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Inyección Viral Intracerebroventricular de Neonatología del ratón Cerebro de transducción neurona...
Inyección Viral Intracerebroventricular de Neonatología del ratón Cerebro de transducción neurona...
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Neuroscience
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JoVE Journal Neuroscience
Intracerebroventricular Viral Injection of the Neonatal Mouse Brain for Persistent and Widespread Neuronal Transduction

Inyección Viral Intracerebroventricular de Neonatología del ratón Cerebro de transducción neuronal persistente y generalizada

Full Text
64,118 Views
10:15 min
September 15, 2014

DOI: 10.3791/51863-v

Ji-Yoen Kim*1, Stacy D. Grunke*1, Yona Levites2, Todd E. Golde2, Joanna L. Jankowsky1,3

1Department of Neuroscience,Baylor College of Medicine, 2Department of Neuroscience, Center for Translational Research in Neurodegenerative Disease,University of Florida, 3Department of Neurology and Department of Neurosurgery,Baylor College of Medicine

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article demonstrates a technique for widespread neuronal transduction through intraventricular injection of adeno-associated virus into the neonatal mouse brain. This method allows for rapid and easy attainment of lifelong expression of virally-delivered transgenes.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Gene Therapy
  • Neurobiology

Background

  • Viral transduction is a method used to deliver genes into cells.
  • Adeno-associated virus (AAV) is commonly used for gene delivery in neuroscience.
  • Neonatal mice are often used as models for studying brain development.
  • Accurate targeting of brain regions is crucial for effective transduction.

Purpose of Study

  • To develop a reliable method for targeting the lateral ventricles in neonatal mice.
  • To achieve widespread expression of transgenes in the brain.
  • To facilitate future studies on gene function and neural circuitry.

Methods Used

  • Cryo-anesthetization of newborn pups.
  • Identification of the injection site for targeting the lateral ventricles.
  • Insertion of a needle to the correct depth for virus infusion.
  • Infusion of up to two microliters of virus solution into each lateral ventricle.

Main Results

  • Successful transduction of neurons throughout the brain.
  • Demonstration of transgene expression patterns using fluorescent tags.
  • Identification of challenges faced by beginners in targeting the lateral ventricles.
  • Establishment of a protocol for future applications in neuroscience research.

Conclusions

  • The intraventricular injection method is effective for neuronal transduction.
  • This technique can be used to study gene function in the brain.
  • Further refinement of targeting techniques may improve outcomes for researchers.

Frequently Asked Questions

What is the main goal of this procedure?
The main goal is to virally transduce neurons throughout the brain.
What virus is used for transduction?
Adeno-associated virus (AAV) is used for transduction.
How is the injection site identified?
The injection site is located between the Lambda suture and each eye or laterally from the sagittal suture.
What is the volume of virus solution injected?
Up to two microliters of virus solution is infused into each lateral ventricle.
What is used to visualize transgene expression?
A fluorescent tag or immunofluorescence is used to show transgene expression patterns.
What challenges do beginners face with this technique?
Beginners often struggle with accurately targeting the lateral ventricles.

Aquí demostramos una técnica para la transducción neuronal generalizada mediante inyección intraventricular de virus adenoasociados en el cerebro de ratón neonatal. Este método proporciona una manera rápida y fácil de lograr la expresión de por vida de los transgenes administrados viralmente.

El objetivo general de este procedimiento es transducir neuronas viralmente en todo el cerebro. Esto se logra mediante la crioanestesia de las crías recién nacidas, seguida de la transferencia del neonato a la etapa enfriada para la inyección. A continuación, identifique el lugar de inyección para dirigirse a los ventrículos laterales entre la sutura Lambda y cada ojo o lateral de la sutura sagital a medio camino entre Lambda y Bgma.

El paso final es insertar la aguja a la profundidad correcta e infundir lentamente hasta dos microlitros de solución viral en el ventrículo lateral de cada hemisferio. En última instancia, se utiliza una marca fluorescente o inmunofluorescencia para el gen de interés para mostrar el patrón de expresión del transgén resultante de la inyección intraventricular. Por lo general, las personas nuevas en esta técnica tendrán dificultades para apuntar con precisión a los ventrículos laterales.

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Neuroscience Issue 91 AAV virus adeno-asociado transducción viral la transducción neuronal la inyección intraventricular inyección neonatal la transgénesis cerebro etiquetado viral

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