Name: Muestreo de suelos y aislamiento de nematodos entomopatógenos (Steinernematidae, Heterorhabditidae) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Aprenda métodos de muestreo de suelos y aislamiento de nematodos entomopatógenos usando cebo con insectos y la trampa White modificada. Estas técnicas permiten establecer cultivos de Steinernematidae y Heterorhabditidae para bioensayos.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Los autores desean agradecer a los miembros anteriores de la Bolsa de laboratorio: Sam-Kyu Kim, Kathryn Plichta y Victoria Miranda-Thompson por su contribución a la mejora de muchos de estos protocolos. Queremos agradecer el apoyo de la Fundación Nacional para la Ciencia (subvenciones IOS-0.840.932 e iOS-0724978) a SP Stock.

1. Toma de Muestras de Suelos <ol><li> Considere cubrir una superficie mínima de 2 a 4 m 2 por cada sitio de muestreo. </li><li> Recoger muestras de suelo a una profundidad de al menos 15 cm (Figura 4). </li><li> Tomar por lo menos 5 muestras aleatorias dentro de esta área. </li><li> Tomar 3 submuestras por muestra. Dependiendo del objetivo del estudio, ya sea combinan las submuestras o mantenerlas separadas. </li><li> Colocar cada muestra en una bolsa de plástico. Considere la posibilidad de doble embolsado para evitar fugas de las muestras (Figura 4). </li><li> Muestras de la etiqueta con un marcador indeleble. Incluya la siguiente información de cada sitio de muestreo: Información del sitio (incluyendo localidad / área / nombre del sitio y el GPS las coordenadas información), la fecha, el hábitat, la vegetación asociada, temperatura, altitud, etc NOTA: Si es aplicable, obtener y / o registrar la presencia de insectos u otros invertebrados recolectados con la muestra para su posterior identificación. Pueden representar potencial naturhosts al EPN. </li><li> Herramientas de recogida Limpiar a fondo entre las muestras de lavado con agua y / o desinfección de ellos con etanol al 70% o una solución de cloro al 0,5%. </li><li> Mantener las muestras en un refrigerador (8-15 ° C) durante el transporte al laboratorio. </li><li> Tome una porción de la muestra de suelo para el análisis para obtener información sobre la composición del suelo, la textura, la humedad, conductividad eléctrica o de otros parámetros del suelo deseadas. </li></ol> . 2 Aislamiento de nematodos de muestras de suelo: Insect-cebo Técnica <ol><li> Elimine todos los residuos (es decir., Rocas, trozos de madera o la corteza, las hojas, etc.) Recogidos con sus muestras para evitar la contaminación con microorganismos saprobic. </li><li> Añadir agua para humedecer el suelo y facilitar la circulación de los nematodos. NOTA: Utilice una botella de spray para aumentar poco a poco el nivel de humedad del suelo. </li><li> Coloque aproximadamente 200 a 250 ml de suelo húmedo en un recipiente de plástico limpio con tapa. </li><li> Añadir cebos de insectos. Considere la posibilidad de 5 a 10 insectos a la superficie del suelo de cada muestra (Figura 5). </li><li> Cubra el recipiente con una tapa y voltee los