Name: Localización, identificación y Escisión de depósitos adiposos murino (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Aprende a localizar e identificar depósitos adiposos en ratones adultos con mínima disección y contaminación. Este protocolo permite análisis histológicos, de expresión proteica y estudios in vitro del tejido adiposo.

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Los autores no tienen agradecimientos.

NOTA: Todos los animales procedimientos fueron realizados con la aprobación del Comité de Cuidado y Uso de Animales Institucional (IACUC) de la Universidad de Cincinnati y de acuerdo con la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio de los Institutos Nacionales de Salud (NIH Publication No . 85-23, revisado 1996). 1. La eutanasia y esterilizar el ratón <ol><li> Coloca el ratón en un dropbox que contiene una dosis supratheraputic de isoflurano y permitir a inhalar a efecto. Una vez que el ratón es sacrificado, retirar de la caja. </li><li> Cervical dislocar como un segundo medio de la eutanasia. </li><li> Esterilizar la superficie externa del ratón por la limpieza del animal con etanol al 70%. </li></ol> 2. Identificación y aislamiento de tres diferentes depósitos adiposos <ol><li> Tejido adiposo marrón (BAT) Aislamiento: <ol><li> Asegúrese de que la piel está húmeda de la limpieza de alcohol para ayudar a la corte a través de la epidermis y la dermis layers. </li><li> Coloque el ratón en una posición supina con la espalda contra la mesa. </li><li> Coge la piel justo debajo del diafragma con fórceps, ascensor y una incisión con tijeras. </li><li> Cortar transversalmente alrededor de la circunferencia del ratón para exponer el peritoneo. </li><li> Revelar la BAT depósito en forma de mariposa por degloving la mitad superior del ratón. Mantenga los apéndices inferiores y el abdomen en una mano y tirando de la piel hacia la cabeza. </li><li> Orientar el ratón, de modo que se coloca boca abajo en la mesa. Tenga cuidado de no contaminar el depósito expuesto con el pelo. </li><li> Instrumentos quirúrgicos limpios y el cambio a un nuevo par de guantes. </li><li> Busque la escápula y depósito correspondiente. Retire con cuidado el adiposo blanco superficial encima de la mariposa y luego diseccionar la mariposa de la grasa marrón interescapular. Tenga cuidado de evitar que el músculo estrechamente asociado con la grasa parda. NOTA: El uso de un microscopio de disección se recomienda para la eliminación de la white adiposo, así como en la separación de la adiposo marrón de las escápulas. </li><li> Quite la grasa de depósito y transferir a un tubo de microcentrífuga de 2 ml. </li><li> Si el ARN o proteína es a extraer, congelar el tejido por inmersión en nitrógeno líquido y se almacena a -80 ° C. Congelar la muestra a la vez para evitar la degradación. Si el cultivo, cubrir el tejido en DMEF-12 y establecer en hielo hasta que se recogen todas las muestras para cultivo (información complementaria). </li></ol></li><li> Aislamiento de tejido adiposo subcutáneo (SC), un blanco tejido adiposo Depot (WAT): <ol><li> Póngase un par de guantes nuevos como a la contaminación cruzada entre los depósitos de grasa. </li><li> Revelar la inguinal, depósitos SQ triangulares por DE-enguantado la mitad inferior del ratón. Mantenga los apéndices superiores y tórax en una mano y tirando de la piel hacia abajo hacia los pies con la otra mano. </li><li> Oriente el ratón en una posición supina con cuidado de no contaminar el depósito expuesto con el pelo. </li><li> Surgica Cleaninstrumentos l y el cambio a un nuevo par de guantes. </li><li> Diseccionar cuidadosamente los triángulos de grasa SQ. Tenga cuidado de no contaminar la muestra con el músculo, la vecina de grasa, glándulas mamarias o cortando cualquier barco y contaminar la muestra de sangre. NOTA: El uso de un microscopio de disección se recomienda si las fronteras no están claramente definidos. </li><li> Retire los depósitos de grasa y la transferencia a 2 ml tubos de microcentrífuga. </li><li> Si el ARN o proteína es a extraer, congelar el tejido por inmersión en nitrógeno líquido y se almacena a -80 ° C. Congelar la muestra a la