><tr><td>Adaptadores de pared pasante de 3/8", tubo a tubo roscado</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K851</td><td>1</td></tr><tr><td>Tornillo de máquina Phillips 4-40</td><td>McMaster-Carr</td><td>91772A112</td><td>1</td></tr><tr><td>Tuerca hexagonal de tornillo para máquina 4-40</td><td>McMaster-Carr</td><td>90480A005</td><td>1</td></tr><tr><td>Caudalímetro de montaje en panel 2-20</td><td>McMaster-Carr</td><td>41945K76</td><td>3</td></tr><tr><td>matraz, FILTRO 1.000 ml 6/PAQUETE</td><td>VWR</td><td>89001-800</td><td>número arábigo</td></tr><tr><td>Sello de precisión Septa</td><td>VWR</td><td>89084-490</td><td>1</td></tr><tr><td>VWR Tapón de goma negro #8 1 orificio</td><td>VWR</td><td>59581-367</td><td>1</td></tr><tr><td>TUBO TYGON R3603 3/8X9/16 50'VWR</td><td></td> <td>89068-556</td><td>1</td></tr><tr><td>TUBO TYGON R3603 1/4X11/16 50'VWR</td><td></td> <td>89068-502</td><td>1</td></tr><tr><td>Aireador Stone P2120</td><td>VWR</td><td>32573-007</td><td>1</td></tr><tr><td>3/8" Conectores en T Pk de 20</td><td>VWR</td><td>46600-060</td><td>1</td></tr><tr><td>Seccionadores VWR cónicos Pk de 10</td><td>VWR</td><td>46600-110</td><td>1</td></tr><tr><td>3/8 Manguera Lengüeta con válvula acoplamiento en línea Colder</td><td>Products Company</td><td>HFCD17612</td><td>1</td></tr><tr><td>Bomba de aire de capacidad media</td><td>LMI Fabricantes</td><td>DB60L</td><td>1</td></tr><tr><td>Estantería de alambre nexelate 36"W x 24" D x 63"H</td><td>T9A990135</td><td>industrial global</td><td>1</td></tr><tr><td>Juego de ruedas de vástago de (4) ruedas de poliuretano de 5" Global</td><td>industrial</td><td>T9A500591</td><td>1</td></tr></tbody></table>

construcción de cámaras de vapor utiliza para exponer los ratones al alcohol durante el equivalente de los tres trimestres del desarrollo humano

Construction of Vapor Chambers Used to Expose Mice to Alcohol During the Equivalent of all Three Trimesters of Human Development

La exposición al alcohol durante el desarrollo puede dar lugar a una constelación de anormalidades morfológicas y de comportamiento que se conocen colectivamente como trastornos del espectro alcohólico fetal (TEAF). En el extremo más grave del espectro es el síndrome de alcoholismo fetal (FAS), que se caracteriza por retraso del crecimiento, dismorfología craneofacial, y los déficits neuroconductuales. Los estudios con modelos animales, incluidos los roedores, se han dilucidado muchos mecanismos moleculares y celulares implicados en la fisiopatología de los FASD. Administración de etanol a los roedores gestantes se ha utilizado para modelar la exposición humana durante el primer y segundo trimestres del embarazo. Tercer trimestre el consumo de etanol en los seres humanos ha sido modelado usando roedores neonatales. Sin embargo, son pocos los estudios en roedores han caracterizado el efecto de la exposición de etanol durante el equivalente a los tres trimestres del embarazo humano, un patrón de exposición que es común en las mujeres embarazadas. Aquí, se muestra cómo construir cámaras de vapor de fácil omateriales btainable que cada uno puede alojar hasta seis jaulas de ratón estándar. Se describe un paradigma cámara de vapor que puede ser utilizado para modelar la exposición al etanol, con una mínima manipulación, durante los tres trimestres. Nuestros estudios demuestran que las presas embarazadas desarrollaron tolerancia metabólica significativa a etanol. Sin embargo, los ratones recién nacidos no se desarrolló tolerancia metabólica y el número de fetos, el peso del feto, el peso de la placenta, el número de crías / camada, número de crías muertas / camada, y peso de las crías no se vieron afectados significativamente por la exposición de etanol. Una ventaja importante de este paradigma es su aplicabilidad a estudios con ratones genéticamente modificados-. Además, este paradigma minimiza la manipulación de los animales, un factor de confusión importante en la investigación del alcoholismo fetal.

Figura 2A muestra que tanto en ratones embarazadas y los hijos recién nacidos fueron expuestos a concentraciones de vapores de etanol relativamente estables en las cámaras. Estos variaron entre 4-6 g / dl. Figura 2B muestra las BEC obtenidos en los ratones embarazadas como una función del tiempo. BEC se midieron usando un alcohol deshidrogenasa estándar basado ensayo 48. En G5, las BEC se elevó rápidamente a ~ 60 mM de 2 h después del inicio de la exposición y alcanzó su punt...