contenedores que al revés. </li><li> Mantener los contenedores en la oscuridad y a temperatura ambiente (generalmente 22-25 ° C). </li><li> Compruebe contenedores cada 2 - 3 días y quitar los insectos muertos. NOTA: agregar insectos sanos adicionales para cada recipiente para su posterior cebo de la muestra de suelo. </li><li> Quite los insectos muertos de los contenedores. NOTA: Los cadáveres con un marrón o coloración ocre son generalmente parasitados por steinernematids, mientras que los de ladrillo rojo a púrpura oscuro cadáveres son parasitados por heterorhabditids. </li><li> Enjuague cadáveres en agua estéril. </li><li> Coloque cadáveres en una trampa Blanco modificada para la recuperación de la progenie nematodo (consulte el siguiente procedimiento). </li></ol> . 3 Nematodo La recuperación de cadáveres infectados: Modificado Trampa Blanco <ol><li> Coloque la parte superior de un diámetro de 50 (o 60) mm. Placa de Petri dentro de un plato más grande (100 mm). </li><li> Establecer un pecadopapel de filtro circular gle (Whatman # 1) en el interior del plato más pequeño. </li><li> Coloque los cadáveres sobre el papel de filtro del plato más pequeño asegurarse de que los cadáveres no se toquen entre sí para evitar cualquier contaminación. </li><li> Llene el exterior (grande) caja de Petri con ca. 20 ml de agua destilada estéril. No agregue agua en el plato que contiene los cadáveres. </li><li> Cubrir la placa de Petri grande y su contenido con la tapa (Figura 6). </li><li> Etiqueta de platos en consecuencia. Agregue la siguiente información: nombre del nematodo (especie / cepa), la fecha de la infección (infección se estableció la fecha) y la fecha de la trampa (esta es la fecha en que la trampa está configurado). </li><li> Mantenga trampa a TA hasta que se produce la emergencia de estados juveniles infectivos (IJs). Este proceso puede tardar entre 10 - 25 días, dependiendo de la especie y / o cepa considerada nematodos. </li><li> Cosecha de agua con JIs mediante la eliminación de la plato más grande de la trampa y vertido de agua con los nematodos en un vaso de precipitados. </li><li> Permitir nematodos decantar a la parte inferior de la bEAKER. Este proceso puede tardar unos minutos. </li><li> Verter el agua cuidadosamente, asegurándose de que los nematodos se mantienen en la parte inferior del vaso de precipitados. </li><li> Enjuague nematodos añadiendo más agua y permitiendo que los nematodos decantar. Este paso se puede repetir 2 - 3 veces hasta que el agua esté limpia. </li><li> Coloque suspensión de nematodos en un matraz de cultivo de tejidos (250 ml). Mantener la concentración de la suspensión a 1.000 - 3.000 nemátodos / ml. </li><li> Frasco tienda con suspensión de nematodos en una habitación fría o en incubadora entre 10 a 20 ° C. NOTA: compruebe frascos almacenados periódicamente a medida que la vida útil de EPN es variable. Por lo general steinernematids se pueden almacenar durante 6 - 12 meses, sin la necesidad de subcultivos, mientras que heterorhabditids pueden requerir más revisiones periódicas. </li></ol>

