Generación de Enterobacter Sp. YSU auxótrofos Usando transposón mutagénesis

El objetivo general del siguiente experimento es producir TRO de una cepa bacteriana de tipo silvestre que crezca en un medio de sales mínimas suplementado con glucosa. Esto se logra transformando una zona transpo en la cepa huésped de tipo salvaje para obtener una población de bacterias resistentes a la micina de cannabis con transposición aleatoria en los insertos. Los transformantes Next se criban mediante un recubrimiento de réplica, que identifica las TRO que crecen en un medio rico, pero no logran crecer en sales mínimas, medio suplementado con glucosa.

A continuación, genómicamente, el ADN del mutante se digiere, se liga y se transforma en e. coli para obtener un plásmido que contenga el transposón flanqueado en cada extremo por segmentos del gen interrumpido. Se obtienen resultados que muestran la identidad putativa del gen interrumpido basándose en la secuenciación del ADN y el análisis de la herramienta básica de búsqueda de alineamiento local. El transposón utilizado en esta técnica tiene un origen de replicación, un gen resistente a la kanamicina y extremos en mosaico.