Limb remoto Preacondicionamiento Isquémico: una técnica neuroprotector en roedores

El objetivo general de este procedimiento es administrar isquemia en la extremidad posterior que condiciona los tejidos remotos contra el estrés posterior. Por ejemplo, la retina contra las lesiones leves. Esto se logra calibrando primero el manómetro manual Ingle mom.

A continuación, se anestesia al animal y se le coloca una almohadilla térmica. A continuación, se extiende la pata trasera del animal y se coloca el manguito en su posición. Finalmente, la isquemia remota se realiza inflando el manguito con la bomba, desinflando el manguito y repitiendo el proceso por segunda vez.

En última instancia, cuando se aplica antes de la lesión por luz, la isquemia remota se utiliza para mostrar una mejora en la función de la retina y en el número de fotorreceptores que sufren apoptosis. Este método puede responder a preguntas clave en el campo de la neurociencia, como por ejemplo cómo se induce la autoprotección con el preacondicionamiento isquémico a distancia para llevar a cabo el seguimiento de la temperatura de la piel en tiempo real. Abra el software de registro de temperatura, ajuste la temperatura a entre 30 y 35 grados centígrados y la frecuencia de muestreo a cada 100 milisegundos usando un brazalete neonatal de tamaño dos para una rata de 250 a 550 gramos, conecte el manguito al manómetro fome usando un adaptador si es necesario.

A continuación, desinfle el manguito aflojando la válvula de liberación de aire o desconectando el tubo del manguito del adaptador. Asegúrese de que no quede presión en el tubo y que la aguja del manómetro descanse en cero dentro del rectángulo ovalado. Luego, para verificar la presión entre el tubo, el manómetro y la tos.

Use bombeos suaves de la bombilla de inflado para inflar el brazalete hasta que el manómetro marque 100 miligramos de mercurio. Después de asegurarse de que la presión se mantenga constante, desinfle el manguito abriendo lentamente la válvula de liberación de aire después del anochecer, adaptando al animal de acuerdo con el protocolo de texto. Confirme que tiene un buen tono muscular pellizcando la extremidad trasera superior para confirmar que hay suficiente músculo presente.

Después de sedar al animal de acuerdo con el protocolo de texto, verifique la profundidad de la anestesia extendiendo la pata y pellizcando la piel en la parte inferior del pie. A continuación, aplica lágrimas artificiales. Coloque a la rata en una almohadilla térmica o en un tubo de calentador de agua circulante en posición prona con las almohadillas de los pies de las extremidades inferiores hacia arriba.

Para aplicar la sonda de temperatura de la piel, extienda la pata de la rata que sufrirá isquemia y coloque firmemente la sonda de piel en la almohadilla del pie, colocándola para maximizar el contacto entre la sonda de temperatura y la piel. A continuación, utilice cinta de papel para fijar la sonda. Verifique la ubicación de la sonda cutánea rastreando la temperatura en el software de registro de temperatura durante uno o dos minutos.

Asegúrese de que la temperatura de la piel esté entre 30 y 34 grados centígrados y se mantenga estable. De lo contrario, ajuste la sonda para realizar la isquemia a distancia. Comience con un manguito desinflado y asegúrese de que la válvula de presión de aire esté cerrada.

Extienda la pierna y rodee sin apretar el manguito en la extremidad trasera superior. Use el dedo índice y el pulgar para extender la pierna y los dedos inferiores para mantener el brazalete aflojado en su posición. Ahora, aumente la presión del manguito a 160 milímetros de mercurio.

Una vez que se alcance la presión correcta, inicie el temporizador y los registros de la temperatura del pie. La temperatura del pie debe descender dos grados centígrados después de cinco minutos de presión constante, bombear repetidamente la bombilla de inflado en ráfagas cortas para mantener la presión deseada en el manguito y mantener la posición del manguito por encima de la rodilla del animal durante toda la isquemia. Administre isquemia remota de forma continua durante cinco minutos.

A continuación, suelte la válvula de presión de aire para una reperfusión de cinco minutos antes de repetir la isquemia a distancia. Una vez finalizado el procedimiento, desinfle la presión del manguito aflojando la válvula de presión de aire. Comprobar el cambio de temperatura a lo largo del protocolo de isquemia.

A continuación, suelte el brazalete. Coloque al animal sobre una almohadilla térmica y continúe monitoreando hasta que esté ambulatorio. Cuando el animal esté caminando, devuélvalo a su alojamiento.

Por último, realice una lesión leve y realice el ensayo de túnel. De acuerdo con el protocolo de texto, como se ve claramente aquí, un manguito de presión arterial colocado por encima de la rodilla elevado a más de 160 milímetros de mercurio detiene el flujo sanguíneo a la extremidad trasera. La falta de flujo sanguíneo resultó en una reducción en la temperatura del pie que era más baja que la temperatura central del animal, y que aumentó después de que el manguito se desinfló, lo que concuerda con la condición necesaria para la RIP.

En esta figura, el electrorretinograma adaptado a la oscuridad o ERG de una rata normal y tenue mostró un gran fotorreceptor y una respuesta retiniana interna a un destello brillante una semana después de la lesión por luz. Los registros de ERG mostraron una reducción severa en la amplitud en relación con los controles, lo que refleja la pérdida de fotorreceptores, sin embargo, el precondicionamiento de la extremidad posterior con isquemia utilizando un protocolo de reperfusión de dos por cinco minutos inmediatamente antes de la isquemia protegió a los fotorreceptores de lesiones leves. Este panel muestra que las amplitudes R-I-P-E-R-G fueron mayores que las lesiones leves solas, con una ligera reducción de la onda A.

Por último, un brazalete colocado por debajo de la rodilla no protege a los fotorreceptores de las lesiones leves, como se refleja en las amplitudes ERG reducidas que se ven aquí. Se pueden realizar métodos como el preacondicionamiento isquémico a distancia para responder a preguntas adicionales, como cuáles son los mecanismos de neuroprotección endógena y cómo se puede aplicar la isquemia a distancia para mejorar la función de la lesión y la degeneración del SNC.