<ol><li>Bedding, R. A., Akhurst, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+technique+for+the+detection+of+insect+parasitic+rhabditid+nematodes+in+soil%5BTitle%5D)+AND+%22Nematologica%22%5BJournal%5D)">A simple technique for the detection of insect parasitic rhabditid nematodes in soil.</a> Nematologica. 21, 109-110 (1975).</li>
<li>Boemare, N. E., Akhurst, R. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBoemare%2C+NE+%22The+Genera+Photorhabdus+and+Xenorhabdus.+In+The+Prokaryotes%22">The Genera Photorhabdus and Xenorhabdus. In The Prokaryotes</a>. Dworkin, M., Falkow, S., Rosenberg, E., Schleifer, K. -H., Stackebrandt, E. , Springer. New York, N.Y. 473-488 (2007).</li>
<li>Gaugler, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGaugler%2C+R+%22Entomopathogenic+Nematology%22">Entomopathogenic Nematology</a>. , CABI Publishing. Wallingford, UK. (2002).</li>
<li>Gaugler, R., Kaya, H. K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGaugler%2C+R+%22Entomopathogenic+Nematode+s+in+Biological+Control%22">Entomopathogenic Nematode s in Biological Control</a>. , CRC Press, Inc. Boca Raton, Florida. (1990).</li>
<li>Hazir, S., Keskin, N., Stock, S. P., Kaya, H. K., Özcan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diversity+and+distribution+of+entomopathogenic+nematodes+%28Rhabditida%3A+Steinernematidae+and+Heterorhabditidae%29+in+Turkey%5BTitle%5D)+AND+%22Biodiversit.%2C+%26+Conservation%22%5BJournal%5D)">Diversity and distribution of entomopathogenic nematodes (Rhabditida: Steinernematidae and Heterorhabditidae) in Turkey.</a> Biodiversit., & Conservation. 12, 375-386 (2003).</li>
<li>Kaya, H. K., Gaugler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entomopathogenic+nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Entomology%22%5BJournal%5D)">Entomopathogenic nematodes.</a> Annual Review of Entomology. 38, 181-206 (1993).</li>
<li>Kaya, H. K., Stock, S. P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKaya%2C+HK+%22Techniques+in+insect+nematology.+In+Manual+of+techniques+in+insect+pathology%22">Techniques in insect nematology. In Manual of techniques in insect pathology</a>. , Academic Press. London. 281-324 (1997).</li>
<li>Lacey, L. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLacey%2C+LA+%22Manual+of+techniques+in+invertebrate+pathology%22">Manual of techniques in invertebrate pathology</a>. , Academic Press. London. (2012).</li>
<li>McCoy, C. W., Shapiro-Ilan, D., Duncan, L., Nguyen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entomopathogenic+nematodes+and+other+natural+enemies+as+mortality+factors+for+larvae+of+Diaprepes+abbreviatus+%28Coleoptera%3A+Curculionidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Control%22%5BJournal%5D)">Entomopathogenic nematodes and other natural enemies as mortality factors for larvae of Diaprepes abbreviatus (Coleoptera: Curculionidae).</a> Biological Control. 19, 182-190 (2000).</li>
<li>Meyling, N. V., Eilenberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Occurrence+and+distribution+of+soil+borne+entomopathogenic+fungi+within+a+single+organic+agroecosystem%5BTitle%5D)+AND+%22Agriculture%2C+ecosystem.%2C+%26+environment%22%5BJournal%5D)">Occurrence and distribution of soil borne entomopathogenic fungi within a single organic agroecosystem.</a> Agriculture, ecosystem., & environment. 113, 336-341 (2006).</li>
<li>Poinar, G. O. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPoinar%2C+GO+%22Taxonomy+and+biology+of+Steinernematidae+and+Heterorhabditidae.+In%3A+Entomopathogenic+Nemtaodes+in+Biological%22">Taxonomy and biology of Steinernematidae and Heterorhabditidae. In: Entomopathogenic Nemtaodes in Biological</a>. , CRC Press. Boca Raton. 23-61 (1990).</li>
<li>Stock, S. P., Gress, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diversity+and+phylogenetic+relationships+of+entomopathogenic+nematodes+%28Steinernematidae+and+Heterorhabditidae%29+from+the+Sky+Islands+of+southern+Arizona%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+invertebrate+pathology%22%5BJournal%5D)">Diversity and phylogenetic relationships of entomopathogenic nematodes (Steinernematidae and Heterorhabditidae) from the Sky Islands of southern Arizona.</a> Journal of invertebrate pathology. 92, 66-72 (2006).</li>
<li>Stock, S. P., Hunt, D. J. Nematode morphology and systematics. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStock%2C+SP+%22Nematodes+as+biological+control+agents.+CAB+International+Publishing%22">Nematodes as biological control agents. CAB International Publishing</a>. Grewal, P. S., Ehlers, R. U., Shapiro-Ilan, D. I. , CAB International Publishing. Wallingford, UK. 3-43 (2005).</li>
<li>Stock, S. P., Goodrich–Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entomopathogenic+nematodes+and+their+bacterial+symbionts%3A+The+inside+out+of+a+mutualistic+association%5BTitle%5D)+AND+%22Symbiosis%22%5BJournal%5D)">Entomopathogenic nematodes and their bacterial symbionts: The inside out of a mutualistic association.</a> Symbiosis. 46, 65-75 (2008).</li>
<li>Stuart, R. J., Gaugler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patchiness+in+populations+of+entomopathogenic+nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Invertebrate+Pathology%22%5BJournal%5D)">Patchiness in populations of entomopathogenic nematodes.</a> Journal of Invertebrate Pathology. 64, 39-45 (1994).</li>
<li>White, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+obtaining+infective+nematode+larvae+from+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A method for obtaining infective nematode larvae from cultures.</a> Science. 66, 302-303 (1927).</li>
</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