vez para evitar la degradación. </li><li> Para la tinción, arreglar o incrustar en octubre Si el cultivo, cubrir el tejido en DMEF-12 y establecer en hielo hasta que se recogen todas las muestras para cultivo (información complementaria). </li></ol></li><li> Aislamiento de gonadal Fat un tejido adiposo visceral (IVA) y el tejido adiposo blanco (WAT) Depot: <ol><li> Póngase un par de guantes nuevos como a la contaminación cruzada entre los depósitos de grasa. </li><li> Con cienciassors, cortar el peritoneo transversalmente, directamente debajo del diafragma. Cortar el peritoneo desde el diafragma hasta mediados recto coronalmente para exponer los órganos abdominales. </li><li> Localizar los testículos o los ovarios e identificar el tejido adiposo blanco adjunto, conocido como el adiposo del epidídimo en varones o adiposo gonadal en las hembras. </li><li> Instrumentos quirúrgicos limpios y el cambio a un nuevo par de guantes </li><li> Diseccionar cuidadosamente ambos depósitos de grasa del epidídimo de los testículos, epidídimos y conductos deferentes. O si es mujer, diseccionar cuidadosamente ambas almohadillas de grasa gonadal de los ovarios. </li><li> Retire los depósitos de grasa y transferirlos a 2 tubos de microcentrífuga ml. </li><li> Si el ARN o proteína es a extraer, congelar el tejido por inmersión en nitrógeno líquido y se almacena a -80 ° C. Congelar la muestra a la vez para evitar la degradación. </li><li> Para la tinción, arreglar o incrustar en octubre Si el cultivo, cubrir el tejido en DMEF-12 y establecer en hielo hasta que se recogen todas las muestras para cultivo (información complementaria). </li&gt; </ol></li></ol> 3. Aislamiento de tejido adiposo perivascular (IVAP) <ol><li> Aislamiento del Corazón: <ol><li> Coloque el ratón en una posición supina con apéndices superior e inferior extendidas hacia afuera. </li><li> Apéndices Seguros que utilizan una cinta quirúrgica. </li><li> Después de colocar el ratón como se indica anteriormente, crear tensión levantando el proceso xifoides con fórceps. Cortar horizontalmente a través del diafragma, la exposición de la parte inferior de la cavidad torácica. </li><li> Mientras mantiene la tensión, levantando el proceso xifoides, cortar a través de la caja torácica superiormente hacia la cabeza, sólo para el lado del esternón. </li><li> Recoger la caja torácica justo por debajo de la clavícula, y cortar a lo largo de la longitud inferior de la clavícula hacia fuera hacia la axila en ambas direcciones. La cavidad torácica y su contenido (corazón, pulmones, etc.) deben ahora ser claramente visible. </li><li> Limpie la cavidad torácica de la sangre ajena y líquido utilizando ga estériluze para absorber el fluido. Si órganos o recipientes colectores asegúrese de profuso (información complementaria). </li><li> Una vez que el área se borra de líquido, cortar los vasos y bronquios de fijación para eliminar los pulmones, lo que permite una mejor exposición del corazón. </li></ol></li><li> Localización y Escisión de tejido adiposo perivascular aórtica (IVAP): <ol><li> Quite los siguientes órganos como para identificar mejor las porciones inferiores de la aorta: hígado, estómago, bazo, páncreas, intestinos y colon. </li><li> En primer lugar comenzar con la identificación del estómago y el esófago. Cortar el esófago en la unión gastro-esofágica para liberar el estómago del cuerpo. </li><li> A continuación, identificar los intestinos y el mesenterio circundante. Cortar superficialmente a través de mesenterio, ya que se encuentra muy de cerca a la porción renal de la aorta, luego &quot;ejecutar el intestino.