La medición de la función del músculo liso en el tejido aislado Bath-aplicaciones en Farmacología Investigación

El objetivo general de este procedimiento es medir el tono del músculo liso. Esto se logra primero diseccionando y preparando los tejidos. El segundo paso es montar el tejido en un baño de tejido aislado.

Luego se prueba la viabilidad del tejido y se toman medidas isométricas de contracción. En última instancia, la preparación del baño de tejido aislado se utiliza para probar la función del receptor, la señalización del receptor y la reactividad del músculo liso. En general, las principales ventajas de esta técnica son la flexibilidad del sistema, la rapidez para lograr resultados y mantener todo el tejido intacto.

Este método puede ayudar a responder preguntas clave En cualquier campo que utilice drogas para interferir con los receptores de señalización o el músculo liso del alma, hay algunas preparaciones que deben enfatizarse. Es vital precalentar el sistema de baño de pañuelos a 37 grados centígrados encendiendo el baño de agua caliente de recirculación. El agua debe fluir hacia cada componente en la conexión de púas más baja y fluir hacia afuera en la conexión de púas más alta.

Cada componente debe estar conectado. Los transductores de fuerza deben calibrarse y también deben encenderse al menos 15 minutos antes del experimento para que su temperatura alcance un equilibrio. A continuación, al conectar el gas, verifique si hay fugas, luego presurice el sistema.

Después de llenar el sistema con solución, asegúrese de cebarlo y eliminar las burbujas de aire. También se justifica la prueba de los aireadores de baño de tejido. Una buena aireación distribuirá los fármacos de manera efectiva, pero no desestabilizará el tejido inmediatamente antes del experimento.

Disecciona el tejido. Después de anestesiar a la rata, crea un neumotórax con unas tijeras. Maldice a lo largo del diafragma en la parte inferior de la caja torácica.

A continuación, corte desde la parte inferior de la caja torácica hasta el esternón y divida el tejido en dos. Limpie los órganos sobre la columna vertebral para ubicar la aorta, que se encuentra directamente a lo largo de la columna vertebral. Ahora corte todas las conexiones a la aorta y corte la aorta perpendicular a la columna vertebral a la altura del diafragma.

A continuación, sostenga suavemente la aorta y diseccione la aorta de la columna vertebral. Comience en el área inferior del diafragma adyacente a la columna vertebral y avance hacia el corazón. Solo tenga cuidado de no tirar o tirar del tejido aórtico porque eso puede dañarlo de inmediato.

Coloque la aorta en una placa de disección que contenga PSS. Ahora toma un cable y haz un pequeño ángulo de 90 grados. En un extremo, ancla el extremo en ángulo del alambre en la base del plato de disección.

A continuación, introduzca con cuidado el cable guía en la luz de la aorta y deslice la aorta sobre el cable. Cuando el extremo libre del alambre se haga visible, dóblalo suavemente y empújalo hacia la base, estabilizando así el tejido. Ahora, con unas tijeras y pinzas de Venus, extirpe el tejido adiposo perivascular y otros tejidos extraños hasta que la aorta torácica aparezca blanca y algo fibrosa.

Una vez que se haya limpiado el exceso de tejidos, retire con cuidado la aorta limpia del alambre. Termina esta sección cortando la aorta en anillos de tres a cinco milímetros de ancho. Un anillo aórtico de alcance.

Tener preparados dos ganchos de pañuelo con suturas para asegurarlo en la cámara de baño. Un gancho debe tener una sutura con un pequeño lazo anudado para sujetarlo a una varilla. El otro gancho necesita un trozo de sutura de 10 a 14 centímetros de largo.

Para hacer un nudo, coloque con cuidado un par de estos ganchos de tejido en cada anillo aórtico. Tenga cuidado de evitar enredar los ganchos. A continuación, transfiera cada pieza de pañuelo a un plato de PSS a temperatura ambiente con un soporte de pañuelo asegurado a un soporte de anillo.

A continuación, deslice el lazo anudado en la clavija de la varilla y use la pieza larga de sutura para sostener el tejido. Luego coloque la varilla en la cámara y asegúrese de que la varilla esté segura. Ahora, ate la sutura del gancho restante al transductor de fuerza.

Deje suficiente holgura en la sutura, de modo que el micrómetro pueda ajustar la tensión entre el transductor de fuerza y el tejido. Repita este proceso para cada anillo en cada cámara. Ahora, establece la tensión pasiva.

Use el micrómetro para aumentar la tensión a dos gramos y espere a que la tensión en el tejido deje de aumentar. Luego aumente la tensión en dos gramos más y, nuevamente, espere el cambio en la tensión. Para terminar.

La tensión ahora debería ser de alrededor de 3,2 gramos. Repita este proceso en cada anillo de cada cámara. Después de establecer todas las tensiones pasivas, deje que los tejidos se equilibren durante una hora.

Durante este tiempo, reemplace el PSS cada 15 minutos y haga otros preparativos para el experimento, como la preparación de los medicamentos al final del período de equilibrio. Lave el pañuelo por última vez, guarde los datos y rero todas las entradas. Luego, siguiendo los detalles del protocolo de texto, haga el desafío inicial.

Asegúrese de documentar estas acciones en el software. Después del desafío inicial, el cambio de tensión se estancará. A continuación, lava el fármaco de provocación para que el tono del tejido alcance una línea de base.

Deje reposar el pañuelo en este tono de referencia durante unos 10 minutos ahora a un baño en el vehículo en este caso, agua al otro. Agregue suficiente prazocina para una concentración de cinco nanomolares en el baño. Deje que los baños de tejido se incuben durante una hora sin lavar.

Mientras tanto, repare la fenolina en una amplia gama de concentraciones a lo largo de una curva logarítmica. Después de una hora, agregue el agonista de fenilrina en concentraciones crecientes al baño para generar una respuesta de concentración acumulativa. Después de cada adición, espere a que la respuesta del tejido se estabilice antes de agregar la siguiente concentración.

Siga haciendo adiciones hasta que ya no cambien el tono del tejido o hasta que toda la curva de respuesta se haya estabilizado. Más bien, la aorta torácica se incubó en el antagonista del receptor adrenérgico alfa uno POZ sim durante una hora antes de agregar el agonista adrenérgico alfa uno fenilrina al baño de tejidos y generar curvas de respuesta de contracción acumulativa de las contracciones máximas y medias máximas de fenilrina. Solo en el vehículo, los pañuelos de control están marcados en verde.

La mitad del máximo identifica la concentración efectiva para el medicamento. Las mismas medidas para el tejido tratado con razina se ven en negro. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo medir la función del músculo liso en un baño de tejido aislado.