Esta demostración es la primera de dos presentaciones que describen una serie de técnicas que se utilizan comúnmente para el estudio de la EPN y sus bacterias simbióticas. Estas técnicas representan pasos fundamentales para el establecimiento exitoso de las culturas EPN en el laboratorio y también constituyen la base para otros bioensayos que emplean EPN como organismos modelo para la investigación. Varios estudios de suelos de EPN han demostrado que su abundancia y distribución pueden varia...

Muchos nematodos están asociadas con los insectos, y sus interacciones huésped ser beneficiosos o perjudiciales. Aquí, nos centramos en un grupo de nematodos que son patógenos de insectos, también conocido como nematodos entomopatógenos (o EPN). Dos familias de nematodos pertenecen a este grupo de nematodos: Steinernematidae y Heterorhabditidae 11,13. Su efecto patógeno es, de hecho, conferida por su interacción con las bacterias entéricas bacterias anaerobias facultativas (Xenorhabdus se asocian con steinernematids y bacterias Photorhabdus asociar con heterorhabditids) 2. Las bacterias se vectored de un insecto huésped a otro por la única etapa de nematodos de vida libre, la infectivo juvenil de tercera etapa (también conocida como juvenil dauer, infectivo juvenil o IJ), que vive en el suelo. Una vez dentro del insecto, los nemátodos liberan las bacterias en la hemolinfa del insecto, que matan el insecto huésped por septicemia masiva. Las bacterias tambiéndegradar los tejidos del insecto y se convierten en fuente de alimento de los nematodos &#39;, lo que les permite madurar y se multiplican. Por lo general, una o dos generaciones de nematodos adultos se producen dentro del cadáver del insecto. La progenie de los últimos reasocia generación adulto con unas pocas células bacterianas en un más especializarse de manera que su relación nutricional anterior, y cultivar estas células en sus intestinos a medida que se mueven hacia fuera de la carcasa de insectos en el suelo donde esperarán otro insecto para parasitar 6,11,14 (Figura 1). Desde su descubrimiento en 1927, EPN se han considerado alternativas valiosas a los plaguicidas químicos, ya que pueden parasitar una amplia gama de insectos que son plagas agrícolas 3,4,5. Sin embargo, en las últimas dos décadas, estos nematodos y sus bacterias simbióticas se han reconocido como un sistema modelo para el estudio maleable aspectos biológicos, ecológicos y evolutivos de INTERACCIÓ host-microbions 14. El objetivo de esta presentación es mostrar los métodos y técnicas más comúnmente utilizadas para el muestreo de suelos y el aislamiento de EPN. Una variedad de herramientas está disponible y se puede utilizar para la recogida de muestras de suelo, incluyendo: corers suelo, paletas, excavadoras post-hole, sinfines, tubos de muestreo, palas de mano, entre otros (Figura 2). Dependiendo del propósito del estudio, dos estrategias de muestreo pueden ser considerados: a) estratificado, b) el muestreo aleatorio (Figura 3). El muestreo estratificado se utiliza por lo general como parte de un estudio intensivo en un área específica o demarcada durante un período determinado de tiempo. En general, un transecto está demarcada y muestras de suelo se toman a intervalos estipulados en el transecto en un período de tiempo (Figura 3) 15. El muestreo aleatorio se emplea generalmente cuando se centra en un área extensa. Esta estrategia de muestreo ha sido utilizado para el estudio de la diversidad de EPN fesde una gran área geográfica o región (Figura 3 B) 12. Una serie de factores se puede considerar en función del objetivo del estudio que incluye una amplia gama de elevaciones, texturas de suelo y los hábitats (por ejemplo., Campos de cultivo, bosques, pastizales, parques, playas, áreas ribereñas, etc.) Se demuestra la técnica de los insectos-cebo, que fue descrito originalmente por ropa de cama y Akhurst 1 y representa una alternativa sencilla y selectiva para la recuperación de la EPN de muestras de suelo. Este es un procedimiento selectivo que se basa en la premisa de que los nematodos (estadio IJ) se sentirán atraídos por un huésped de insectos y parásitos de ella. Esta técnica también se puede considerar para el aislamiento de otros patógenos de insecto tales como hongos, bacterias y 8,10. También demuestran la técnica de trampa Blanco modificada que se utiliza para la recuperación de la progenie de nematodos a partir de huéspedes de insecto infectadas 7,14. Este es un esfuerzo conocidohod que ofrece la ventaja de la recuperación de una &quot;limpia&quot; progenie de nematodos libres de residuos de los cadáveres de insectos degradantes. Por último, las técnicas descritas y mostradas en este artículo corresponden a los concebidos y / o realizado en nuestro laboratorio, así como los descritos por diversos colegas y colaboradores.