&quot; </li><li> Cortar el colon libre como cerca del recto posible. Por lo tanto, liberando el estómago, intestino y colon de ratón. </li><li> Remover el estómago, intestino, colon, páncreas y el bazo cortando a través del mesenterio de fijación y los vasos. El páncreas y el bazo deben venir libre con el estómago, intestino y colon. </li><li> Retire el hígado por el corte a través de las venas hepáticas y adjuntando mesenterio, retire todos los lóbulos. </li><li> Cortar la capa visceral y la grasa rodean los riñones. Deja los riñones unidos a la aorta in vivo para servir como marcadores geográficos para los diferentes segmentos de la aorta. </li><li> Enjuague el área con 1x PBS estéril y eliminar todo el fluido por absorción con una gasa estéril. </li><li> El uso de micro-tijeras y micro-pinzas, separar la aorta de su apego a la espina dorsal y su enganche ventral al esófago. </li><li> Aislar la aorta siguiendo y desconexión de la aorta de la longitud de la aorta descendente desde el origen en el corazón hasta la bifurcación en la región ilíaca. </li><li> Identificar y aislar los vasos subclavia. Aislar estas embarcacionesdesde el cuello hasta la raíz aórtica para exponer mejor la unión aórtica y la raíz en el corazón. </li><li> Retire el timo a continuación, cortar el tronco braquiocefálico, la arteria carótida común izquierda y la arteria subclavia izquierda, permitiendo el movimiento del corazón. </li><li> Con la ayuda de un microscopio de disección, ver la capa de tejido adiposo perivascular (IVAP) que rodea la aorta. </li><li> Teniendo mucho cuidado para no pellizcar o apretar el IVAP, tire suavemente de la manera IVAP de la aorta con micro-forceps. Cortar suavemente la fijación de la IVAP a la aorta con micro-tijeras a partir de la región torácica justo por encima de donde se encuentra el diafragma. NOTA: Se recomienda utilizar un microscopio de disección. </li><li> Repita este proceso toda la longitud de la aorta, terminando en la región de la aorta infrarrenal, que se encuentra justo por encima de la bifurcación ilíaca del vaso aórtico. </li><li> Si se desea arco IVAP aórtica, que se utiliza el mismo método para eliminar el IVAP de la menor curvature del arco. </li><li> Coloque las muestras IVAP en 2 ml tubo (s) de microcentrífuga. </li><li> Si el ARN o proteína es a extraer, congelar el tejido por inmersión en nitrógeno líquido y se almacena a -80 ° C. Congelar la muestra a la vez para evitar la degradación. Si el cultivo, cubrir el tejido en DMEF-12 y establecer en hielo hasta que se recogen todas las muestras para cultivo (información complementaria). NOTA: los depósitos adiposos adicionales a tener en cuenta si está interesado en un análisis exhaustivo de depósito adiposo incluye: retroperitoneal, mesentérica, omental, pericárdico y poplítea. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Ogden, C. L., Carroll, M. D., Kit, B. K., Flegal, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+obesity+in+the+United+States%2C+2009-2010%5BTitle%5D)+AND+%22NCHS+Data+Brief%22%5BJournal%5D)">Prevalence of obesity in the United States, 2009-2010.</a> NCHS Data Brief. 82, 1-8 (2012).</li>
<li>Flegal, K. M., Carroll, M. D., Kit, B. K., Ogden, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+obesity+and+trends+in+the+distribution+of+body+mass+index+among+US+adults%2C+1999-2010%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Prevalence of obesity and trends in the distribution of body mass index among US adults, 1999-2010.</a> 307 (5), 491-497 (2012).</li>
<li>Cawley, J., Meyerhoefer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+medical+care+costs+of+obesity%3A+an+instrumental+variables+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Health+Economics%22%5BJournal%5D)">The medical care costs of obesity: an instrumental variables approach.</a> Journal of Health Economics. 31 (1), 219-230 (2012).</li>
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<li>Giralt, M., Villarroya, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((White%2C+brown%2C+beige%2Fbrite%3A+different+adipose+cells+for+different+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">White, brown, beige/brite: different adipose cells for different functions.</a> Endocrinology. 154 (9), 2992-3000 (2013).</li>
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<li>Grant, R., Youm, Y. H., Ravussin, A., Dixit, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+adipose+tissue+leukocytosis+in+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Quantification of adipose tissue leukocytosis in obesity.</a> Methods Mol. Biol. 1040, 195-209 (2013).</li>
</ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros contrapuestos u otros conflictos de intereses.