Se demuestra la construcción de cámaras de vapor de alcohol utilizando materiales fácilmente disponibles que albergan simultáneamente 6 jaulas de ratón. Se describe aún más su uso en un modelo de ratón de la exposición fetal de alcohol equivalente a los 3 trimestres del embarazo humano. Este paradigma expone los animales durante la gestación y después del parto 1-12 días.

Construcción de cámaras de vapor utiliza para exponer los ratones al alcohol durante el equivalente de los tres trimestres del Desarrollo Humano

Exposure to alcohol during development can result in a constellation of morphological and behavioral abnormalities that are collectively known as Fetal ...

En este video, demostraremos cómo construir y ensamblar cámaras de vapor de alcohol. También describiremos un paradigma de inhalación de alcohol que expone maas durante el equivalente a los tres trimestres del desarrollo humano. Las cámaras son altamente personalizables según los niveles deseados de alcohol en sangre o los paradigmas de exposición.Nuestro diseño de cámara puede albergar hasta seis jaulas de ratón de tamaño estándar donde los ratones tienen acceso ad lipídico a la comida y al agua. Este paradigma produce niveles relativamente altos de alcohol en la sangre tanto en ratones preñados como en cachorros sin el uso de rosol. Escuchamos desde el laboratorio de Fernando Valenzuela en la Universidad de Nuevo México.En este video, demostraremos el ensamblaje de cámaras de vapor de etanol de policarbonato y describiremos su uso en un modelo de ratón de tres trimestres de exposición fetal al alcohol. Cualquier persona con conocimientos básicos de carpintería podrá construir las cámaras y las dimensiones se pueden modificar para adaptarse a las necesidades individuales. Las cámaras se pueden alojar en la instalación de animales durante toda la exposición y minimizarán el estrés relacionado con el transporte y la manipulación de los animales.Debido a las diferencias en las etapas de desarrollo, la administración de etanol a roedores preñados se ha utilizado para modelar la exposición humana durante el primer y segundo trimestre, mientras que la administración de etanol a los recién nacidos se utiliza para modelar la exposición en el tercer trimestre. Estas cámaras están diseñadas para albergar múltiples jaulas de ratones simultáneamente y exponer a las madres embarazadas, así como a los recién nacidos alojados con su madre. Algunas de las ventajas de utilizar este paradigma de exposición al alcohol incluyen la capacidad de imitar los tres trimestres de desarrollo, la reducción del estrés de las madres y cachorros embarazadas, así como la flexibilidad en el control sobre el nivel de exposición al etanol.En cinco piezas individuales de 24 por 48 pulgadas de un cuarto de pulgada de grosor, las láminas de policarbonato transparente miden y marcan las dimensiones dadas para la parte superior, inferior, frontal, trasera, laterales y la puerta. Estas dimensiones construirán una cámara de 32 pulgadas de ancho, 22 pulgadas de profundidad y 14 pulgadas de alto. Una cámara de este tamaño cabrá adecuadamente en seis jaulas de ratones estándar que miden 11 pulgadas y media por siete pulgadas y media por cinco pulgadas y media de alto.Es importante recordar que esto proporciona una sola cámara, y este proceso deberá repetirse para terminar con dos cámaras idénticas, una cámara para exposición al alcohol y una cámara para exposiciones controladas solo con aire. Las láminas de policarbonato se pueden cortar con una sierra circular equipada con una hoja de 80 dientes o una sierra de calar equipada con una hoja específica de plástico o plexiglás. Corte las láminas de policarbonato a las dimensiones medidas, teniendo el mayor cuidado posible para garantizar cortes rectos.Esto reducirá los espacios durante el proceso de ensamblaje una vez que todas las piezas estén cortadas. Mide un rectángulo de ocho pulgadas por 16 pulgadas en el centro del panel frontal para crear una abertura para la puerta. Con una broca de tres y ocho pulgadas, perfore un agujero en el interior de cada esquina.Los orificios se utilizan para insertar la subcuchilla de la plantilla a través de la lámina de policarbonato y cortar la abertura. Si se utiliza una sierra circular, se puede realizar un corte por inmersión. Es posible que se necesiten algunos cortes hacia atrás para limpiar los bordes cerca de las esquinas.Una vez que se cortan todos los bordes, se puede quitar la pieza central y queda una abertura en el panel frontal. Para comenzar el montaje de la puerta, marque los orificios necesarios para sujetar la bisagra del piano a la puerta. Usando una broca de cinco 16 pulgadas, perfore los orificios del avellanado en las marcas, estos orificios del avellanado aceptarán la cabeza del tornillo y