<table><tbody><tr><td>Galleria mellonella</td><td>Timberline</td><td>http://www.timberlinefisheries.com/ProductDetails.asp?ProductCode=WAXLG</td><td>Para la técnica de cebo de insectos</td></tr><tr><td>Papel de filtro, 55 mm Celulosa de grado 1</td><td>Whatman/VWR</td><td>28450-048 Cámara de</td><td>infección y conjunto de trampa blanca</td></tr><tr><td>60 x 15 mm Placas de Petri</td><td>VWR</td><td>25384-092 Cámara de</td><td>infección y conjunto de trampa blanca</td></tr><tr><td>Placas de Petri de 100 x 15 mm</td><td>VWR</td><td>25384-088</td><td>Cámara de infección y montaje de trampa blanca</td></tr><tr><td>Bolsas de plástico ZIPloc</td><td>Ace Hardware o ferretería</td><td></td> local <td>Muestreo de suelos</td></tr><tr><td>Pipeta mecánica P1000, P200 ml</td><td>VWR</td><td>89130-562; 89130-566&nbsp;</td><td>Conjunto de cámara de infección y trampa blanca</td></tr><tr><td>Puntas de pippetor 1000 ml, 200 ml</td><td>VWR</td><td>16466-004 ; 53510 Cámara de</td><td>infección y conjunto de trampa blanca</td></tr><tr><td>Bleach</td><td>Ace Hardware o ferretería</td><td></td> local <td>Muestreo de suelos, desinfectante</td></tr><tr><td>Hipoclorito de sodio</td><td>Ace Hardware o ferretería</td><td></td> local <td>Muestreo de suelos, desinfección</td></tr><tr><td>70% Alochol etílico</td><td>AAPER</td><td>17212945</td><td>Muestreo de suelos, desinfección</td></tr><tr><td>Palas</td><td>Ace Ferretería o ferretería local</td><td>N/A</td><td>Muestreo</td></tr> de <tr><td>suelo Muestreador de suelo tubular</td><td>Accuproducts</td><td></td><td>Muestreo de suelo Sonda</td></tr> de <tr><td>suelo, mango largo</td><td>Nupla&nbsp;</td><td>PRB4T 69401 Classic</td><td>Toma de muestras de suelo</td></tr><tr><td>Cinta métrica</td><td>Ace Hardware o ferretería</td><td></td> local <td>Toma de muestras de suelo</td></tr><tr><td>Cinta de señalización</td> de varios colores <td>Ace Hardware o ferretería</td><td></td> local <td>Toma de muestras de suelo</td></tr><tr><td>Matraces de cultivo de tejidos</td><td>VWR</td><td>Falcon, 29185-304&nbsp;</td><td>Trampa blanca, colección de EPN</td></tr><tr><td>Botellas de lavado, polietileno, boca ancha</td><td>VWR</td><td>16650-107</td><td>Trampa blanca, colección de EPN</td></tr></tbody></table>

muestreo de suelos y aislamiento de nematodos entomopatógenos (steinernematidae, heterorhabditidae)

Soil Sampling and Isolation of Entomopathogenic Nematodes (Steinernematidae, Heterorhabditidae)