La obesidad puede conducir a una gran cantidad de morbilidades y la plena comprensión del papel que juega adiposo no se entiende completamente; Por lo tanto, la investigación continuada en el campo de la adiposo es necesario. Los modelos animales, específicamente modelos murinos son ideales para la investigación inicial en la progresión de las enfermedades y las pruebas de los posibles tratamientos farmacéuticos. En el uso de estos modelos, el aislamiento y la escisión precisa de los depósitos de tejido adiposo es una h...

Adiposo hizo una aparición notable en la atención de los medios, debido al aumento espectacular de la obesidad durante las últimas décadas del siglo 20. La obesidad afecta actualmente a más de un tercio de los adultos y el 17% de los niños y adolescentes en los Estados Unidos (US) 1. Que abarca todos los grupos étnicos, la investigación estadística que rodea la epidemia de la obesidad se ha demostrado que los negros no hispanos tienen la tasa ajustada por edad más alta de obesidad (49,5%) en comparación con los mexicano-americanos (40,4%), los hispanos (39.1%), y no los blancos no hispanos (34,3%) 2. El efecto económico de la obesidad es también una preocupación cada vez mayor para el sistema sanitario. En 2012, se estimó que el costo anual de la atención médica para la obesidad en los EE.UU. en 2005 fue de $ 190,2 mil millones, casi el 21% del presupuesto total de los gastos médicos. Tristemente, la obesidad infantil se estima que es responsable por $ 14 mil millones en costos médicos directos solo. Estadísticamente, se determinó que el costo médico promedio deindividuos con obesidad fue $ 2,741 superior al año que aquellos sin esta morbilidad 3-5. La obesidad es un factor de riesgo importante para una variedad de condiciones tales como: la diabetes tipo 2, dislipidemia, enfermedad cardiovascular, cáncer, trastornos esqueléticos musculares y la inflamación crónica. La obesidad está profundamente ligada a la patogénesis del síndrome metabólico y otras enfermedades crónicas 6-8. Con este tipo de conexiones drásticas y negativas entre la obesidad y otras comorbilidades, la investigación científica ha centrado la atención para comprender mejor la epidemia actual y los papeles diversos y esencial desempeñada por adiposo. Históricamente, el tejido adiposo se considera intrascendente y fue visto simplemente como un tejido simple relleno. Actualmente, adiposo se ha demostrado que desempeñan muchas funciones esenciales en la función del cuerpo en: metabolismo, la regulación hormonal, la inflamación, la protección y el aislamiento 9. El tejido adiposo está compuesto principalmente deadipocitos, pero también contiene los pericitos, células endoteliales, monocitos, macrófagos y células madre pluripotentes 8. El tejido adiposo se distribuye por todo el cuerpo en depósitos distintos. Los principales depósitos se pueden encontrar por vía subdérmica, subcutánea, intramuscular, y visceral 10. Depósitos adiposos se han demostrado tener unos perfiles metabólicos específicos de depósito, que han demostrado una susceptibilidad específica de depósito a la obesidad y trastornos relacionados 8. Tradicionalmente, el tejido adiposo se ha clasificado en dos tipos principales: tejido adiposo blanco (WAT) y tejido adiposo marrón (BAT); aunque la literatura reciente indica las presencias de un tercer grupo bautizaron adiposo brite o beige 11. El tejido adiposo se ha demostrado que tienen diferentes colores, morfologías, funciones metabólicas, las características bioquímicas y patrones de expresión genéticos 10. Los adipocitos en WAT tienen un único y gran gotas de lípidos y cantidades variables de las mitocondrias. WATse encuentra predominantemente en las localidades subcutáneos y viscerales del cuerpo. Funciones WAT principalmente como un sitio de almacenamiento de energía y la protección de órganos. Los adipocitos en BAT tienen una morfología multilocular y abundantes mitocondrias. BAT se encuentra principalmente en el cuello y los grandes vasos sanguíneos del tórax, así como las escápulas 12. BAT funciona principalmente en los comportamientos de gastar energía que regulan la termogénesis 7. Adiposo Brite o beige se ha demostrado que compartir una morfología y la expresión análoga a BAT pero se ha encontrado para ser originado a partir de adipocitos blancos 11. El método quirúrgico se describe en este manuscrito proporciona a los investigadores la capacidad de analizar los diferentes efectos que factores tales como: medio ambiente, productos farmacéuticos, y la genética, tienen sobre adiposo; así como el papel adiposo beneficioso o perjudicial juega en la enfermedad y la salud en general. Además, proporcionando una manera de identificar y aislar diferentes tipos de tejido adiposo parapermitirá comprender mejor las relaciones bioquímicas y diferencias entre los depósitos. Esto puede ayudar en la determinación de la relación entre la ubicación, la función y tipos de grasa en el cuerpo. Este método descrito logra esto proporcionando los medios para la visualización bruto, el análisis de la expresión génica, análisis de la expresión de proteínas, el examen histológico, y el aislamiento de líneas celulares primarias para estudios in vitro. Actualmente hay muchos artículos que proporcionan información sobre el comportamiento metabólico de los diferentes depósitos de tejido adiposo, así como sus localizaciones anatómicas; pero no proporcionan un método en profundidad sobre cómo localizar de forma específica, identificar y aislar a estos depósitos. Este método proporciona una técnica quirúrgica precisa que permite el aislamiento de múltiples depósitos con una cantidad mínima de la disección y la contaminación en comparación con otros métodos diseñados para el aislamiento de uno o dos depósitos 13-14. El objetivo de este protocolo es proporcionarun método preciso para la identificación y el aislamiento de diferentes tipos de depósitos de grasa desde múltiples localizaciones anatómicas.

