El aislamiento y uso de las Secciones de bovino mesentérica arteria y la vena como un bioensayo para la Prueba de Vasoactividad en el intestino delgado

El objetivo general de este procedimiento es aislar secciones transversales de arterias y venas mesentéricas bovinas en un gráfico múltiple para permitir la detección de compuestos experimentales para su actividad vasológica. Esto se logra recolectando primero una muestra de tejido mesentérico del animal. En el segundo paso, se limpia la muestra y se seccionan los recipientes.

A continuación, las secciones se montan y equilibran en el mioinjerto. En el paso final, los vasos aislados se exponen a los compuestos de interés. En última instancia, este bioensayo de arterias y venas se puede utilizar para evaluar la actividad vasológica de los compuestos y los efectos que tienen sobre el flujo sanguíneo dentro de los vasos sanguíneos mesentéricos bovinos.

La principal ventaja de esta técnica en comparación con los métodos existentes, como la medición del flujo sanguíneo in vivo, es que con esta técnica, el tejido de un solo animal puede exponerse a múltiples compuestos simultáneamente. Aunque este método puede proporcionar información sobre síndromes animales muy específicos que pueden causar vasoconstricción como la festuca, la toxicosis o el ergotismo, también se puede aplicar a otros escenarios que pueden ser de interés para los investigadores, como los productos farmacéuticos que se están desarrollando o los productos naturales. Además, también podría aplicarse no solo a la vasculatura del ganado, sino también a la vasculatura de cualquier otra especie de mamífero.

Después de extraer los vasos sanguíneos del tejido mesentérico, use un par de pinzas para colocar la muestra de tejido en una superficie de corte y sumérjala parcialmente en un tampón crebs henzel aite helado. Luego, usando el número cinco de joyería, fórceps y ruido, las tijeras Iris diseccionan cuidadosamente la grasa y los tejidos conectivos que rodean los vasos. Después de separar la arteria y la vena, identifique la abertura del vaso en un extremo de la sección y sujete cuidadosamente la fascia que rodea el vaso con las pinzas.

Luego, deslice la punta de las tijeras por debajo de la fascia elevada para hacer un corte con las tijeras paralelas al recipiente. Después de la incisión inicial, corte cada lado del vaso para separar aún más la grasa y los tejidos conectivos, y para limpiar el vaso. Coloque los vasos sanguíneos limpios en un tubo nuevo de tampón de luz Henzel de Krebs y almacene el tubo a cuatro grados centígrados durante un máximo de 24 horas.

Cuando esté listo, utilice un cortador de pañuelos para obtener secciones transversales consistentes del recipiente de interés en el número deseado de secciones de dos milímetros, y luego examine cada sección con un aumento de 12,5 x para asegurarse de que cada muestra no tenga anomalías, ramas, válvulas o daños superficiales adquiridos durante el proceso de disección y limpieza. Almacene las secciones aceptables del recipiente en rodajas sumergidas en el tampón ligero Henzel de Krebs a cuatro grados centígrados durante un máximo de 30 minutos. A continuación, inserte suavemente los soportes a través del lumen de cada muestra y utilice el microposicionador del injerto myo para aumentar gradualmente la tensión y montar el vaso en el mioinjerto.

Tenga cuidado de no estirar los vasos por encima de una lectura de dos a tres gramos. Una vez que todas las cámaras estén cubiertas, aspire el tampón de cada cámara y vuelva a llenarlas con cinco mililitros de tampón fresco. Después de que todas las secciones del recipiente se hayan equilibrado durante 1,5 horas para lograr una tensión de reposo estable de un gramo a 500 microlitros de cloruro de potasio 1,32 molar a una concentración final de 0,12 molar a la solución de 5,5 mililitros, bañando el recipiente.

No ajuste la tensión manualmente, ya que la respuesta máxima al cloruro de potasio se utilizará para normalizar los datos del tratamiento, reemplace la solución con tampón ligero Krebs Henzel fresco en intervalos de 15 minutos hasta que la tensión haya vuelto al valor base de un gramo. Una vez que la tensión haya regresado a la línea de base, agregue los patrones en alícuotas de 25 microlitros a cada cámara de acuerdo con el protocolo experimental. Cuando se haya agregado el último estándar, inicie un temporizador de nueve minutos.

Al final de la incubación, retire el tampón que contiene tratamiento de las cámaras y agregue cinco mililitros de tampón fresco a cada cámara. Luego inicie un temporizador de 2.5 minutos después de la finalización, repita este enjuague de 2.5 minutos. Una segunda vez al final del segundo enjuague, aspire las cámaras.

Luego, después de agregar un búfer nuevo una vez más, inicie un temporizador de un minuto para realizar la cuenta regresiva hasta el comienzo de la segunda edición estándar. Como se observa en los períodos de incubación de nueve minutos ilustrados aquí, hay aumentos incrementales en la respuesta a los estándares de que con las concentraciones crecientes del tratamiento, la adición de cloruro de potasio al final del experimento es esencial, ya que confirma la viabilidad del tejido. Este bioensayo se puede utilizar para evaluar la actividad vaso de los compuestos experimentales en los vasos sanguíneos que suministran nutrientes al intestino delgado, así como en los vasos sanguíneos que transportan los nutrientes absorbidos.

Por ejemplo, en este experimento, no se observaron diferencias en las respuestas contráctiles arteriales o venosas después del tratamiento con cinco hidroxitriptaminas. Por el contrario, la respuesta contráctil de la vena mesentérica al aumento de las concentraciones de norepinefrina fue mayor que la de la arteria mesentérica. Siguiendo este procedimiento, el método podría modificarse aún más para incluir agonistas o antagonistas en el tampón que fueran de interés específico para el investigador.

Esto permitiría al investigador comprender mejor la implicación de receptores muy específicos y los mecanismos que subyacen a las respuestas vasculares observadas durante el experimento mio. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo recolectar, procesar y aislar vasos sanguíneos. Para un mi experimento.