Nematodos entomopatógenos (también conocido como EPN) representan un grupo de nematodos que habitan el suelo que parasitan una amplia gama de insectos. Estos nematodos pertenecen a dos familias: Steinernematidae y Heterorhabditidae. Hasta ahora, más de 70 especies han sido descritas en la Steinernematidae y hay cerca de 20 especies en el Heterorhabditidae. Los nematodos tienen una asociación mutualista con bacterias Enterobacteriaceae y juntos actúan como un complejo insecticida que mata a una amplia gama de especies de insectos. Aquí, nos centramos en las técnicas más comunes que se consideran para la recogida de EPN del suelo. La segunda parte de esta presentación se centra en la técnica de los insectos-cebo, un enfoque ampliamente utilizado para el aislamiento de EPN a partir de muestras de suelo, y la técnica de trampa Blanco modificada que se utiliza para la recuperación de estos nematodos de los insectos infectados. Estos métodos y técnicas son pasos clave para el éxito del establecimiento de EPN cultodas en el laboratorio y también forman la base para otros bioensayos que consideran estos nematodos como organismos modelo para la investigación en otras disciplinas biológicas. Las técnicas mostradas en esta presentación corresponden a las realizadas y / o diseñado por los miembros de SP Stock de laboratorio, así como los descritos por diversos autores.

Recogida de muestras de suelo Tercera etapa juveniles infectivos de EPN son los únicos estadios de vida libre en el ciclo de vida de estos nematodos 'que se encuentran en el suelo (Figura 1). Por lo tanto, la recolección de muestras de suelo es un método muy eficiente para recuperarse de estos nematodos. Figura 4 muestra un perfil de suelo que indica la profundidad a la que se deben tomar las muestras. Preservar la humedad de una muestra es un factor clave p...

Nematodos entomopatógenos son gusanos redondos habitan en el suelo que parasitan una amplia gama de insectos. Demostramos métodos de muestreo utilizados para el aislamiento de estos nematodos del suelo mediante dos técnicas: la de cebado de insectos y la trampa de Blanco modificada, para la recuperación de nematodos de muestras de suelo y cadáveres de insecto infectadas, respectivamente.

Muestreo de suelos y aislamiento de nematodos entomopatógenos (Steinernematidae, Heterorhabditidae)

Entomopathogenic nematodes (a.k.a. EPN) represent a group of soil-inhabiting nematodes that parasitize a wide range of insects. These nematodes belong to ...

El objetivo de este procedimiento es demostrar los métodos y técnicas comúnmente utilizados para el muestreo de suelos y el aislamiento de nematodos enteropatógenos. Esto se logra recolectando primero muestras de suelo mediante un enfoque de transecto o, como se ha demostrado, un enfoque de muestreo aleatorio. A continuación, las muestras de suelo se mezclan con insectos para recuperar selectivamente nematodos enteropatógenos.El paso final es recolectar los nematodos de los insectos infectados utilizando una trampa blanca modificada. En última instancia, estas técnicas representan pasos clave para el establecimiento exitoso de cultivos de nematodos enteropatógenos en el laboratorio y forman la base para los bioensayos posteriores. La ventaja de la técnica de muestreo de suelo es que podemos ir al campo y recolectar estados maduros de nematodos patógenos.En lugar de tomar muestras de insectos infectados con estos nematodos, que rara vez se encuentran. La estrategia de muestreo aleatorio que empleamos se usa comúnmente para evaluar la diversidad de nematodos patógenos de una gran región geográfica o área. Esta técnica fue descrita por primera vez por las apuestas en Accur en 1975.Es

soil-sampling-isolation-entomopathogenic-nematodes-steinernematidae

Research

Investigación

JoVE Journal

Environment

Entorno

El objetivo de esta presentación es demostrar en vivo y en técnicas in vitro para la crianza de los nematodos entomopatógenos. Métodos in vivo consideran la crianza de estos nematodos con un insecto huésped, mientras que los métodos in vitro utilizan rich media agar.