<table><tbody><tr><td>Isoflurano</td><td>Med-Vet International</td><td>#RXISO-250</td><td></td></tr><tr><td>70% Etanol</td><td>Fisher</td><td>07-678-001</td><td></td></tr><tr><td>DMEF-12</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D-6421</td><td>Calentar en baño de agua antes de colocar el pañuelo</td></tr>.<tr><td>2 ml Tubos de microcentrífuga</td><td>Midsci</td><td>MCT-200-C-S</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5368-10PAK</td><td></td></tr></tbody></table>

localización, identificación y escisión de depósitos adiposos murino

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

La obesidad ha aumentado drásticamente en las últimas décadas y afecta a más de un tercio de la población adulta de EE. UU. El efecto económico de la obesidad en 2005 alcanzó la asombrosa suma de 190.200 millones de dólares sólo en costos médicos directos. La obesidad es un factor de riesgo importante para una amplia gama de enfermedades. Históricamente, se sabía poco sobre el tejido adiposo y sus funciones principales y esenciales en el cuerpo. El tejido adiposo marrón y blanco son los dos tipos principales de adiposo, pero la literatura actual ha identificado un nuevo tipo de grasa llamada brite o adiposo beige. La investigación ha demostrado que los depósitos de adiposo tienen perfiles metabólicos específicos y ciertos depósitos permiten una propensión a la obesidad y otros trastornos relacionados. El objetivo de este protocolo es dotar a los investigadores de la capacidad de identificar y extirpar depósitos adiposos que permitan analizar diferentes efectos factoriales sobre el tejido adiposo; así como el papel beneficioso o perjudicial que desempeña el adiposo en las enfermedades y la salud en general. El aislamiento y la escisión de los depósitos de tejido adiposo permiten a los investigadores observar los cambios morfológicos macroscópicos, así como los cambios histológicos. El aislado adiposo también se puede utilizar para estudios moleculares para evaluar el cambio transcripcional y traslacional o para la experimentación in vitro para descubrir dianas de interés y mecanismos de acción. Esta técnica es superior a otras técnicas publicadas debido a que el diseño permite el aislamiento de múltiples depósitos con simplicidad y mínima contaminación.