solo deben perforarse hasta la mitad de la lámina de policarbonato.Con una broca de tres 16 pulgadas, complete los orificios a través de la hoja usando los orificios del avellanado como guía antes del ensamblaje. Retire aproximadamente dos pulgadas de la cubierta protectora de las láminas de policarbonato para permitir la soldadura de las piezas. El proceso de ensamblaje puede ser rápido, por lo que puede ser útil colocar la parte inferior, trasera, delantera y laterales antes de soldar las piezas.Para soldar el policarbonato, use la soldadura de fraguado rápido en cemento solvente 16. Para comenzar el ensamblaje, agregue un generoso cordón de soldadura en el borde inferior de la pieza lateral. Limpie inmediatamente cualquier gota de soldadura con una toalla de papel.Coloque el lado en la pieza inferior con ayuda. Ensambla el resto de las paredes en el fondo de la cámara. Recuerde que para las dimensiones indicadas, las piezas laterales encajarán entre el panel frontal y el trasero.Una vez que las paredes estén ensambladas, rellene los espacios entre las juntas desde el interior con el Weldon. Para fijar la parte superior de la cámara, agregue una cantidad generosa de Weldon en la parte superior de cada pared. Coloque el panel superior encima de las paredes y alinee los bordes.Use abrazaderas de barra para mantener todo en su lugar mientras se cura la soldadura. Alternativamente, se pueden usar libros de texto pesados durante el proceso de curado para asegurarse de que la puerta quede al ras en el exterior de la cámara. Una pieza de policarbonato de una pulgada por 12 pulgadas debe soldarse al panel frontal una pulgada por debajo del abierto.La bisagra se conectará a este espaciador y permitirá que la puerta selle la cámara. Para construir el tubo de entrada, corte dos piezas de tubo de polietileno de media pulgada de 12 pulgadas de largo. También corte un trozo de una pulgada de tubo de polietileno de media pulgada para entregar el alcohol vaporizado o el taladro de aire.Un orificio de cinco 16 pulgadas aproximadamente a una pulgada del extremo de cada una de las piezas de tubería de polietileno de 12 pulgadas. Ensamble el sistema de suministro de aire usando dos enchufes de tres octavos de pulgada y un conector T de tres octavos de pulgada. Asegúrate de que los agujeros que perforaste en el tubo de polietileno estén más alejados del conector en T.Coloque la bisagra del piano en la puerta, asegurándose de que los orificios del fregadero del mostrador estén hacia arriba. Con cuatro tornillos y tuercas de 40 metales, fije la bisagra del piano a la puerta. Use la puerta como guía y marque los agujeros para la bisagra del piano en el espaciador de una pulgada en el panel frontal con tres brocas de 16 pulgadas.Taladre los agujeros del panel frontal para fijar la puerta con cuatro tornillos y tuercas de 40 máquinas. Fije la puerta y la bisagra del piano al panel frontal. Apriételo con una llave inglesa.Ensamble la sujeción. Sujeta de palanca como se muestra. Marque los orificios de la abrazadera de palanca en el panel frontal usando la puerta como guía.Repita esto para dos abrazaderas de palanca a lo largo de la parte superior y una a cada lado de la puerta con tres brocas de 16 pulgadas. Taladre los agujeros para las abrazaderas de palanca. Fije las abrazaderas de palanca con cuatro tornillos y tuercas de 40 máquinas.Con las tuercas en el interior de la cámara, apriételas con una llave para asegurar una cámara hermética. Corte y coloque un sello de goma de tres octavos de pulgada de ancho a lo largo del borde de la puerta. Cuando la puerta está cerrada, la bombilla formará un sello hermético entre la puerta y el panel frontal de la cámara.Marque el centro del panel superior para crear un puerto de entrada para la cámara con una broca de perforación de cinco y ocho pulgadas. Taladre el orificio para el puerto de entrada. Cree un puerto de salida perforando un orificio de media pulgada en la parte inferior central del panel posterior.Inserte un adaptador de pared pasante de tres y ocho pulgadas en el puerto de salida y conéctelo desde el interior de la cámara. En esta etapa, se puede quitar la cubierta protectora. Instale el sistema de suministro de aire a través del orificio en el panel superior desde el exterior.Inserte un codo de tres ocho pulgadas y 90 grados, taladre un orificio de media pulgada en la parte delantera de la puerta. Luego inserte un tabique de sello de media pulgada en el orificio. Esto servirá como un puerto para medir el vapor de etanol.En este punto, el corte y la perforación se completan y las cámaras se pueden limpiar. Ensamble el estante y coloque las dos cámaras y el pub de aire en el estante. Para ayudar a organizar el sistema de flujo de aire, conecte una pieza de policarbonato de desecho a la