In vivo e in vitro Crianza de nematodos entomopatógenos (Steinernematidae y Heterorhabditidae)

Aquí presentamos un protocolo basado en el sistema de cebo del gusano de la harina (Tenebrio molitor) que se utilizó para aislar y seleccionar hongos entomopatógenos (EPF) a partir de muestras de suelo. Se utiliza una fórmula efectiva de número de conidios (ECN) para seleccionar EPF altamente tolerante al estrés en función de las características fisiológicas para el control microbiano de plagas en el campo.

Aislamiento y selección de hongos entomopatógenos a partir de muestras de suelo y evaluación de la virulencia fúngica contra plagas de insectos

Este protocolo describe un método para extraer eficientemente nematodos vivos de sustratos naturales en el campo.

Aislamiento rápido de nematodos silvestres por Baermann Funnel

Las colonias de hongos entomopatógenos se aíslan de muestras de suelo tropical utilizando cebo Tenebrio , cebo Galleria , así como medio artificial selectivo, es decir, agar de dextrosa de papa enriquecido con extracto de levadura suplementado con cloranfenicol, tiabendazol y cicloheximida (medio CTC).

Comparación de métodos para aislar hongos entomopatógenos de muestras de suelo

Este protocolo se puede utilizar para realizar estudios ecológicos a gran escala de los nematodos Caenorhabditis . La principal ventaja de este método es la organización y el análisis eficientes de los datos ecológicos y moleculares asociados con los nematodos recogidos de la naturaleza.

Un enfoque altamente escalable para realizar estudios ecológicos de los nematodos de Caenorhabditis Selfing

Los nematodos entomopatógenos viven en simbiosis con las bacterias y juntos infectan con éxito a los insectos al socavar su sistema inmunológico innato. Para promover la investigación sobre la base genética de la infección por nematodos, se describen métodos para mantener y manipular genéticamente los nematodos entomopatógenos.

Cultivo y manipulación genética de nematodos entomopatógenos

Caenorhabditis elegans es una de las principales especies modelo en biología, sin embargo, casi todas las investigaciones se realizan en ausencia de sus microbios naturalmente asociados. Los métodos descritos aquí ayudarán a mejorar nuestra comprensión de la diversidad de microbios asociados como base para futuras investigaciones funcionales de C. elegans.

Aislamiento y caracterización de la microbiota natural del nematodo modelo Caenorhabditis elegans

Presentamos dos métodos para que los agricultores propaguen en masa nematodos entomopatógenos como bioinsecticidas. El primer método utiliza gel de poliacrilamida como sustrato de cultivo del nematodo, mientras que el segundo emplea algodón recubierto de polímero como sustrato de cultivo. Ambos métodos dependen de la propagación in vivo de nematodos dentro de cadáveres de insectos.

Propagación in vivo basada en cultivadores de nematodos entomopatógenos

Este método se explica cómo construir y operar un 13 C continua y 15 N isótopo cámara de etiquetado para el uniforme o el etiquetado de tejidos vegetales diferencial. Se discuten los resultados representativos de metabólicas y etiquetado estructural de gerardii Andropogon.

Diseño y aplicación de un continuo<sup&gt; 13</sup&gt; C y<sup&gt; 15</sup&gt; N Cámara Etiquetado de Uniforme o Diferencial, metabólico y estructural, Planta de isótopos de etiquetado

Lysimetry campo y toma de muestras de agua intersticial permiten a los investigadores evaluar el destino de los productos químicos aplicados a los suelos y la vegetación establecida. El objetivo de este protocolo es demostrar cómo instalar la instrumentación necesaria y tomar muestras para el análisis químico durante lysimetry campo integrado y experimentos de muestreo intersticiales.

Lysimetry Integrado de campo y toma de muestras de agua intersticial para la Evaluación de la Movilidad de Química en Suelos y Vegetación Establecido

Aprenda métodos de muestreo de suelos y aislamiento de nematodos entomopatógenos usando cebo con insectos y la trampa White modificada. Estas técnicas permiten establecer cultivos de Steinernematidae y Heterorhabditidae para bioensayos.

Muestreo de suelos y aislamiento de nematodos entomopatógenos (Steinernematidae, Heterorhabditidae)

Explorar más videos