Identificación y localización de inguinal adiposo subcutáneo, tejido adiposo marrón interescapular, adiposo del epidídimo visceral (Figura 1), así como el adiposo perivascular arco aórtico, la aorta torácica adiposo, tejido adiposo aórtica suprarrenal y el tejido adiposo de la aorta infrarrenal (Figura 2) se logró con éxito utilizando el método quirúrgico descrito. El examen histológico y la diferenciación entre muestras MTD y WAT fueron evaluados positivamente mediante hematoxilina y e...

Debido a la conexión drástico y negativo entre la obesidad y otras comorbilidades, la investigación sobre el papel adiposo desempeña en la enfermedad y la salud en general se justifica. Se presenta un protocolo para el aislamiento y la escisión de los depósitos de tejido adiposo que permitan el estudio de tejido adiposo usando in situ y métodos in vitro.

Localización, identificación y Escisión de depósitos adiposos murino

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

El objetivo general de este procedimiento es demostrar la identificación y escisión del depósito adiposo para el análisis de diferentes efectos factoriales sobre y por el tejido adiposo. Esto se logra exponiendo primero los órganos internos y los depósitos adiposos de un ratón adulto. En el segundo paso, se extraen los órganos y el tejido superfluo para exponer mejor los depósitos, lo que permite la identificación de los depósitos en sus ubicaciones correspondientes.En el paso final, se extrae el tejido adiposo con especial cuidado para evitar la contaminación. En última instancia, el aislamiento y la escisión de estos depósitos proporcionan tejido para el análisis histológico, la expresión de proteínas, la actividad enzimática y el análisis de expresión génica, así como para estudios in vitro. La principal ventaja de este protocolo en particular sobre las metodologías existentes es que permite el aislamiento de múltiples depósitos con una disección mínima, así como una contaminación mínima.Por lo tanto, este procedimiento puede ayudar a responder preguntas sobre el campo de la obesidad. Por ejemplo, los efectos perjudiciales o incluso beneficiosos del tejido adiposo sobre las enfermedades humanas. Para aislar el tejido adiposo marrón, comience colocando un ratón adulto con etanol, limpio y eutanasiado en posición supina con la espalda contra la mesa.Luego, use fórceps para levantar la piel justo debajo del diafragma e incida la piel con unas tijeras. Corte transversalmente alrededor de la circunferencia del ratón para exponer el peritoneo. Luego, sosteniendo los apéndices inferiores y el abdomen con una mano, tire de la piel hacia la cabeza con la otra mano para degüelle la mitad superior del ratón revelando el depósito adiposo marrón en forma de mariposa o murciélago.A continuación, localiza el escapo y el depósito de murciélagos correspondiente. A continuación, utilice un microscopio de disección para eliminar cuidadosamente cualquier tejido adiposo blanco superficial en la parte superior de la mariposa y diseccionar la grasa marrón interescapular, teniendo cuidado de evitar cualquier músculo asociado. Para aislar el tejido subcutáneo o subq adiposo, sostenga los apéndices superiores y el tórax con una mano, y tire de la piel hacia los pies con la otra mano para degüelle la mitad inferior del ratón y revele los depósitos triangulares de subq inguinal.A continuación, vuelva a colocar el ratón en posición supina y diseccione cuidadosamente los triángulos de grasa subq para aislar la grasa gonadal de la cavidad abdominal. Use unas tijeras para cortar el peritoneo transversalmente directamente debajo del diafragma. A continuación, corte el peritoneo desde el diafragma hasta el recto, a mitad de la corona para exponer los órganos abdominales y diseccione cuidadosamente ambos depósitos de grasa epidérmica de los testículos epi y vasa deia.Para aislar el tejido adiposo perivascular, mantenga al animal en posición supina y extienda los apéndices superior e inferior hacia afuera. A continuación, levante la apófisis xifoides con pinzas para crear tensión en la parte superior del cuerpo y corte horizontalmente a través del diafragma, exponiendo la