carcasa inferior y que se pueda usar para ayudar a montar los reguladores de flujo de aire, marque y perfore la sujeción de perforación de tres cuartos de pulgada para los tres reguladores de flujo de aire en la pieza de desecho de policarbonato.Fije los reguladores de flujo de aire al policarbonato con las tuercas provistas. Conecte un adaptador de pared pasante de tres y ocho pulgadas a cada puerto del regulador para la cámara de vapor de etanol. Un regulador de flujo de aire controlará la cantidad de aire que burbujea a través del alcohol líquido y otro controlará la cantidad de aire que se mezcla con el alcohol vaporizado.El último controlará la cantidad de aire para la segunda cámara de solo aire. Ensamble el matraz de alcohol como se muestra. Usando tres tubos de ocho pulgadas.Ensamble el sistema de suministro de aire como se muestra en el diagrama usando conectores T o Y para dividir las líneas. Una sola bomba proporciona suficiente flujo de aire tanto para las cámaras de control de solo aire como para las cámaras de alcohol. Conecte tres tubos de ocho pulgadas a los puertos de salida.Agregue 600 milésimas de pulgada de un etanol de 90 grados al matraz y conéctelo al sistema. Para probar el nivel de vapor de etanol, use una jeringa y una aguja para extraer cinco milésimas de pulgada de aire a través de la septina. Retire la aguja y diluya la muestra de aire de uno a 12 tirando de la jeringa hasta 60 mls.Con el aire ambiental, empuje lentamente el aire a través del alcoholímetro para medir los vapores de etanol. Los niveles de etanol vaporizado deben correlacionarse con los niveles de alcohol en la sangre de los animales para cada sistema individual. Una vez que las cámaras estén ubicadas en la instalación de animales, recuerde expulsar las cámaras directamente al sistema de ventilación de la habitación.Los ratones hembra de dos a tres meses de edad fueron alojados en grupo durante al menos una semana, mientras que los ratones machos de dos a cinco meses fueron alojados individualmente durante dos semanas. Los ratones hembra se emparejaron con machos alojados individualmente durante cinco días para permitir el apareamiento. Después del apareamiento, las hembras fueron retiradas de los machos alojados individualmente en una nueva jaula y colocadas dentro de las cámaras de vapor.Los animales fueron expuestos al etanol durante cuatro horas al día. Durante el ciclo de luz de G 5 a G 20. Las hembras se pesaron periódicamente para controlar el embarazo.Los animales no fueron expuestos el día de su nacimiento para evitar la muerte de las crías. En el primer día postnatal, las crías y las madres volvieron a las cámaras y se expusieron hasta el posparto. Las crías del día 12 se pesaron periódicamente para monitorear el crecimiento.Para iniciar la inhalación de vapor, coloque. Las presas preñadas alojadas individualmente solo en el alcohol y el aire. Las cámaras cierran y sellan las puertas.Agregue el matraz de etanol líquido, conéctelo al sistema y encienda la bomba. Los reguladores de flujo de aire controlan la cantidad de aire que entra en el etanol líquido y la cantidad de aire que se mezcla con el vapor de etanol. La relación de vapor de etanol y aire controla los niveles finales de vapor de etanol en las cámaras.El aire solo controla el flujo de aire y se ajusta al flujo de aire combinado del etanol y el aire. Después de la exposición al vapor de etanol, el alimento se cambia para eliminar la comida que puede haber absorbido etanol vaporizado. Las puertas de las cámaras, tanto en la cámara de alcohol como en la de solo aire, están agrietadas para permitir el intercambio de aire con la habitación.En este video, demostramos cómo ensamblar cámaras de vapor de etanol y describimos un paradigma de inhalación de vapor de alcohol en ratones que expone a los animales durante los tres trimestres humanos equivalentes. El nivel de vapor de alcohol se puede ajustar fácilmente para modelar niveles bajos o altos de alcohol en la sangre. Una de las ventajas de estas cámaras es que son lo suficientemente grandes como para albergar varias jaulas en un momento dado.Esto permite que los animales estén alojados dentro de las cámaras durante toda la exposición. Esto minimiza cualquier estrés causado al animal por la manipulación o el transporte. Además, este paradigma se puede personalizar para cualquier trimestre de interés y/o nivel de exposición durante la construcción.Es fundamental que todos los cortes sean rectos y cuadrados para garantizar una cámara hermética al soldar las piezas de policarbonato. Es importante moverse rápida y eficientemente porque las soldaduras se secan rápidamente. Después de ver este video, deberías poder construir tus propias cámaras de inhalación de vapor.

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