Aislamiento y Escisión de murino Aorta; Una técnica versátil en el Estudio de la Enfermedad Cardiovascular

El objetivo general de este procedimiento es esterilizar, aislar y extirpar la aorta murina. Esto se logra exponiendo primero la cavidad torácica y abdominal. El segundo paso es perfundir con solución salina fría y estéril.

A continuación, se extirpan los órganos de las cavidades torácica y abdominal, dejando el corazón unido a la aorta. El paso final es extirpar el tejido adiposo perivascular y el tejido de advenimiento de la aorta. En última instancia, se utiliza un microscopio de disección para verificar que se extirpa todo el tejido circundante, y la aorta se puede utilizar para una variedad de análisis experimentales.

Por lo tanto, esta técnica es útil para responder preguntas clave en el campo de la investigación cardiovascular, como el desarrollo de aneurismas y la formación de placas ateroscleróticas. Y así se pueden observar los cambios en la biología molecular, como la expresión de genes y proteínas. Después de sacrificar al ratón, verifique el estado de eutanasia con un pellizco en el dedo del pie.

A continuación, esterilice la piel humedeciendo el pelaje abdominal con etanol al 70%. A continuación, asegure el ratón en la tabla quirúrgica en posición supina con los apéndices extendidos. Comience la cirugía usando fórceps para localizar y aislar la piel abdominal justo por debajo de la apófisis xifoides.

A continuación, levanta la piel y recórtala con unas tijeras. Esto debe exponer la porción superior del peritoneo y la cavidad torácica inferior. Luego, con pinzas y tijeras, levante la apófisis xifoides y haga incisiones laterales justo inferiores a ella a lo largo de los márgenes subcostales.

Para diseccionar la cavidad torácica, ingrese a través del diafragma, teniendo cuidado de no dañar el corazón o cualquier vaso principal en el proceso. Ahora se extienden cranealmente las incisiones laterales a lo largo de los márgenes subcostales. Por lo tanto, retire la porción anterior de la caja torácica.

Es posible que se requiera una disección roma para extraer el corazón de la pared torácica anterior para completar estas incisiones. Ahora, con una gasa, limpie la cavidad torácica del exceso de líquidos para facilitar el acceso a los órganos. A continuación, retire los pulmones con pinzas y tijeras lóbulo por lóbulo.

El corazón y la aorta deben estar completamente expuestos y de fácil acceso para recolectar sangre a través de una punción cardíaca. Haga esto ahora antes de proceder con la perfusión para perfundir el corazón, llene una jeringa de 10 cc con 10 mililitros de hielo estéril frío un XPBS. A continuación, coloque una aguja de calibre 25.

Inserte con cuidado la aguja en el ventrículo izquierdo. A continuación, haga una incisión en la aurícula derecha para que no se acumule una presión excesiva en el sistema circulatorio en el siguiente paso. Ahora, durante los próximos dos o tres minutos, expulse lentamente el PBS de la jeringa hacia el corazón.

Durante la eyección del PBS, use una gasa estéril para absorber el líquido que saldrá de la aurícula en la incisión. Cuando el PERFUSE eight haya sido expulsado, absorba cualquier líquido restante con una gasa que oscurezca una visión limpia de la cavidad torácica. Para exponer el contenido gastrointestinal, corte codosamente a través de la pared abdominal, extendiendo la incisión hasta el área suprapúbica.

Una vez allí, corte bilateralmente hacia las extremidades inferiores para hacer un colgajo de piel, que se puede sujetar con alfileres o extirpar. Al seguir adelante, se extirpan varios órganos, los lóbulos del hígado, el páncreas, el bazo, los intestinos y la parte inferior del esófago. Esto abre la vista a la aorta.

Tenga mucho cuidado al diseccionar la región de Perren, ya que hay ramas superficiales desde la aorta hasta las arterias renales en esta región. Realice esta disección con precisión y cuidado, ya que las bacterias del tracto gastrointestinal pueden contaminar los otros tejidos, enjuague el área despejada con un XPBS y absorba el exceso de solución con gasa, la aorta debe ser de fácil acceso. Entonces, con tijeras y fórceps, separe la aorta de la columna vertebral.

Una disección roma es apropiada y se recomienda encarecidamente el uso de un microscopio de disección. La aorta se puede extirpar, comenzando por la aorta. Lo que importa es un proceso ordenado de limpieza y separación de los tejidos.

Al diseccionar el tejido adiposo perivascular, retírelo con unas microtijeras finas para evitar daños en la pared aórtica. Esto minimiza la posibilidad de contaminación por fibroblastos al cultivar células de músculo liso aórtico. Es muy importante la extirpación cuidadosa del tejido perivascular, adiposo y adventicia.

Cualquier tejido sobrante podría causar contaminación en el cultivo celular, pero también sesgar sus ensayos moleculares. Con este procedimiento, una aorta intacta que se origina en el corazón desciende a las cavidades torácica y abdominal. Con las arterias renales aún unidas, se pueden obtener imágenes de la aorta in situ para cuantificar los cambios morfométricos, que son diagnósticos en el estudio de los aneurismas de aorta abdominal.

Posteriormente, la aorta se puede extirpar, fijar y teñir para observar los cambios histológicos, como con la tinción de hemat, toin y eoína, o con la tinción de ver Hoff Van Geen para observar las bandas de elastina y así ver la integridad estructural de la aorta. Las células aórticas también se pueden utilizar para el aislamiento celular primario y para estudios in vitro como estudios de viabilidad y localización de proteínas. Después del procedimiento, puede utilizar otras técnicas, como el aislamiento de proteínas y ARN, para observar la expresión de proteínas, la actividad enzimática y la expresión génica.