parte inferior de la cavidad torácica. Corta a través de la caja torácica superiormente hacia la cabeza, justo al lado del esternón, y luego levanta la caja torácica justo por debajo de la clavícula.Corte a lo largo de la longitud inferior de la clavícula hacia la axila en ambas direcciones. La cavidad torácica y su contenido ahora deben ser claramente visibles. Una vez que el área esté limpia de líquido, corte los bronquios y los vasos adjuntos para extraer los pulmones y exponer el corazón.Después de identificar el estómago y el esófago, corte el esófago en la unión gastroesofágica para liberar el estómago. A continuación, identifique los intestinos y el mesenterio circundante. Corta superficialmente a través del mesenterio y luego corta el colon lo más cerca posible del recto para liberar el estómago, el intestino, el colon, el páncreas y el bazo.Cuando se hayan extirpado los órganos, se cortan las venas hepáticas y el mesenterio de conexión y se extirpan todos los lóbulos del hígado. Corta la capa visceral y la grasa que rodea los riñones, dejando los riñones unidos a la aorta in vivo para que sirvan como marcadores geográficos para los diferentes segmentos de la aorta. Luego, cuando el área alrededor de los riñones esté despejada, use microtijeras y micropinzas para separar la aorta de su unión dorsal a la columna vertebral y su unión ventral al esófago.En el tórax, siga y separe la aorta desde su origen en el corazón hasta la bifurcación en la región ilíaca. Para aislar el tejido adiposo aórtico, en este punto, se pueden identificar los vasos subclavios. Aísle estos vasos desde el cuello hasta la raíz aórtica para exponer mejor la unión aórtica y la raíz en el corazón.A continuación, se extirpa el timo y se corta la braquiocefálica, la carótida común izquierda y la subclavia izquierda para permitir el movimiento del corazón. Por último, use un microscopio de disección para ver el tejido adiposo perivascular o la capa P VVA T que rodea la aorta. A continuación, utilice micropinzas para separar suavemente el tejido de la aorta y microtijeras para cortar suavemente la unión del PVAT a la aorta empezando por la región torácica, justo por encima de donde se encuentra el diafragma.A continuación, utilice micropinzas para separar suavemente el tejido de la aorta y microtijeras para cortar suavemente la unión del PVAT a la aorta, empezando por la región torácica justo superior a donde se encuentra el diafragma. Repita este proceso a lo largo de toda la aorta terminando en la región aórtica infrarrenal, situada justo por encima de la bifurcación ilíaca del vaso aórtico e inferior a las ramas renales murciélago. Y las muestras se pueden diferenciar por análisis histológico con tinción h y e, líneas celulares primarias de adipocitos subcutáneos y perivasculares.A continuación, los adipocitos se pueden cultivar y diferenciar de preadipocitos a adipocitos para el análisis de microarrays. En estas imágenes representativas, por ejemplo, se confirmó la conversión de preadipocitos cultivados en adipocitos con tinción de rojo O con rojo aceite, los adipocitos aislados, cultivados y diferenciados por este método se pueden utilizar para análisis posteriores in vitro. En este experimento representativo, se observó que la actividad enzimática de MM P dos disminuyó en los adipocitos perivasculares aislados en respuesta a un tratamiento experimental en comparación con los controles no tratados.Al intentar este procedimiento, es importante recordar cambiar los guantes y limpiar los instrumentos con frecuencia para minimizar la contaminación. Por lo tanto, después de recolectar estos tejidos, se pueden realizar una variedad de procedimientos en ellos. Por ejemplo, el cultivo celular, el análisis histológico, la medición de proteínas e incluso la expresión génica.Y luego esos resultados se pueden usar para ayudar a comprender la relación, las similitudes y diferencias entre los diferentes depósitos.

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En este video, demostramos el procedimiento quirúrgico para aislar el tejido adiposo blanco subcutáneo y el tejido adiposo marrón interescapular de un ratón recién nacido.

Colección de depósito de tejido adiposo blanco y marrón de un cachorro de ratón: un procedimiento quirúrgico para recolectar el tejido adiposo blanco y el tejido adiposo marrón de un cachorro de ratón

El tejido adiposo (AT) puede influir en la homeostasis de todo el cuerpo, por lo tanto, es importante comprender los mecanismos moleculares de la diferenciación y función de los adipocitos. Proporcionamos un protocolo para obtener nuevos conocimientos sobre estos procesos mediante el análisis de la homeostasis, la diferenciación y la exposición a la hipoxia de los adipocitos como modelo para la apoptosis inducida de los adipocitos.

Mecanismo de regulación de los números de adipocitos en los organismos adultos a través de diferenciación y apoptosis La homeostasis

Presentamos las técnicas necesarias para aislar la fracción vascular estromal (FSV) de los depósitos de tejido adiposo inguinal (subcutáneo) y perigonadal (visceral) de ratón para evaluar su expresión génica y actividad colagenolítica. Este método incluye el enriquecimiento de células madre derivadas de alto tejido adiposo (ASC) Sca1 mediante separación celular inmunomagnética.

La separación inmunomagnética de Sca1 depósitos de grasa específica<sup&gt; alta</sup&gt; Células Madre derivadas de tejido adiposo (ASC)

Los adipocitos existen en depósitos discretos y tienen diversos roles dentro de sus microambientes únicos. A medida que se descubren las diferencias regionales en el carácter y la función de los adipocitos, la identificación y el aislamiento estandarizados de los depósitos es crucial para el avance del campo. Aquí, presentamos un protocolo detallado para la escisión de varios depósitos adiposos de ratón.

Identificación y disección de diversos depósitos de adipose de ratón

El objetivo de este protocolo es sintetizar liposomas marcados con fluorescencia y utilizar la citometría de flujo para identificar la localización in vivo de liposomas a nivel celular.

Preparación, administración y evaluación de la captación celular in vivo específica del tejido de liposomas marcados con colorante fluorescente

Este protocolo describe el enfoque técnico para aislar subpoblaciones de células estromales adipogénicas y fibroinflamatorias de depósitos murinos de tejido adiposo blanco intraabdominal (WAT) mediante clasificación celular activada por fluorescencia o separación inmunomagnética de perlas.

Aislamiento de subpoblaciones de células estromales adipogénicas y fibroinflamatorias de depósitos adiposos intraabdominales murinos

Este protocolo detalla un método para la disección de depósitos adiposos de ratón y el aislamiento y la digestión de las arterias respectivas para liberar y luego identificar la población de células endoteliales. Las células recién aisladas utilizadas en aplicaciones posteriores avanzarán en la comprensión de la biología celular vascular y los mecanismos de la disfunción vascular.

Aislamiento e identificación de células endoteliales vasculares de distintos depósitos adiposos para aplicaciones posteriores

Este protocolo describe el aislamiento semiautomático de la fracción vascular estromal (SVF) del tejido adiposo murino para obtener preadipocitos y lograr la diferenciación de los adipocitos in vitro. El uso de un disociador de tejidos para la digestión de la colagenasa reduce la variación experimental y aumenta la reproducibilidad.

Aislamiento semiautomático de la fracción vascular estromal del tejido adiposo blanco murino utilizando un disociador tisular

Aquí, proporcionamos un procedimiento práctico para diseccionar y realizar análisis histológicos y de expresión génica del tejido adiposo marrón supraclavicular murino.

Disección, procesamiento histológico y análisis de expresión génica del tejido adiposo marrón supraclavicular murino

El tamaño y la fragilidad de los adipocitos maduros han limitado las técnicas y herramientas disponibles para su estudio y aislamiento. En este trabajo se describe un protocolo para el aislamiento de adipocitos murinos maduros, que puede adaptarse fácilmente a diferentes depósitos de adiposo y dietas de ratones.

Aislamiento y cultivo de adipocitos murinos primarios de ratones delgados y obesos

Aprende a localizar e identificar depósitos adiposos en ratones adultos con mínima disección y contaminación. Este protocolo permite análisis histológicos, de expresión proteica y estudios in vitro del tejido adiposo.

Localización, identificación y Escisión de depósitos adiposos murino

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